羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值论文.docx

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羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值论文

　　一般资料选择2017年4月～2017年4月在本院产科就诊的具有产前诊断指征的178例孕妇，年龄20～47岁，孕周16～25周，有70例孕妇唐氏综合征筛查为阳性，23例孕妇有异常生育史，60例孕妇年龄≥35岁，14例妇女于早孕服药，6例孕妇神经管急性筛查为阳性，5例孕妇丈夫染色体异常。

　　方法

　　羊膜穿刺经b超定位后，在无菌条件下，用一次性羊水穿刺针行羊膜穿刺术。

舍弃最开始的2ml羊水，再抽取20～30ml的羊水放入2支无菌离心试管中。

　　羊水细胞培养以1000r/min的离心速度将2支无菌试管中的羊水进行离心处理达10min，舍弃上层清液，保留管内沉淀细胞和0.5ml羊水，加入20%胎牛血清及含张氏成分的5mlf10培养基，用细管使之混匀，将其接种于t-25的无菌试管中，在37℃有5%二氧化碳培养环境中进行培育，5d后观察细胞生长情况，若发现纤维状或者梭状细胞生长是，则可更换5ml新鲜培养液进行传代培养[2]。

　　收获细胞并进行制片在对羊水细胞进行培养6～7d后，在倒置的显微镜下对正在培养的羊水细胞进行观察，观察其生长情况，发现有不同大小的梭长形细胞正在进行克隆并生长，每个克隆过的细胞其生长状态良好并且已经形成细胞岛。

对培养皿中的培养液进行定时的更换，每天对细胞进行观察，在观察2～3d后，发现每个形成的细胞岛已经逐渐长成为透亮细胞，这些细胞较大，细胞融合度达到70%～80%，并且数目不等，形状多呈圆形或类圆形，这时即可对细胞进行收获。

在对细胞进行收获的前1d，更换新鲜培养液，在培养液中加入秋水仙素，使其浓度达到0.1mg/ml，在4～5h后，使用显微镜观察，发现培养液中出现大量的呈鱼眼状的细胞时，即可对细胞终止培养并进行收获。

加入0.25%的2ml胰酶消化液，在37℃的环境下放置5min，使得瓶壁上细胞脱落，再以1500r的转速离心处理8min，弃上清液。

加入1.5ml的0.4%枸缘酸钠和0.4%的氯化钾混合液低渗7min，滴片，常规g显带。

每张玻片有20～30个细胞分裂相，进行染色体核型分析，每例分析核型5个。

　　核型统计分析使用显微镜对细胞核型进行观察，常规技术分散良好的细胞核型有30个中期分裂相，细胞核型计数发生异常的则有50个分裂相，如出现≥2个细胞核型计数异常，则对所有分裂相进行计数，使用染色体核型分析软件对核型图像进行采集，对3～5个核型进行分析，并完成报告，为遗传咨询提供意见。