DNA的粗提取和鉴定-市级公开课.ppt

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5.1DNA5.1DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定一、基础知识一、基础知识

（一）提取

（一）提取DNADNA的方法的方法1.1.提取提取DNADNA的基本思路的基本思路利用利用利用利用DNADNA与与与与RNARNA、蛋白蛋白蛋白蛋白质质和和和和脂脂脂脂质质等等等等在物理和在物理和化学性化学性质方面的差异方面的差异,提取提取提取提取DNADNA，去除其他成，去除其他成，去除其他成，去除其他成分分分分（11）DNA的溶解性的溶解性思考思考思考思考11：

图图中中中中DNADNA溶解度最小的溶解度最小的溶解度最小的溶解度最小的浓浓度是多度是多度是多度是多少？

少？

少？

少？

2.DNA2.DNA的理化性质的理化性质（22）DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液DNADNA不溶于酒精溶液，但不溶于酒精溶液，但不溶于酒精溶液，但不溶于酒精溶液，但细细胞中某些蛋白胞中某些蛋白胞中某些蛋白胞中某些蛋白质则质则溶于酒精。

将溶于酒精。

将溶于酒精。

将溶于酒精。

将DNADNA与蛋白与蛋白与蛋白与蛋白质进质进一步分离。

一步分离。

一步分离。

一步分离。

思考思考思考思考22：

如何控制：

如何控制：

如何控制：

如何控制浓浓度达到度达到度达到度达到让让DNADNA析出的目的析出的目的析出的目的析出的目的？

0.14mol/L0.14mol/L向向向向NaClNaCl溶液中加入蒸溶液中加入蒸溶液中加入蒸溶液中加入蒸馏馏水，使其溶液水，使其溶液水，使其溶液水，使其溶液浓浓度从度从度从度从2mol/L2mol/L下降到下降到下降到下降到0.14mol/L0.14mol/L（33）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白蛋白蛋白蛋白酶酶水解蛋白水解蛋白水解蛋白水解蛋白质质，对对DNADNA没有影响没有影响没有影响没有影响高高高高温温温温大多数蛋白大多数蛋白大多数蛋白大多数蛋白质质不能忍受不能忍受不能忍受不能忍受60608080而而而而DNADNA在在在在8080以上才会以上才会以上才会以上才会变变性性性性洗洗洗洗涤剂涤剂溶解溶解溶解溶解细细胞膜，去除脂胞膜，去除脂胞膜，去除脂胞膜，去除脂质质和蛋白和蛋白和蛋白和蛋白质质但但但但对对DNADNA没有影响没有影响没有影响没有影响（44）特定的颜色反应）特定的颜色反应鉴定鉴定DNADNA沸水浴条件下，沸水浴条件下，沸水浴条件下，沸水浴条件下，DNADNA与二苯胺反与二苯胺反与二苯胺反与二苯胺反应应呈呈呈呈现现蓝蓝色。

色。

色。

色。

二、实验设计二、实验设计问题导学问题导学问题讨论问题讨论11：

什么样的材料更适合提取：

什么样的材料更适合提取DNADNA？

对植物和动物细胞处理的方法是否相同？

对植物和动物细胞处理的方法是否相同？

问题讨论问题讨论22：

去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取：

去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNADNA有有哪几种方案，有什么不同？

哪几种方案，有什么不同？

问题讨论问题讨论33：

DNADNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得到白色丝状物？

到白色丝状物？

问题讨论问题讨论44：

鉴定：

鉴定DNADNA的具体方法是什么？

在必修的具体方法是什么？

在必修11教材实教材实验中还用到哪种试剂来观察验中还用到哪种试剂来观察DNADNA在细胞中的分布在细胞中的分布二、问题导学二、问题导学问题讨论问题讨论11：

什么样的材料更适合提取：

什么样的材料更适合提取DNADNA？

对植物和动物细胞处理的方法是否相同？

对植物和动物细胞处理的方法是否相同？

选用选用DNADNA含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血（加柠檬加柠檬酸钠防止凝固酸钠防止凝固）；或植物细胞如菜花需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。

或植物细胞如菜花需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。

对应训练对应训练11：

你认为下列提供的材料中哪些不适合提取你认为下列提供的材料中哪些不适合提取DNA？

洋葱、猕猴桃、大肠杆菌、猪血、鸡血。

洋葱、猕猴桃、大肠杆菌、猪血、鸡血。

答案：

答案：

大肠杆菌、猪血。

大肠杆菌、猪血。

大肠杆菌大肠杆菌11条条DNADNA，哺乳动物血红细胞不，哺乳动物血红细胞不含细胞核和从多细胞器，没有含细胞核和从多细胞器，没有DNADNA问题讨论问题讨论22：

去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取：

去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNADNA有哪几种有哪几种方案，有什么不同？

方案，有什么不同？

方案一：

向滤液中加入方案一：

向滤液中加入2mol/l2mol/l的的NaCl,NaCl,充分溶解充分溶解DNADNA，过滤去除杂，过滤去除杂质，加入蒸馏水，使质，加入蒸馏水，使DNADNA析出直至析出物不再增加，过滤得到析出直至析出物不再增加，过滤得到DNADNA析出物，去除溶液中的杂质。

可反复多次溶解析出物，去除溶液中的杂质。

可反复多次溶解DNADNA去除杂质。

再去除杂质。

再将析出物溶解到将析出物溶解到2mol/l2mol/l的的NaClNaCl，用纱布过滤去杂质后，再向滤液，用纱布过滤去杂质后，再向滤液中加入等体积的冷酒精进一步提纯中加入等体积的冷酒精进一步提纯方案二：

直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。

方案二：

直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。

方案二：

直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。

方案二：

直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。

方案三：

将滤液放在方案三：

将滤液放在方案三：

将滤液放在方案三：

将滤液放在6060606075757575度的恒温水浴箱中保温度的恒温水浴箱中保温度的恒温水浴箱中保温度的恒温水浴箱中保温1010101015min,15min,15min,15min,严格控制温度。

严格控制温度。

严格控制温度。

严格控制温度。

问题讨论问题讨论33：

DNADNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得到白色丝状物？

到白色丝状物？

问题讨论问题讨论44：

鉴定：

鉴定DNADNA的具体方法是什么？

在必修的具体方法是什么？

在必修11教材实教材实验中还用到什么别的试剂用来鉴定验中还用到什么别的试剂用来鉴定DNADNA呢？

呢？

加入与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为加入与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为95%95%，用玻，用玻璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。

璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。

先将丝状物溶解于先将丝状物溶解于2mol/l2mol/l的的NaClNaCl溶液中溶解，再加入溶液中溶解，再加入4ml4ml二苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色二苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色变化。

变化。

三、书写三、书写DNADNA粗提取和鉴定的主要步骤粗提取和鉴定的主要步骤要求：

先写一句概括性话语，具体细节要求：

先写一句概括性话语，具体细节只写相关试剂和关键操作方法，要求写出此只写相关试剂和关键操作方法，要求写出此步骤中步骤中DNADNA在哪里？

在哪里？

11、材料的选择材料的选择22、破碎细胞释放、破碎细胞释放DNADNA33、去除滤液中的杂质、去除滤液中的杂质44、DNADNA的析出的析出与鉴定与鉴定DNA含量丰富的细胞含量丰富的细胞含核物质含核物质DNA的滤液的滤液DNA再溶解在再溶解在2mol/lNaCl中中向向2mol/lNaCl中加入冷酒中加入冷酒精，让精，让DNA析出物在析出物在沸水沸水浴下与二苯胺反应浴下与二苯胺反应显蓝色显蓝色11填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。

填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。

提取鸡血细胞中核物质提取鸡血细胞中核物质：

溶解核内溶解核内DNA：

析出析出2mol/LNaCl溶液中的溶液中的DNA：

DNA白色丝状物的析出：

白色丝状物的析出：

DNA的鉴定的鉴定：

四、典型例题四、典型例题蒸馏水蒸馏水2mol/LNaCl加入蒸馏水加入蒸馏水95%冷酒精冷酒精沸水浴中与二苯胺反应沸水浴中与二苯胺反应2、某同学在做、某同学在做DNA的粗提取与鉴定实验中，加入二苯胺鉴定的的粗提取与鉴定实验中，加入二苯胺鉴定的结果是有结果是有DNA的试管中溶液颜色很淡，其原因不可能是（的试管中溶液颜色很淡，其原因不可能是（）A经蒸馏水处理的红细胞，在用玻璃棒搅拌时，时间偏少，经蒸馏水处理的红细胞，在用玻璃棒搅拌时，时间偏少，使红细胞破裂数量少使红细胞破裂数量少B未进行沸水浴或沸水浴时间短，导致未进行沸水浴或沸水浴时间短，导致DNA含量少，染色含量少，染色时间不够时间不够C选择鸡血液时，选用鸡血细胞液，选择鸡血液时，选用鸡血细胞液，D用用NaCl溶液进行盐析时，所配制的溶液进行盐析时，所配制的NaCl溶液浓度达不到溶液浓度达不到0.14moL/L，使析出的，使析出的DNA少少C3、本实验中有三次过滤：

本实验中有三次过滤：

过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤含粘稠物的过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液溶液过滤溶解有过滤溶解有DNA的的2mol/LNaCl溶液溶液以上三次过滤分别为了获得（以上三次过滤分别为了获得（）AA、含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液的滤液BB、含核物质的滤液、滤液中含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含粘稠物、含DNA的滤液的滤液CC、含核物质的滤液、滤液中含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的粘稠物、纱布上的DNADD、含较纯的含较纯的DNA滤液、纱布上的粘稠物、含滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液的滤液A