鞣酸对糖尿病大鼠肾脏功能和形态改变的阻碍.docx

鞣酸对糖尿病大鼠肾脏功能和形态改变的阻碍.docx

《鞣酸对糖尿病大鼠肾脏功能和形态改变的阻碍.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《鞣酸对糖尿病大鼠肾脏功能和形态改变的阻碍.docx（6页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

鞣酸对糖尿病大鼠肾脏功能和形态改变的阻碍

鞣酸对糖尿病大鼠肾脏功能和形态改变的阻碍

魏海峰李才魏雁虹曲萌苗春生孙波

【摘要】目的观看鞣酸（tannicacid，TA）对链脲佐菌素（STZ）诱发糖尿病（DM）大鼠血糖及肾脏功能和形态改变的阻碍。

方式用STZ诱发大鼠DM模型后，随机分为DM模型组、氨基胍（AG）组和TA低高剂量组，另设正常对照组。

AG组按40mg·kg-1·d-1给予；TA低高剂量组别离按20及30mg·kg-1·d-1给予；正常对照组和模型组天天给予等体积生理盐水，给药方式均为腹腔注射，共10w。

观看给药期间及10w后大鼠的一样状况，检测各组大鼠血糖、血肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、24h尿蛋白及观看肾脏形态学转变。

结果TA可改善DM大鼠大体状况，与模型组比较，TA组血糖、血清Cr、BUN和尿Cr、尿蛋白均明显降低，光镜和电镜下观看显示，模型组大鼠较正常对照组大鼠肾小球明显增大，细胞数量增多，基底膜节段性增厚，部份足突融合。

TA组上述异样均明显减轻。

结论TA可明显降低尿蛋白排泄，改善DM大鼠肾脏功能和形态学异样，对DM大鼠具有肾脏爱惜作用。

【关键词】鞣酸；糖尿病；血糖；肾功能

　　糖尿病肾病（DN）是糖尿病（DM）常见而又严峻的并发症之一，也是致使终末期肾脏疾病的常见病因〔1〕。

DN发病机制十分复杂，目前药物对DN的医治疗效仍不尽中意。

我国药典上收载的五倍子鞣质，称为鞣酸或单宁酸（tannicacid,TA），普遍存在于植物界，约70%以上的中草药及某些食物中均含有此类化合物。

目前已知，TA在医药学领域具有止血愈伤、抑菌抗病毒、抗氧化、延缓衰老等功效〔2〕，但TA对DN发生进展的阻碍尚不明确。

本文观看TA对DM大鼠血糖、肾脏功能和结构改变的改善作用，为应用TA防治DN提供实验依据。

　　1材料与方式

　　动物模型的成立

　　雄性Wistar大鼠70只，体重180～220g，购自吉林大学实验动物中心。

适应性饲养1w后，随机选取8只作为正常对照组，予标准饲料喂养。

其余62只禁食12h，链脲佐菌素（STZ，购自Sigma公司）按52mg/kg体重（利用前用mol/L、无菌柠檬酸盐缓冲液配成2%溶液）单次腹腔注射，正常对照组大鼠仅腹腔注射等体积mol/L柠檬酸盐缓冲液。

注射STZ后48h，用尿糖试纸测尿糖，应在及以上，1w后DM大鼠表现多饮、多食、多尿和体重明显减轻，再次测定尿糖，尿糖≥、血糖值≥mmol/L者确信为DM模型大鼠，给予标准饲料、充沛的饮用水饲养，用于下一步的实验。

造模期间有4只大鼠死亡，7只大鼠血糖值偏低，未列入实验对象。

　　动物分组及给药方式

　　成模的51只DM大鼠随机分为DM模型组15只，氨基胍（AG）（40mg·kg-1·d-1）组、TA低高剂量（20及30mg·kg-1·d-1）组各12只。

药液的配制：

AG及TA均购自Sigma公司，注射前用mol/LPBS溶液配制2%AG溶液及1%TA溶液，以NaOH调整溶液，超净台下用μm微孔滤膜过滤除菌备用。

正常对照组和模型组天天给予等剂量的生理盐水，各组给药方式均为腹腔注射，为期10w。

实验期间动物自由进食饮水，未利用胰岛素及其他降糖药物。

　　观看指标及方式

　　①每日观看动物精神状态、毛色、饮食情形、尿量、活动情形，每周称量一次各组大鼠体重。

②别离于给药第二、4及10周后尾静脉取血，利用北京诒成血糖仪检测血糖水平。

③实验终止时大鼠称重，取血后处死，当即摘取右肾称重，计算肾重/体重比值；血液生化指标的测定：

处死动物后眼球取血，2000r/min离心10min，吸取血清分装于Eppendorf管中，采纳日立7150型全自动生化仪检测各组大鼠血清肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）、尿酸（UA）；尿蛋白测定：

给药10w后处死动物，处死前将大鼠放入基础代谢笼内，禁食，不由水，搜集大鼠24h尿液，记录尿量后留取3ml，1500r/min离心10min，去除沉渣，分装于Eppendorf管中，采纳日立7150型全自动生化仪检测尿蛋白（UrineProtein），计算24h尿蛋白排泄量。

④大鼠取血后处死，当即摘取肾脏，置于4%多聚甲醛中固定48h，常规制备石蜡切片，行组织形态学检查，包括HE、Masson染色。

同时各组取少量肾组织经%戊二醛前固定，1%锇酸后固定，乙醇系列脱水，Eppon812环氧树脂包埋，LKBⅢ型超薄切片机半薄切片定位后行超薄切片，醋酸双氧铀及柠檬酸铅双重染色，JEM1200EX型透射电子显微镜观看、摄片，观看肾小球超微结构的转变。

　　统计学方式

　　数据用x±s表示，采纳软件进行组间方差分析。

　　2结果

　　各组大鼠一样状况

　　正常对照组大鼠饮食饮水及二便正常，精神状态良好，毛色光润，反映敏捷，体重增加，无死亡。

注射STZ造模后72h，大部份大鼠显现多饮、多尿，活动减少，体毛枯燥无光泽，精神萎靡，反映迟缓，拱背蜷卧。

实验期间及终止，模型组大鼠“三多一少”病症未取得减缓，体重明显降低，体毛松散无光泽，状态差，死亡7只。

AG及TA组大鼠也有相似的表现，但活动较模型组活跃，实验后期饮水及尿量有所减少。

死亡情形为：

AG组死亡4只，TA低剂量组死亡3只，TA高剂量组死亡5只，两种药物医治组之间无明显不同。

　　各组大鼠肾脏指数的转变

　　DM大鼠体重明显减轻，肾脏体积增大，重量增加，明显大于正常对照组（P<）。

TA组大鼠体重减轻程度不如模型组明显，肾脏肾体积和重量较模型组显著降低（P<），TA高低剂量组与AG组无明显不同。

见表1。

表1各组大鼠体重、肾重、肾重/体重、不同病程大鼠血糖水平及生化指标的比较（略）

　　TA对不同病程的大鼠血糖的阻碍

　　各组DM大鼠空肚血糖明显高于正常对照组（P<），与模型组相较，TA处置2w后，对DM大鼠的血糖改善不明显，随着医治时刻的延长，至第4周及实验终止（10w），血糖明显降低。

见表1。

表1各组大鼠体重、肾重、肾重/体重、不同病程大鼠血糖水平及生化指标的比较（略）

　　各组大鼠肾脏功能的比较

　　各组DM大鼠血清Cr、BUN、UA含量和24h尿蛋白排泄量均明显高于正常对照组，TA处置10w后的DM大鼠，血Cr、BUN和尿蛋白排泄量均有不同程度改善。

见表1。

表1各组大鼠体重、肾重、肾重/体重、不同病程大鼠血糖水平及生化指标的比较（略）

　　各组大鼠光镜和电镜观看结果

　　光镜下见模型组肾小球体积增大，系膜基质增生，肾小囊腔呈裂隙状，肾小管管腔扩张，上皮细胞空泡变性和间质轻度纤维组织增生。

TA组较模型组有专门大程度改善，肾小球体积增大不明显，仅有轻度系膜增生。

见图1。

电镜观看下，正常对照组肾小球基膜内、中、外三层结构清楚、完整，基膜不增厚，系膜区不扩大，系膜基质无明显增多，血管内皮细胞、足细胞、系膜细胞未见异样，上皮足突散布均匀。

肾小管上皮细胞未见肿胀及细胞核、细胞器的改变。

模型组大鼠肾小球基膜三层结构不清，肾小球基底膜呈节段性明显增厚，并可见云雾状电子致密物沉积，内皮细胞局部增生呈连拱状改变，部份上皮细胞足突融合。

肾小管细胞核内染色质边集，胞内溶酶体增多、部份变性，线粒体肿胀，嵴断裂，空泡化。

TA组可见少量基膜呈节段性增厚，足突大体正常，系膜细胞及基质未见明显增生，部份肾小管可见胞体内溶酶体增多，其余部份未见明显异样。

见图2。

　　3讨论

　　DN是DM微血管病变所致，其发病机制比较复杂〔3〕。

初期DN的要紧表现为肾脏肥大和肾小球高滤过，肾小球结构显现改变，基膜增厚和系膜基质增多，尿白蛋白排泄率正常或显现微量白蛋白尿。

随着病情的进展，肾小球滤过率开始下降，显现大量白蛋白尿，基膜增厚和系膜基质增加加倍明显，临床显现进行性增加的非选择性蛋白尿，肾功能慢慢消退，至终末期也即尿毒症期，多数肾单位闭锁，血尿素氮、肌酐升高，血压升高。

有效地避免或延缓DN的发生、进展，是延长DM患者寿命、提高其生活质量的重要方法。

　　一次足量给予动物STZ可造成胰岛β细胞大量破坏，胰岛素合成和分泌减少，引发糖代谢紊乱，从而致使DM。

本实验造模成功，在整个实验进程中，DM模型组大鼠的血糖稳固在较高的水平，多饮多食多尿，体重减轻等DM病症明显，至实验终止时，DM大鼠肾脏重量和肾肥大指数及血清Cr、BUN、尿蛋白水平等均较正常对照组明显增加，电镜下见肾小球基膜节段性增厚，电子致密物沉积和部份足突融合。

说明成模的DM大鼠已进入初期DN时期。

给予TA后，医治组大鼠的一样状态较模型组有所好转，肾脏的病理改变明显减轻，肾脏重量和肾肥大指数较DM组显著降低。

Chandak等〔4〕研究显示，DM大鼠用TA处置4w后，可显著降低血糖，但没有明显改善血清Cr及尿蛋白排泄水平。

本实验结果发觉TA处置10w不但能够明显降低DM大鼠的血糖水平，而且对血清Cr、BUN及尿蛋白均有必然改善作用。

以上实验结果说明，TA对DM大鼠具有必然的肾脏爱惜作用，能减轻肾脏肥大、基膜增厚等初期DN病理改变，降低尿白蛋白，从而延缓DN的进展和恶化。

　　DN的发病一样以为是多因素所致，要紧包括代谢紊乱、肾小球血流动力学改变和遗传易感性等，其中高血糖可能是DN的始动因素〔5〕。

以往的研究以为，某些中药或食物中的TA成份，具有降低血糖、血压及尿酸，调整脂代谢等作用〔6〕，本实验说明TA能够有效操纵DM大鼠的血糖，因此咱们推测TA对DM大鼠肾脏病理改变的减轻作用可能是通过其对糖代谢的调剂，操纵血糖而使DN取得逆转。

目前已知，DN的发病与氧化应激、硝基应激及DM肾脏微炎症紧密相关〔7〕，具有抗炎、抗氧化作用的TA改善肾功能的作用是不是是通过改善DM的氧化及硝基应激状态，减轻DN的炎症反映，有待于近一步研究。

另外，多聚（ADP核糖）聚合酶（PARP）的激活在DN的发病进程中扮演着重要的角色，利用PARP抑制剂能够有效改善DM大鼠肾脏功能，降低DM的氧化应激水平〔8〕，Shevalye等〔9〕利用一种名为GPI154,27的PARP抑制剂，结果发觉其能够降低转化生长因子（TGF）β、血管内皮细胞生长（VEGF）、纤连蛋白的表达，但对ICAM一、硝基应激水平等没有明显改善，提示不同种PARP抑制剂的联合应用将对DN的防治具有重要意义。

有文献报导〔4〕，TA一样能够作为PARP的抑制剂，避免其激活，但具体的作用机制尚不明确。

总之，深切探讨TA在防治DN方面的作用，有望为临床防治DM并发症提供新的思路和应用。

【参考文献】

　　1WolfG，ChenS，ZiyadehFN，ettheperipheryoftheglomendarcapillarywalltowardthecenterofinjurycomesofageindiabeticnephropathy〔J〕.Diabetes，2005；54:

162634.

　　2张杰.鞣质的药理作用抗氧化、降脂、降压等多种作用〔J〕.国外医药·植物药分册，1995；10（3）:

99103.

　　3KanwarYS，WadaJ，SunL,etnephropathy:

mechanismsofrenaldiseaseprogression〔J〕.ExpBiolMed，2020；233

（1）:

411.

　　4ChandakPG，GaikwadAB，TikooK,etamelioratesthedevelopmentofstreptozotocininduceddiabeticnephropathybypreventingtheactivationofPARP〔J〕.PhytotherRes，2020；23

（1）:

727.

　　5KikkawaR，KoyaD，HanedaM，etofdiabeticnephropathy〔J〕.AmJKidneyDis，2003；92（9）:

1650.

　　6姚思宇，赵鹏.鞣质降血脂作用的动物实验研究〔J〕.中国热带医学，2004；4（6）:

9456.

　　7万静，刘丽梅.氧化应激抗氧化系统与糖尿病肾病〔J〕.国际内分泌代谢杂志，2006；26（4）:

1820.

　　8SzabóC，BiserA，BenkoR，et（ADPribose）polymeraseinhibitorsamelioratenephropathyoftype2diabeticLeprdb/dbmice〔J〕.Diabetes，2006；55（11）:

300412.

　　9ShevalyeH，StavniichukR，XuW，et（ADPribose）polymerase（PARP）inhibitioncounteractsmultiplemanifestationsofkidneydiseaseinlongtermstreptozotocindiabeticratmodel〔J〕.BiochemPharmacol，2020；27.〔Epubaheadofprint〕.