学年浙科版选修1 第一部分第1课时 大肠杆菌的培养和分离 学案.docx

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学年浙科版选修1第一部分第1课时大肠杆菌的培养和分离学案

第1课时　大肠杆菌的培养和分离

知识内容

要求

考情解读

大肠杆菌的培养和分离

掌握程度参考实验与探究能力

1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。

3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。

一、微生物培养的基本条件

1．微生物

（1）特点：

结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。

（2）分类

（3）用途：

许多种抗生素来源于放线菌和霉菌；酒由酵母发酵产生；腐乳由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物能用于治理环境污染，在新能源领域也将发挥巨大作用。

2．培养基

（1）概念：

培养基是微生物生存的环境和营养物质。

（2）分类：

培养基按物理性质常可分为固体培养基和液体培养基，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四类营养物质，另外还需满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。

通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。

（3）酸碱性：

细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，霉菌要求在中性偏酸的环境中生长；因此，在制备培养基时需调节培养基的酸碱度。

特别提醒

　有关培养微生物所需营养的三点提醒

（1）不同微生物对营养的需求不同，所以培养不同的微生物所需要的营养可能不同。

（2）对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳源又是氮源、能源。

（3）培养微生物时营养物质要协调。

营养物质过少不能满足微生物的营养需要，过多对微生物的生长有抑制作用。

3．灭菌操作

（1）常见灭菌方法

①对于培养皿、试管、三角瓶、镊子等常采用高压蒸汽灭菌法灭菌。

②对于不能加热灭菌的化合物，如尿素等，只能用G6玻璃砂漏斗过滤，但玻璃砂漏斗使用前也要在121℃下用纸包好灭菌。

③实验操作过程中，一般采用灼烧的方法对接种环进行灭菌。

（2）高压蒸汽灭菌操作的要求

①灭菌前各种用品均需用牛皮纸或报纸包好，在121℃下灭菌15min，实验过程中不能用脱脂棉，因为其易吸水，吸水后容易引起污染。

②如培养基中有葡萄糖，为防止其分解碳化，要用500g/cm2压力（90℃以上）灭菌30min。

探究1——图示解读

结合所学知识，完成下图横线上大肠杆菌的结构名称，然后思考：

1．大肠杆菌与酵母菌相比，在结构上最主要的区别是什么？

答案　大肠杆菌是原核生物，与酵母菌相比，最主要的区别是没有由核膜包被的细胞核。

2．大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但也有一些菌株对人体是有害的，可以侵袭肠黏膜并产生毒素。

但是，任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。

3．应用：

大肠杆菌是基因工程技术中被广泛采用的工具。

探究2——归纳概括

1．培养基的成分

营养物质

定义

作用

主要来源

碳源

能提供碳元素的物质

构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些也是异养生物的能源物质

无机碳源：

CO2、NaHCO3等；有机碳源：

糖类、脂肪酸、石油等

氮源

能提供氮元素的物质

合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物

无机氮源：

N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：

尿素、牛肉膏、蛋白胨等

生长因子

生长必不可少的微量有机物质

是酶和核酸的组成成分

维生素、氨基酸、碱基等

水

代谢必需的无机物

参与新陈代谢、良好溶剂

外界摄入

无机盐

为生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素

是细胞组成成分，生理调节物质、某些化能自养菌的能源、酶的激活剂等

无机化合物

2.培养基的类型

划分标准

培养基种类

特点

用途

按物理

状态

液体培养基

不加凝固剂

扩大培养或工业生产

半固体

培养基

加少量凝固剂而呈半固体状态

观察微生物的运动、分类鉴定

固体培养基

加入凝固剂，如琼脂、明胶、硅胶等

微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种

按功能

选择培养基

允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长

培养分离特定的微生物

鉴别培养基

根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品

鉴别不同种类的微生物

按化学

成分

天然培养基

含化学成分不明确的天然物质

工业生产

合成培养基

培养基的成分已明确

分类、鉴别

探究3——比较异同

1．比较消毒和灭菌的不同之处

项目

消毒

灭菌

理化因素的作用强度

较为温和

强烈

常用方法

煮沸消毒、化学药剂消毒、紫外线消毒

灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌

消灭微生物的数量

部分生活状态的微生物

全部微生物

芽孢和孢子能否被消灭

不能

能

2．几种消毒和灭菌方法及其适用范围

类型

适用范围

操作方法

消毒

方法

煮沸

消毒法

日常生活

100℃煮沸5～6min

巴氏

消毒法

不耐高温的液体

70～75℃煮30min或80℃煮15min

化学

药剂

生物活体、水源等

擦拭等，如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源

紫外线

房间、仪器设备

紫外线照射30min

灭菌方

法

灼烧

接种工具、接种时用的试管口或瓶口等

直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧

干热

灭菌

耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等

物品放入干热灭菌箱，160～170℃加热1～2h

高压蒸汽灭菌

培养基、培养皿等，生产和实验室常用

高压蒸汽灭菌锅内，100kPa，温度121℃，15min

过滤

不耐高温的物质，如尿素、酶等

G6玻璃砂漏斗过滤

易混易错

（1）灭菌与消毒的原理是相同的，仅仅是作用的条件不同，抑菌和灭菌的程度不同。

（2）对培养基pH的调节，需在灭菌之前进行。

例1

　（2017·绍兴高二月考）下列有关大肠杆菌的叙述，正确的是（　　）

A．大肠杆菌细胞内的DNA全部位于拟核区

B．大肠杆菌是原核生物，属于兼性厌氧菌

C．大肠杆菌的细胞壁与植物细胞的细胞壁的结构、功能非常相近

D．大肠杆菌对人类无害

答案　B

解析　大肠杆菌是原核生物，属于兼性厌氧菌，B项正确；大肠杆菌的小型环状DNA分子（质粒）位于细胞质中，A项错误；大肠杆菌的细胞壁的成分和功能与植物细胞的细胞壁不同，C项错误；任何大肠杆菌如果进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害，D项错误。

例2

　（2017·温州高二检测）下列关于灭菌的叙述，正确的是（　　）

A．用于细菌等微生物培养的培养基都必须用高压蒸汽灭菌锅灭菌

B．锥形瓶、培养皿、移液管等器具的高压蒸汽灭菌时间一般为15min（121℃条件下）

C．超净工作台或接种箱用紫外灯灭菌30min即可

D．灭菌后的培养基、器具就已经达到了完全无菌

答案　B

解析　培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌，若培养基中有碳酸氢钠、尿素等高温易分解的成分，就不能用此方法，A项错误；超净工作台或接种箱用紫外灯灭菌30min，同时还需打开过滤风，C项错误；灭菌后的培养基、器具不一定达到了完全无菌，而且要防止二次污染，D项错误。

方法技巧

　三种常用灭菌方法的比较

灭菌方法

适用材料或用具

灭菌条件

灭菌时间

灭菌后处理

高压蒸汽灭菌

培养基、玻璃器皿等

121℃，1kg/cm2压力（若培养基中含有葡萄糖，为防止其碳化，90℃以上，500g/cm2压力）

15min（若含有葡萄糖，灭菌时间30min）

实验用具在60～80℃烘箱中烘干；培养基冷却待用

灼烧灭菌

接种环、接种针或其他金属用具；玻璃刮刀

在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧

烧红（或玻璃刮刀上的酒精燃尽）

防止过热杀死目的菌种，冷却后使用

过滤灭菌

不能加热灭菌的化合物，如尿素培养基等

G6玻璃砂漏斗过滤

尿素滤液过滤完毕

玻璃砂漏斗用1mol/L的HCl浸泡，抽滤去酸后蒸馏水洗至中性，干燥后保存

二、细菌的培养与分离

1．细菌的培养

（1）繁殖方式：

细菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，约20min分裂一次。

（2）人们在培养细菌时，需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环转移带菌的培养物。

大肠杆菌的培养和分离实验中采用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。

2．细菌的分离方法

（1）划线分离法：

通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作。

由于划线过程中，接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分的细菌间距离加大，经过培养可获得单菌落。

（2）涂布分离法：

用此法分离时，需要先将培养的菌液稀释，通常稀释10－5～10－7倍。

取0.1mL稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行培养。

通常以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适。

（3）两种分离法的比较：

划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些。

3．大肠杆菌的培养和分离

（1）实验内容：

将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。

（2）实验步骤

培养基灭菌

↓

倒平板

↓

接种

↓

划线分离

↓

培养观察

↓

菌种保存

将50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌

将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面

在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12h

用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿

将培养皿倒置（盖在下面），放在37℃恒温培养箱中培养12～24h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落

在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，37℃培养24h后，置于4℃冰箱中保存。

探究1——图示解读

固体培养基经高压蒸汽灭菌后，待培养基冷却到60℃时，需搁置斜面（图甲）或倒平板（图乙），请回答下列问题：

1．如何确定制备的培养基灭菌是否合格？

答案　将未接种的培养基在适宜的温度下放置一定时间，观察培养基上是否有菌产生。

2．在固体培养基凝固前搁置斜面的目的是什么？

答案　增大接种面积。

3．平板冷凝后，为什么要将平板倒置？

答案　平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

4．观察甲、乙、丙、丁四幅图，熟悉倒平板的操作流程，请填空：

（1）请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：

丙→乙→甲→丁。

（2）甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。

（3）丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。

探究2——科学探究

1．平板划线及培养结果

接种环在固体培养基表面连续划线，将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。

下图为平板划线示意图（A）及培养后菌落分布示意图（B）。

（1）A图中a（填图中序号）区域为起始处，在图中b（填图中字母）区域更易获得单菌落。

（2）下图中甲为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果，判断下列正误。

①每一次划线后都要将接种环灼烧（　√　）

②除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端（　×　）

2．划线分离的注意事项

（1）第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。

（2）灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。

（3）划线时，只能蘸取一次菌液，每次划线以上次划线的末端为起点，划线最后一区不要与第一区相连。

（4）划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。

思维拓展

　划线分离过程中每次灼烧接种环的目的不同

灼烧时间

目的

第一次灼烧

杀死接种环上原有的微生物，避免接种环上可能存在的微生物污染培养基

每次划线前

杀死上次划线后残留在接种环上的菌种，使下次划线的菌种直接来自上次划线末端，进而使每次划线菌种数目减少，达到分离菌体，获得单菌落的目的

划线结束

杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者

探究3——科学探究

1．涂布分离法

用涂布分离法分离细菌时，需要先将培养的菌液稀释，通常稀释10－5～10－7倍。

取0.1mL稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行培养。

涂布操作如图所示。

a．将玻璃刮刀浸在盛有酒精的烧杯中。

b．取不超过0.1mL的菌液，滴加到培养基表面。

c．将蘸有少量酒精的玻璃刮刀在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。

d．用玻璃刮刀将菌液均匀地涂布在培养基表面。

涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。

2．两种分离方法的比较

如图是采用分离微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考并回答下列问题：

（1）获得图A效果和图B效果的接种方法分别是什么？

答案　获得图A效果的接种方法为涂布分离法，获得图B效果的接种方法为划线分离法。

（2）某同学在分离土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？

应当怎样操作才可避免此种现象？

答案　最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；应采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。

例3

　（2017·浙江效实中学检测）在分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如图所示。

有关叙述错误的是（　　）

A．接种前应对培养基进行高压蒸汽灭菌

B．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落

C．接种过程中至少需要对接种环灼烧5次

D．甲中a区域为划线的起始位置

答案　D

解析　培养基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，A项正确；菌液经过连续划线，菌液中的菌体越来越少，最后容易形成单菌落，B项正确；在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，因此按照图中划线顺序（d→c→b→a），整个划线过程中至少需要对接种环灼烧5次，C项正确；每次划线的菌种来自上一区域的末端，因此划线的起始区域菌落多，由图乙可知，甲中d区域菌落多，为划线的起始位置，D项错误。

例4

　（2017·嘉兴高二检测）图甲、图乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：

（1）图甲是利用法进行微生物接种，图乙是利用法进行微生物接种。

（2）这两种方法所用的接种工具分别是和；对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是和酒精消毒。

（3）下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是（填“图甲”或“图乙”）。

（4）下列关于微生物培养和分离的叙述不正确的是。

A．利用图乙所示接种法可以分离微生物但不能对微生物进行计数

B．接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落

C．利用图甲所示接种法接种过程中，每次划线前后都要对接种环进行灭菌

D．图乙所示接种法中使用的接种工具须保存在70%的酒精中

答案　

（1）划线分离　涂布分离　

（2）接种环（或接种针）玻璃刮刀　灼烧灭菌　（3）图乙　（4）A

解析　

（1）分析图示可知，图甲为用划线分离法进行微生物接种，图乙是利用涂布分离法进行微生物接种。

（2）前者利用的工具是接种环或接种针，后者利用的工具是玻璃刮刀。

对于接种环而言，灭菌的操作方法是灼烧，玻璃刮刀通常浸泡在70%的酒精中消毒。

（3）题图中，菌落均匀分布，分离效果较好，是涂布分离法操作的结果。

（4）采用涂布分离法，可以通过培养基表面的菌落数，对微生物进行计数，但采用该方法计数通常比实际菌落数偏低，A项错误。

方法技巧

　划线分离与涂布分离的比较

项目

划线分离法

涂布分离法

原理

连续划线。

由于划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次划线从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落

将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养皿表面形成单个菌落

操作工具

接种环

玻璃刮刀

使用要求

用时需灼烧

放置在70%酒精中，用时需灼烧

特点

操作简单，但是单菌落不易分离

操作复杂，单菌落易分离

相同点

使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种

1．（2017·杭州高二检测）下列有关大肠杆菌培养、分离的叙述中，错误的是（　　）

A．用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，再在LB固体培养基的平板上划线分离

B．LB液体培养基与LB固体培养基成分的差异是有无琼脂

C．实验时要设置空白对照实验

D．获得大肠杆菌的单细胞形成的菌落，只能用划线分离法分离

答案　D

解析　获得大肠杆菌的单细胞菌落常用的方法有划线分离法和涂布分离法。

2．如图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是（　　）

A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行

B．步骤①中，待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖

C．步骤③中，每次划线前都需对接种环进行灼烧处理

D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养

答案　B

解析　由图可知，步骤①是倒平板，步骤②是用接种环蘸取菌液，步骤③是进行平板划线，步骤④是培养。

①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，A项正确；倒完平板后应立即盖上培养皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B项错误；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，C项正确；划线接种结束后，将平板倒置后放入培养箱中培养，有利于培养基表面的水分更好地挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D项正确。

3．（2017·浙江余姚期末）下列关于微生物的培养和分离的叙述中，不正确的是（　　）

A．细菌能在液体培养基中以分裂方式迅速扩增

B．噬菌体或大肠杆菌可在蛋白胨培养基中增殖

C．灭菌的目的是消灭与培养菌竞争的杂菌

D．涂布分离法分散细菌得到单菌落的效果更好

答案　B

解析　噬菌体属于病毒，营寄生生活，不能在蛋白胨培养基中增殖。

4．在划线分离法操作中，错误的是（　　）

A．将接种环放在酒精灯火焰上灼烧，直到接种环烧红

B．将烧红的接种环在酒精灯火焰旁边冷却

C．接种环在平板上的划线位置是随机的

D．在蘸取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰

答案　C

解析　接种环灼烧及接种前后试管口要通过火焰，其目的是为了防止杂菌污染，将接种环先冷却再接种可以避免高温烫死菌种，因此A、B、D都是正确的；在平板上划线时，要划三至五条平行线，而不是随机划线，因此C选项错误。

5．（2017·萧山中学联考）微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。

下图甲、乙、丙是大肠杆菌分离和培养过程中部分操作和实验结果示意图，请据图回答有关问题：

（1）上图甲所示的是制备固体培养基时的实验操作步骤之一，它称为。

（2）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。

对于固体培养基应采用的检测方法是。

（3）上图乙是平板划线法接种操作示意图，正确的操作顺序是A→B→

（用字母和箭头表示）；找出图乙中两处错误的操作：

、（用字母表示）。

（4）上图丙是某同学用平板划线法接种后的培养基培养12h后的实验结果，如果培养基上，则说明无菌操作基本符合要求。

答案　

（1）倒平板

（2）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生

（3）G→F→E→C→D→H　C　D

（4）生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点

题组一　微生物的营养与培养基

1．（2017·台州书生中学期中）不同培养基的具体配方不同，但一般都有（　　）

A．氮源、磷酸盐和维生素

B．氮源和维生素

C．水、碳源、氮源和无机盐

D．碳元素、氧元素、氢元素、氮元素

答案　C

解析　不同培养基的配方不同，如细菌喜荤，霉菌喜素，但一般都包括水、无机盐、碳源、氮源等成分，C项符合题意。

2．下列说法正确的是（　　）

A．为微生物的生长繁殖提供营养基质的是固体培养基

B．培养基只有两类：

液体培养基和固体培养基

C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基

D．微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的菌落

答案　D

解析　培养基是微生物生长繁殖的营养基质，根据培养基的物理性质不同，可将培养基分成固体培养基、液体培养基和半固体培养基；液体培养基不加凝固剂。

3．牛肉膏蛋白胨培养基中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的说法不正确的是（　　）

A．不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用

B．在微生物生长温度范围内保持固体状态

C．琼脂凝固点低，利于微生物的生长

D．琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强

答案　C

解析　在液体培养基中加入凝固剂如琼脂后，制成琼脂固体培养基，它是实验室中最常用的培养基之一，固体培养基中可形成肉眼可见的单个细胞繁殖而来的子细胞群体，即菌落，用于微生物的分离、计数和菌种鉴定等。

琼脂作为一种理想的凝固剂，是由其性质决定的，琼脂不会被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强。

琼脂在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，所以在微生物生长温度范围内保持固体状态。

题组二　无菌操作

4．下列操作与消毒灭菌无关的是（　　）

A．接种前用肥皂清洗双手，再用酒精擦拭双手

B．接种前用火焰灼烧接种环

C．培养基在60℃左右时搁置斜面

D．在酒精灯的火焰旁完成倒平板的操作

答案　C

5．培养微生物时必须进行无菌操作，下列消毒灭菌方法中，常用于各种器皿灭菌的是（　　）

A．70%酒精浸泡B．紫外线照射

C．高压蒸汽法D．5%次氯酸钠溶液浸泡

答案　C

解析　玻璃刮刀采用70%酒精浸泡消毒；杀灭空气中的微生物常采用紫外线照射；各种器皿通常采用高压蒸汽灭菌法灭菌；5%次氯酸钠溶液浸泡常用于植物切段消毒。

6．下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是（　　）

A．获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染

B．单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法

C．培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌

D．倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落

答案　C

解析　微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A项正确；通常采用涂布分离法或划线分离法进行单菌落的分离，以消除污染的杂菌，B项正确；培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌，若培养基中有高温易分解的成分时，就不能用此方法，如培养基中含有尿素时，一般用G6玻璃砂漏斗过滤，C项错误；倒平板后需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴滴入培养基而造成污染，D项正确。

7.防止杂菌入侵，获得纯净的培养物，是研究和应用微生物的前提。

下列叙述错误的是（　　）

A．实验室里可以用紫外线或化学药物进行消毒

B．接种环、接种针等金属用具，直接在酒精灯火焰的内焰部位灼烧灭菌

C．在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一