液相色谱仪期间核查作业指导书最新版.docx
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液相色谱仪期间核查作业指导书最新版
液相色谱仪期间核查作业指导书
1目的
对高效液相色谱仪运行情况进行检查，保证其正常使用，确保检验数据准确可靠。
2范围
适用于本公司高效液相色谱仪在两次检定之间或修理后的运行检查。
3职责
3.1检测中心液相主要使用人负责液相色谱仪期间核查的准备工作、操作及记录。
3.2检测中心设备管理员负责统筹安排及记录归档。
4计量性能要求
4.1输液系统
泵流动稳定性应符合表1的要求。
表1泵流量稳定性S的指标要求
仪器的检测器的主要技术指标见表2。
表2液相色谱仪检测器的主要技术指标
4.3整机性能
仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示，指标要求见表3。
表3液相色谱仪整机性能指标要求
5通用技术要求
5.1仪器外观
仪器上应有仪器名称、型号、制造厂名、产品系列号、出产日期等内容的标牌，国产仪器应有制造计量器具许可证标志。
5.2仪器电路系统
仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。
6计量器具控制
计量器具控制包括:
两次检定之间或大修（修理更换泵、光路等）后的运行检查。
6.1核查条件
6.1.1环境条件
6.1.1.1核查室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，通风良好。
6.1.1.2室温（15-30）℃，检定过程中温度变化不超过3℃（对示差折光率检测器，室温变化不超过2℃），室内相对湿度20%-85%。
6.1.1.3仪器应平稳的放在工作台上，周围无强烈机械振动和电磁干扰源，仪器接地良好。
6.1.1.4电源电压为（220±22）V，频率为（50±0.5）Hz。
6.1.2核查设备
6.1.2.1秒表:
最小分度值不大于0.1s。
6.1.2.2分析天平:
最大称量不小于100g，最小分度值不大于1mg。
6.1.2.3数字温度计:
测量范围为（0-100）℃，最大允许误差为±0.3℃。
以上器具需经计量检定合格。
6.1.3其他要求
6.1.3.1核查用试剂:
色谱级甲醇，纯水，分析纯的丙酮和异丙醇，紫外分光光度计，萘
-甲醇溶液1.00×10-4g/ml和1.00×10-7g/ml，甲醇中胆固醇溶液200μg/ml和500μg/ml和胆固醇等。
6.1.3.2注射器:
10μL，50μL和10mL各一支。
6.1.3.3容量瓶:
50mL，10个。
6.2核查方法
6.2.1通用技术要求
按5.1和5.2的要求，目视、手动检查。
6.2.2输液系统
泵流量稳定性SR
按表1的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先称重过的洁净容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时间流出的流动相，在分析天平称重，按公式
（1）计算SR
。
每一设定流量，重复测量3次。
Fmax-Fmin
SR=-------×100%
（1）
Fm
式中:
Fmax--同一设定流量3次测量值的最大值，mL/min;
Fmin--同一设定流量3次测量值的最小值，mL/min。
Fm=（W2-W1）/（ρt·t）
（2）式中:
Fm--流量实测值，ml/min;
W2--容量瓶+流动相的质量，g;
W1--容量瓶的质量，g;
ρt--实验温度下流动相的密度,g/cm3（不同温度下流动相的密度参见附录C）
t--收集流动相的时间，min。
6.2.3紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器的性能
基线噪声和基线漂移
选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，紫外检测器的波长设定为254nm,检测灵敏度调到最灵敏档。
开机预热，待仪器稳定后记录基线30min，选取基线中噪声最大峰-峰高对应的信号值，按公式（3）计算基线噪声，用检测器自身的物理量（AU）作单位表示。
基线漂移用30min内基线偏离起始点最大信号值（AU/30min）表示。
Nd=KB（3）
式中:
Nd--检测器基线噪声;
K--衰减倍数;
B--测得基线峰-峰高对应的信号值，AU。
6.2.4荧光检测器性能
基线漂移和基线噪声
将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，灵敏度选在最灵敏档，激发波长设定为290nm，发射波长设定为330nm，仪器预热温定后，记录基线30min，根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰-峰高对应的响应信号值，按公式（4）计算基线噪声，用检测器自身的物理量（FU）做单位表示;基线漂移用30min内基线偏离起始点最大响应信号值（FU/30min）表示。
6.2.5示差折光率检测器性能
基线漂移和基线噪声
选用C18色谱柱，将仪器各部分连接好，以甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，参比池充满流动相，灵敏度选在最灵敏档，接通电源，待仪器温定后记录基线30min，根据检测器的衰减倍数和测得的基线峰-峰高对应的响应信号值，按公式（5）计算基线噪声，用检测器自身的物理量（RIU）做单位表示;基线漂移用30min内基线偏离起始点最大响应信号值（FU/30min）表示。
（实验中应特别注意，室温的波动不要超过2℃）。
6.2.6整机性能（定性、定量重复性）
将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，根据仪器配置的检测器，选择测量参数:
紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器波长设定为254nm，灵敏度选择适中，基线稳定后由进样系统注入一定体积的1.0×10-4g/mL萘-甲醇溶液标准物质;荧光检测器激发波长和发射波长分别设定为290nm和330nm，灵敏度选在中间挡，基线稳定后注入一定体积的1.0×10-4g/mL萘-甲醇标准溶液;示差折光率检测器和蒸发光散射检测器灵敏度选在中间挡，注入一定体积的200μg/mL（2.0×10-4g/mL）的甲醇中胆固醇溶液标准物质。
连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按公式
（4）计算相对标准偏差RSD6。
（4）式中:
定性（定量）6RSD--定性（定量）测量重复性相对标准偏差;
iX--第i次测得的保留时间或峰面积;
X--6次测量结果的算术平均值;
i--测量序号;
%）（）（==定性（定量）10011/1
i2i6?
?
--∑XnXXRSDn
η--测量次数。
6.3核查结果
6.3.1按本规程条款核查，全部核查项目均达到规定技术要求的仪器为合格仪器。
6.3.2只配一个检测器的仪器，任何一个核查项目不合格，该仪器为不合格仪器。
6.3.3配一个以上检测器的仪器，只要其中一个检测器的核查项目和除检测器外其他核查项目合格，视为该检测器核查合格，其他不合格的检测器，限制使用。
测定以上数据参数后，与检定证书结果做比较，检测结果应小于等于JJG705《液相色谱仪检定规程》中规定的技术参数。
6.4核查周期
仪器的核查时间一般为两次检定之间，更换重要部件或对仪器性能有影响时，应重新检定。
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