学生探索性试验课题设置浓绿茶对急性酒精中毒大鼠尿液乙醛含量的影响.docx
《学生探索性试验课题设置浓绿茶对急性酒精中毒大鼠尿液乙醛含量的影响.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《学生探索性试验课题设置浓绿茶对急性酒精中毒大鼠尿液乙醛含量的影响.docx（10页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。
学生探索性试验课题设置浓绿茶对急性酒精中毒大鼠尿液乙醛含量的影响
浓绿茶对急性酒精中毒大鼠尿液乙醛含量的影响
Theimpactofstronggreenteaontheurinecontentofacetaldehydeofacutealcoholintoxicationinmice
1、立题依据与实验内容酒精摄入体内后，其主要成分乙醇经吸收随血液循环至肝脏，在肝脏乙醇脱氢酶的作用下，催化生成乙醛，再经过乙醛脱氢酶催化生成乙酸，最后转化为二氧化碳和水并随尿液排出。
茶碱具有利尿作用，可加速尿液的生成及排出，因此有人认为急性酒精中毒时，用浓茶（含茶碱）解酒可能使乙醛未来得及转化便经肾脏排出，使尿液中乙醛升高，从而损害肾脏功能，目前这一说法尚无相关文献报道。
本研究探讨大鼠急性酒精中毒后，服用浓绿茶（含茶碱）对尿液中乙醛含量的影响。
2、实验器材与药品
实验所需器材清单
器材、药品
数量
备注
722N型分光光度计
2台
水浴箱
1台
注射器（5ml和10ml）
各6个
移液管（1ml和5ml）
各6支
移液器（0-1000ul）
1支
含洁净枪头
试管
24支
试管架
4个
容量瓶（50ml）
2个
容量瓶（500ml）
3个
温度计（50C°100C°）
各1支
漏斗（配滤纸）
各20
矿泉水瓶
24个
小组自备
灌胃器
6个
电子称
1台
电热壶
1台
小组自备
大鼠（雌雄各半，体重均匀，健康）
24只
实验所需药品清单
0.1mol/ml盐酸
200ml
0.02%酚试剂
100ml
0.1g/500ml，小组自备
硫酸铁铵（分析纯）
1g
自购
乙醛（分析纯）
1g
自购
去离子水或重蒸水
1500ml
绿茶（普通等级）
150g
自购
红星二锅头（56°）
1瓶
北京红星股份有限公司，自购
附注：
经小组商议，所需药品经费如不足，超出的经费，由小组自筹经费解决。
3、实验路线与指标
3.1实验动物：
大鼠（广西医科大学实验动物中心）
3.2实验指标：
大鼠尿液乙醛含量（ug/ml）
检测方法：
采用酚试剂分光光度测定乙醛法，其主要原理是乙醛与酚试剂反应生成嗪类物质，在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物，根据颜色深浅比色定量（参考文献1）.测定尿液OD630值，通过标准曲线测定尿液乙醛含量
3.3实验路线：
3.3.1预实验：
制作酚试剂分光光度法测定乙醛标准曲线，探索灌胃法复制急性酒精中毒大鼠最佳模型（4只）。
预实验具体操作步骤：
3.3.1.1制作分光光度法测定乙醛标准曲线（OD630）。
3.3.1.1.1反应液配制
0.02%酚试剂溶液称取0.1g酚试剂[C6H4SN（CH3）C:
NNH2·HCl，简称NBTH]（纯），用去离子水或重蒸水（下同）定容于100ml容量瓶中，实验时稀释5倍成0.02%酚试剂溶液。
1%硫酸铁铵称量1.0g硫酸铁铵（纯），用0.1mol/L盐酸溶解，并稀释定容至100ml。
1ug/ml标准乙醛溶液移液器吸取0.650ml纯乙醛溶液，用去离子水稀释至500ml（纯乙醛密度：
0.780g/立方厘米）
浓绿茶取绿茶约15-20g，加90度左右的开水约250ml,常规浸泡，待冷却至30-40度，现配现用
3.3.1.1.2制作标准曲线
第一次反应取乙醛标准液5ml和0.02%酚试剂溶液2.5ml定容至50ml,静止反应（第一次反应）30min后，得到第一次反应液。
第二次反应按表1中各种试剂的量添加，在43±1C°条件反应（第二次反应）20min，流水冷却，立即在630nm处测定吸光度值，由此制作标准曲线。
表1标准曲线的制作
第一次反应液（ml）0.02%酚试剂（ml）1%硫酸铵铁（ml）水（ml）
10.020.55.0
20.520.54.5
31.020.54.0
41.520.53.5
52.020.53.0
62.520.52.5
73.020.52.0
83.520.51.5
3.3.1.2探索灌胃法复制急性酒精中毒大鼠及用浓茶解酒最佳模型
3.3.1.2.1随机取4只大鼠并标号Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，逐只实验，对第一只按10ml/kg进行二锅头灌胃，根据其行为、呼吸等表现进行适当加量，直至其出现昏睡、翻正反射消失（仍保持呼吸）并记录时间，将其放在600ml矿泉水瓶（自制尿液收集装置）中，同时记录最终用酒量及自然清醒时间（以能恢复活动为标准）
3.3.1.2.2根据第一只大鼠的用量，对第二只大鼠进行灌胃，并观察其酒精中毒症状出现时间、酒用量、自然清醒时间、尿量。
3.3.1.2.3在前两只大鼠模型制作的基础上，对第三只大鼠出现急性中毒症状后立即按10ml/kg进行浓茶灌胃，并观察记录大鼠的尿液变化情况（是否有较明显增加）、清醒时间（是否缩短）。
3.3.1.2.4根据第三只大鼠的操作，对浓茶灌胃量进行调整，至尿量出现明显增多，清醒时间缩短。
3.3.1.4分别取四只大鼠的尿液按以下步骤进行分光光度法操作
将收集到的尿液分别进行过滤，取滤液。
第一次反应取过滤尿液用重蒸水定容至5ml，并与0.02%酚试剂溶液2.5ml定容至50ml,静止反应（第一次反应）30min后，得到第一次反应液。
取第一次反应液5ml,0.02%酚试剂2ml,1%硫酸铁铵0.5ml,不加水，其他步骤与标准曲线制作相同。
表2预实验大鼠尿液OD630测定
第一次反应尿液（ml）0.02%酚试剂（ml）1%硫酸铵铁（ml）OD630
1520.5
2520.5
3520.5
4520.5
表3大鼠预实验记录
体重（g）酒（ml）浓茶（ml）尿量（ml）清醒时间（min）
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
4、实行实验具体操作步骤
4.1随机将20只大鼠分成两个组，每组10只，雌雄各半，根据预实验结果（按XXml-XXml/kg）将两组大鼠进行灌胃复制急性酒精中毒模型，并根据预实验灌浓茶结果（按XXml-XXml/kg）随机给予其中一组进行浓绿茶灌胃（判断为急性酒精中毒后立即灌胃），作为实验组，另一组则作为对照组，同时并等量灌胃生理盐水,将各只大鼠固定于600ml矿泉水瓶中收集尿液，至大鼠清醒时（开始恢复活动为标准，注意观察防止其弄到水瓶，小组每个人负责3-4只）停止收集尿液
4.2将收集到的尿液（共20份）分别进行过滤，取滤液。
第一次反应取过滤尿液定容至5ml，并与0.02%酚试剂溶液2.5ml定容至50ml,静止反应（第一次反应）30min后，得到第一次反应液。
取第一次反应液5ml,0.02%酚试剂2ml,1%硫酸铁铵0.5ml,不加水，其他步骤与标准曲线制作相同。
表4大鼠尿液OD630值
实验组对照组
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
表5大鼠尿液乙醛含量
实验组（ul/ml）对照组（ul/ml）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
均数（x）
标准差（s）
t
p
简化步骤：
1：
配液按表1加液水浴测OD630
2：
标号称重灌酒/灌茶放瓶集尿过滤按表2加液水浴测OD630
5、可行性分析
（1）实验所需的大鼠、注射器、小试管、试管架、移液管、分光光度计、水浴箱、酚试剂、硫酸铵铁、标准乙醛溶液、蒸馏水等关键仪器和药品，生理实验室均可提供
（2）茶叶、矿泉水瓶、红星二锅头可以小组准备
（3）本小组成员已学习分光光度计使用、大鼠相关实验操作及统计学相关理论知识SPSS13.0软件操作及等相关知识和技能
（4）生理实验室具有许多优秀的带教老师，他们具有丰富的实验经验，可给以相关实验操作方面的帮助与指导
（5）分光光度法测定乙醛含量，已有相关文献提供简易方便的操作方法
（6）本实验为急性毒性实验，最多花费1天时间进行实验，不花费小组成员过多时间，不耽误课程
6、预期实验结果：
浓绿茶使急性酒精中毒大鼠尿液乙醛含量升高
7、实验记录图表
表6标准曲线的制作
标准乙醛反应液（ml）0.02%酚试剂（ml）1%硫酸铵铁（ml）水（ml）
1
2
3
4
5
6
7
8
表7大鼠体重
实验组（g）对照组（g）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
均数（x）
标准差（s）
t
p
表8大鼠尿液OD630值
实验组对照组
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
表9大鼠尿液乙醛含量
实验组（ug/ml）对照组（ug/ml）
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
均数（x）
标准差（s）
t
p
8、
统计方法应用spss13.0软件，实验结果以均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用成组设计t检验。
附注：
如果预实验中尿液测不到乙醛，改为测血液中的乙醛含量
升级会员 