生化实验指南.docx
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生化实验指南
生物化学检验技术
课程学习指南
（适用于医学检验专业专科使用）
生物化学及检验教研室编
一、课程简介
《生物化学检验》（临床生物化学检验、临床生化检验、生化检验、生化检验学、临床生物化学和生物化学检验、临床生物化学及生物化学检验、临床生物化学、临床化学等）是对人体健康和患病时化学状态的研究以及用于诊断、治疗和预防疾病的化学试验方法的应用。
它的主要任务是研究人体器官、组织、体液的化学组成和进行着的生化过程，以及疾病、药物对这些过程的影响，为疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防等各个方面提供信息和理论依据。
因此，《生物化学检验》既是一门研究人体健康和疾病时生理生化过程的医学基础理论学科，又是一门应用各种技术和方法分析机体健康和疾病时体液或组织样品中各种化学成分的医学应用技术学科，它在医学理论和医学实践中均具有相当重要的地位，是高等医学检验专业的一门主干学科和必修课程。
（一）课程目标
通过本课程的学习，要求学生掌握生物化学检验的基础理论、基本知识和基本技能，能够从事检验医学的生化实验诊断操作、评价和应用，培养成为医学检验技术专业高级专门人才。
具体归纳为：
1、掌握生物化学检验的基本理论、基本知识；
2、具有娴熟的生物化学检验的操作技能；
3、能够从事医学检验的生物化学实验诊断操作、评价和应用，具有独立的工作能力和解决实际问题的能力及创新意识；
4、树立和培养学生良好的职业道德和从业素质。
根据《生物化学检验》课程在检验医学中的作用和地位，为便于学生对《生物化学检验》课程的学习，该该课程分为三个不同程度的要求：
“掌握、熟悉和了解”。
“掌握”的内容，在授课时需要重点讲解，要求学生能全面理解，必须牢记并能融会贯通；“熟悉”的内容，要求学生能理解和记住概念与特点；“了解”的内容只扼要介绍有关知识概念或通过学生自学来认识和理解，有些则属于学科进展以及扩展知识面的内容。
在考试内容中，掌握的部分约占60％～70％，熟悉的部分约占20％～30％，了解的部分约占10％。
（二）教学内容与时间安排
本课程的教学内容由理论教学与实验教学两部分所组成。
理论学时数：
实验学时数=1：
1.10。
在搞好理论教学的同时，更加重视实验教学，着重培养学生的动手能力和初步的分析判断能力。
学时分配表
章
节
教学内容
时数
总时数
理论
实验
1
1
绪论
1
1
2
1-3
临床生物化学检验的基本知识
2
2
3
1-5
临床生物化学检验常用技术
6
4
2
4
1-5
自动生化分析技术
5
3
2
5
1-3
检测系统的评价与验证
10
4
6
6
1-5
酶学分析技术
4
4
7
1-2
蛋白质检验
12
4
8
8
1-2
糖代谢紊乱检验
5
3
2
9
1-2
脂代谢及脂代谢紊乱检验
12
4
8
10
1-2
钠、钾、氯和酸碱平衡检验
12
6
6
11
1-2
钙、磷、镁和微量元素检验
7
3
4
12
1-4
肝胆疾病的检验
12
4
8
13
1-5
肾功能及早期肾损伤检验
9
3
6
14
1-4
心脏损伤标志物检验
6
2
4
15
1-3
胰腺疾病检验
4
2
2
16
1-4
内分泌疾病检验
7
3
4
19
1-6
室内质量控制和室间质量评价
4
4
病例分析
2
2
合计
120
58
62
（三）学习参考资料
1、参考书
⑴教育部高职高专教材《生物化学检验》，段满乐主编，人民卫生出版社，2009年7月第1版。
⑵教育部高职高专规划教材《生物化学检验》，李萍主编，人民卫生出版社，2008年第2版。
⑶《临床生物化学和生物化学检验实验指导》，钱士匀主编，人民卫生出版社出版，2003年第2版。
⑷《生物化学检验实验指导》，江兴林主编，黄泽智副主编，中国医药科技出版社出版，2009年第一版。
⑸《生物化学检验实验指导》，黄泽智主编，2007年编的校本教参。
理论教学除指定教材外，还提供相关中、外参考书籍目录以拓宽学生的知识范围；还配有习题集（试题库），以加深学生课堂学习内容；理论学习还结合多媒体电化教学，以加深理论教学的深度与广度。
2、学习网站
丁香园（）
检验医学网（）
检验天空网（）
检验医学在线（）
二、学习指南
第1章绪论
学习要求：
1、掌握生物化学检验的任务。
2、熟悉生物化学检验的研究领域。
3、了解生物化学检验的发展。
重点难点剖析：
重点：
生物化学检验的内容。
难点：
生物化学检验的任务。
测试题：
一、名词解释
1、生物化学检验2、EBLM
二、填空题
1、生物化学检验包括、、和。
2、现代临床生化检验师应具备的能力有，，，，。
参考答案：
一、名词解释
1、生物化学检验：
是以健康和疾病时的生物化学过程为研究目的，通过测定组织、体液的成分，揭示疾病变化和药物治疗对机体生物化学过程和组织、体液成分的影响，以提供疾病诊断、病情监测、药物疗效、预后判断和疾病预防有用信息的一门学科。
2、EBLM：
即循证检验医学。
要求任何检验方法或技术只有在充分评价其准确、可靠、有助于医疗决策，以及经济有效后才能用于医疗实践，并要求检验人员能提供基于循证理论的检验指南。
二、填空题
1、普通生化检验特殊生化检验急诊生化检验床旁生化检验
2、研究开发质量保证分析能力信息化管理临床对话
第2章生物化学检验的标本
学习要求：
1、掌握血液标本的采集和处理。
2、熟悉影响检验结果的生物学因素。
3、了解尿液标本和特殊标本的采集。
重点难点剖析：
重点：
血液标本的采集和处理。
难点：
影响检验结果的生物学因素。
测试题：
一、名词解释
1、抗凝2、抗凝剂
二、填空题
1、生化检验常用的体液标本有、、和等，其中以标本最为常用。
2、生化检验中，是最常用的血液标本，是最常用的采血方法。
3、生化检验中常用的抗凝剂有、等，其中是血糖测定常用的抗凝剂。
若血糖测定的标本不加抗凝剂，则血标本中葡萄糖含量将以每小时的速度下降。
4、血气分析多使用血。
5、脑脊液的穿刺部位（成人）多在___________进行，脑脊液采集后分别装于三支_______试管中，第一管作______________，第二管作_____________，第三管作_____________。
6、在羊水检查时，应掌握好羊水分析的指征，一般在妊娠_______周羊水达到______以后才能进行，且要注意____________，取羊水的速度__________，标本量应控制在________.
7、枸橼酸钠凝血试验管适用于____________，抗凝剂与血液的比例是____________；枸橼酸钠血沉试验管要求抗凝剂与血液的比例是____________。
8、对抗凝剂的一般要求是____________，____________，____________。
9、影响检验结果的生物学因素有、和。
10、影响检验结果的生理因素有、、、、、
。
三、单项选择题
1、电解质检测的最佳真空采血管是（）
A、惰性分离胶促凝管B、肝素抗凝管C、血浆分离管D、EDTA抗凝管
2、一病人需检测尿醛固酮，最佳的防腐剂是（）
A、浓盐酸B、甲苯C、冰醋酸D、麝香草酚
3、不宜用肝素抗凝管的是（）
A、血凝试验B、血气分析C、血沉D、普通生化
4、EDTA抗凝管适用于（）
A、离子测定B、血液学检验C、凝血试验D、PCR试验
5、17-KS、17-OHCS、VMA等生化项目测定常用的防腐剂是（）
A、浓盐酸B、甲苯C、冰醋酸D、麝香草酚
6、尿肌酐、尿糖等生化项目测定常用的防腐剂是（）
A、浓盐酸B、甲苯C、冰醋酸D、麝香草酚
7、适用于尿钾、钠、钙、尿胆原等项目测定的防腐剂是（）
A、浓盐酸B、甲苯C、冰醋酸D、麝香草酚
8、肝素抗凝管不适合下列何种项目的检测（）
A、血气分析B、ESRC、WBC计数D、红细胞压积试验
9、血糖测定标本所用的抗凝剂中若无氟离子，则血标本中葡萄糖含量下降速度为（）
A、6%/小时B、8%/小时C、10%/小时D、15%/小时
10、枸橼酸钠凝血试验管要求抗凝剂与血液的比例为（）
A、1：
4B、1：
6C、1：
9D、1：
10
11、浓盐酸作为防腐剂，不适合尿液标本中下列何种生化项目的检测（）
A、VMAB、17—KSC、17-OHCSD、肌酐
参考答案：
一、名词解释
1、抗凝：
应用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固。
2、抗凝剂：
阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂。
二、填空题
1、血液尿液脑脊液腹水血液
2、静脉血静脉穿刺
3、肝素草酸钾—氟化钠草酸钾—氟化钠6%
4、动脉血
5、腰椎无菌细菌培养生化检查细胞计数
6、16200无菌操作不宜过快10--15ml
7、凝血实验1：
91：
4
8、用量少溶解度大不影响测定
9、生理因素饮食药物
10、性别年龄体型妊娠昼夜节律变化运动
三、单项选择题
1C2C3A4B5A6B7D8C9A10C11D
第3章生物化学检验实验室基本知识
学习要求：
1、掌握实验用纯水的三级标准；实验方法的分级、标准品分级及相互之间的联系；实验误差的定义、分类和表示方法；方法评价实验尤其是回收试验和干扰试验的原理和操作；诊断性能评价的指标。
2、熟悉纯水的制备方法；实验方法选择的原则和步骤；方法评价的基本内容和步骤；方法评价的指标；参考值和医学决定水平的概念。
3、了解水的纯度检查；方法性能判断的指标；受试者工作曲线的应用和用途。
重点难点剖析：
重点：
实验用纯水的三级标准；实验方法的分级、标准品分级及相互之间的联系；实验误差的定义、分类和表示方法；方法评价实验尤其是回收试验和干扰试验的原理和操作；诊断性能评价的指标。
难点：
实验误差的定义、分类和表示方法；方法评价实验尤其是回收试验和干扰试验的原理和操作。
测试题：
一、名词解释
1、决定性方法2、参考方法3、常规方法4、标准品5、一级标准品6、二级标准品7、控制物8、实验误差9、系统误差10、随机误差11、精密度12、准确度13、特异度14、干扰15、检测能力16、回收试验17、回收率18、允许分析误差19、参考值20、参考范围21、医学决定水平22、金标准23、ROC曲线
二、填空题
1、英译汉：
NCCLS的中文全称是；IFCC的中文全称是 。
2、实验室纯水的制备方法有、、、、、
。
3、临床实验室用水，一般选用级水，级水用于特殊实验，级水用作仪器的自来水清洁后冲洗。
4、IFCC根据实验方法的与的不同，将其分为、和三级。
5、一级标准品用于校正，评价和校正以及为定值。
6、实验方法的选择要重点考虑和。
7、系统误差可分为和。
引起系统误差的主要原因有和。
8、变异系数值越大，测定值离散度越，精密度越。
9、方法评价的基本内容是通过实验途径，测定并评价方法的和。
10、在方法评价试验中，初步评价包括、、。
11、准确度是指测定结果与接近的程度。
一般用和表示。
12、检测能力是指能与适当的相区别的待测物的最小值。
13、评价试验包括、、和。
14、重复性试验的目的是检测候选方法的误差，试验形式包括、、等。
15、回收试验是指候选方法对常规分析标本中所加入的准确测定的能力，用表示。
其试验的目的是检测候选方法的误差。
16、干扰试验是用来检测候选方法的误差。
消除干扰的最常用方法有设立和空白试验。
17、方法比较试验是用来检测候选方法的误差，最好选择作为比较方法。
18、方法学性能标准是运用统计方法制定出一系列上的%标本允许误差限度。
19、在方法学性能标准中，XC表示，EA表示。
20、针对随机误差的单值判断指标是，针对恒定误差的判断指标是。
21、诊断敏感度又称，1－敏感度称为。
22、ROC曲线中文名称为，其主要用途有、。
在ROC曲线中，选择位置高的点，阳性率（增加/降低）。
23、实验方法评价的指标有__________、__________、____________、____________等4个。
三、单项选择题
1、电阻率单位是（）
A、Ω/cmB、ΩC、s·cm-1D、Ω·cm
2、同位素稀释-质谱分析法应该属于（）
A、偏差已知方法B、参考方法C、决定性方法D、偏差未知方法
3、由于分析人员的操作习惯而造成的误差属于以下哪种误差（）
A、系统误差B、粗大误差C、方法误差D、随机误差
4、偏差和偏差系数一般用来表示（）
A、准确度B、特异度C、精密度D、灵敏度
5、EA表示（）的允许误差限度
A、90%B、95%C、5%D、85%
6、临床诊断敏感度的计算公式为（）
A、TN/（FP+TN）B、FP/（FP+TN）C、FN/（TP+FN）D、TP/（TP+FN）
7、建立一个实验方法时，常做回收率试验。
其主要目的是验证实验方法的（）
A、准确度 B、灵敏度 C、精密度 D、特异性
8、哪种评价试验可用来检测侯选方法的恒定系统误差（）
A、回收试验B、干扰试验C、对比试验D、重复性试验
9、下列表示实验误差的指标中，哪项除外（）
A、平均误差B、标准差C、变异系数D、特异度
10、下列表示方法中哪一项不表示精密度（）
A、标准差B、平均偏差C、变异系数D、再现性精密度
11、回收试验是检测候选方法的（）
A、比例系统误差B、恒定系统误差C、总误差D、系统误差
12、在检测过程中最难控制的误差是（）
A、操作误差B、偶然误差C、试剂误差D、方法误差
13、诊断特异性是指（）
A、在金指标诊断为“无病”的非患病者中，用诊断试验检出的阳性结果的百分率。
B、在金指标诊断为“有病”的非患病者中，用诊断试验检出的阴性结果的百分率。
C、在金指标诊断为“有病”的非患病者中，用诊断试验检出的阳性结果的百分率。
D、在金指标诊断为“无病”的非患病者中，用诊断试验检出的阴性结果的百分率。
14、诊断敏感度是指（）
A、在金指标诊断为“无病”的患者中用诊断试验检出的阳性百分率。
B、在金指标诊断为“无病”的患者中用诊断试验检出的阴性百分率。
C、在金指标诊断为“有病”的患者中用诊断试验检出的阳性百分率。
D、在金指标诊断为“有病”的患者中用诊断试验检出的阴性百分率。
15、下列哪项可代表检测限（）
A、空白读数+3SB、平均值±2SC、平均值±3SD、空白读数+2S
16、关于ROC，下列哪项是错误的（）
A、选择合适的阈值B、比较两个诊断同种疾病的试验
C、曲线围成的面积越大，诊断试验性能越好D、选择位置高的点，阳性率下降
17、精密度与准确度稍低于决定性方法的分析方法为（）
A、经典方法B、参考方法C、决定方法D、对比方法
18、实验室检查项目的允许误差估计与下列哪些因素有关（）
A、均值，标准差B、均值，变异系数
C、均值，标准误D、标准差，变异系数
19、一血糖标本在甲医院测定，结果在正常范围内，而乙医院测得结果异常，后经核查乙医院所用标准液已变质，这种误差属于（）
A、系统误差B、偶然误差C、试剂误差D、方法误差
20、在检测过程中最难控制的误差是（）
A、操作误差B、偶然误差C、试剂误差D、方法误差
21、为减少分析测定中的偶然误差，可采用（）
A、对照试验B、空白试验C、仪器校正D、增加平行试验次数
22、临床实验室的质控材料最佳来源为（）
A、动物血清B、人混合血清C、标准品的水溶液D、标准品的有机溶液
四、计算题
1、一例血糖样本，血清总量2.4ml，加入5.56mmol/L的葡萄糖糖液0.1ml，加糖前的测定值为5.66mmol/L，加糖后测定值为5.88mmol/L，其回收率为多少？
2、有下列四个样品：
基础样品：
血清2ml+0.1ml生理盐水
回收样品Ⅰ：
血清2ml+0.1ml20mmol/L葡萄糖标准液的7光度况酯径
回收样品Ⅱ：
血清2ml+0.1ml60mmol/L葡萄糖标准液
回收样品Ⅲ：
血清2ml+0.1ml100mmol/L葡萄糖标准液
用GOD-POD法测得上述四个样品的浓度分别为5.88mmol/L、6.80mmol/L、8.90mmol/L和10.70mmol/L。
试计算回收样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的加入浓度、回收浓度、回收率以及平均回收率。
3、有下列三个样品：
基础样品：
血清0.9ml+0.1ml生理盐水
干扰样品Ⅰ：
血清0.9ml+0.1ml4mmol/L尿酸的7光度况酯径
干扰样品Ⅱ：
血清0.9ml+0.1ml8mmol/L尿酸
用GOD-POD法测定的上述三个样品的葡萄糖浓度分别为：
6.50mmol/L、6.20mmol/L、5.95mmol/L。
试计算干扰样品Ⅰ、Ⅱ的加入尿酸值和干扰值以及平均每1mmol/L的尿酸会产生多少mmol/L葡萄糖的干扰值。
4、以骨髓铁染色为诊断缺铁性贫血的金标准，判断血清铁蛋白检验的诊断效果。
根据表1所给的血清铁蛋白对诊断贫血的有关数据，计算血清铁蛋白的漏诊率、误诊率、诊断准确度、阳性预测值、阴性预测值及流行率。
表1 血清铁蛋白检测结果
血清铁蛋白检测
结果（ng/ml）
缺铁性贫血（85）
非缺铁性贫血（45）
阳性（＜30）
9
22
阴性（≥30）
76
23
5、已知前列腺特异抗原（PSA）的诊断敏感度为80%，诊断特异度为90%，医生根据病史体检等估计该病人试验前诊断为前列腺癌的可能性为8%，试计算应用PSA检查，该病人试验后诊断患前列腺癌的可能性是多少？
五、问答题
1、简述实验方法的分级以及各级方法的用途。
2、简述各级标准品与各级实验方法之间的关系。
3、简述实验方法选择的原则及步骤。
4、简述方法比较试验中比较方法的选择。
5、在实验的诊断性评价中，ROC曲线主要用于哪些方面？
参考答案：
一、名词解释
1、决定性方法：
准确度最高，系统误差最小；经过详细研究未发现产生误差的原因，其测定结果与“真值”最为接近的方法。
主要有重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）等。
2、参考方法：
是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。
这类方法干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。
3、常规方法：
具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用，其性能指标符合临床或其它目的的需要的方法。
4、标准品：
它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定，可用以校正仪器和某种测定方法的物质。
5、一级标准品：
已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量。
主要用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。
6、二级标准品：
这类标准品可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相似基质中。
可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法定值或用一级标准品比较而确定。
主要用于常规方法的标化和控制物的定值。
7、控制物：
控制物用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差。
有定值血清和未定值血清两种。
控制物不能用于标定仪器或方法。
8、实验误差：
简称误差，是量值的给出值与其客观真值之差。
9、系统误差：
是指一系列测定值对真值存在同一倾向的偏差。
它具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向；一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现。
当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。
10、随机误差：
是指在实际工作中，多次重复测定某一物质时引起的误差。
误差没有一定的大小和方向，可正可负，数据呈正态分布；具有不可预测性，不可避免，但可控制在一定范围内；分析步骤越多，造成这种误差的机会越多；随测定次数增加，其算术均数就越接近于真值。
11、精密度：
是表示测定结果中随机误差大小程度的指标。
它表示同一标本在一定条件下多次重复测定所得到的一系列单次测定值的符合程度。
12、准确度：
是指测定结果与真值接近的程度，一般用偏差和偏差系数表示。
13、特异度：
即专一性，是指在特定实验条件下分析试剂只对待测物质起反应，而不与其它结构相似的非被测物质发生反应。
分析方法特异度越高，则测定结果越准确。
14、干扰：
是指标本中某些非被测物质本身不与分析试剂反应，但以其它形式使待测物测定值偏高或偏低的现象，这些非被测物质称为干扰物。
15、检测能力：
即检测限度或检出限，是指能与适当的“空白”读数相区别的待测物的最小值。
16、回收试验：
回收是指候选方法准确测定加入常规分析标本的纯分析物的能力，用回收率表示。
回收试验的目的是检测候选方法的比例系统误差。
17、回收率：
回收试验中测得的回收浓度占加入浓度的百分比例。
18、允许分析误差：
表示95%标本的允许误差限度，或95%的病人标本其误差应小于这个限。
19、参考值：
从按若干标准规定的参考人群中选定一定数量的参考个体，通过检测所得结果，经统计学处理求得均值（
）和标准差（s），均值（
）即为参考值。
20、参考范围：
从按若干标准规定的参考人群中选定一定数量的参考个体，通过检测所得结果，经统计学处理求得均值（
）和标准差（s），上述结果的95%的分布区间（
±2s）即为参考范围。
21、医学决定水平：
为对临床病人的诊疗具有医学判断作用的临界分析物浓度。
22、金标准：
是指通过活检、尸检、外科手术、随访等所做出的决定性诊断。
23、ROC曲线：
ROC曲线（receiveroperatingcharacteristiccurve）即受试者工作特征曲线，或又称相对工作曲线（relativeoperatingcharacteristiccurve）；以试验的敏感度为纵坐标，1－特异度（假阳性率FP率，FPR）为横坐标作图，依照连续分组测定的数据，分别计算TPR及FPR，并将相对的点连续起来就得到受试者工作曲线（ROC曲线）。
二、填空题
1、美国临床实验室标准委员会国际临床化学联合会
2、蒸馏法离子交换法电渗透法炭吸附法超滤膜法混合纯化系统
3
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