实验报告血液凝固及其影响因素doc.docx
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实验报告血液凝固及其影响因素doc
实验五：
血液凝固及其影响因素
实验人：
同组人：
【实验目的】
1．学习血液凝固的基本过程
2．了解加速或延缓血液凝固的一些因素
【实验原理】
血液凝固是一个酶的有限水解激活过程，在此过程中有多种凝血因子参与。
根据凝血过程起动时激活因子来源不同，可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。
内源性激活途径是指参与血液凝固的所有凝血因子在血浆中，外源性激活途径是指受损的组织中的组织因子进入血管后，与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。
【实验材料和用具】
家兔
清洁小试管7个、小烧杯2个、竹签、秒表、试管架、哺乳动物手术器械一套、兔手术台、动脉夹、塑料动脉插管、线、棉花、水浴槽、冰盒
液状石蜡、肝素、草酸钾1~2mg、脑匀浆液0.1ml、生理盐水
【实验过程】
1、动物麻醉及颈部手术（此部由助教老师操作）
取一只动物，称重。
按1g/kg体重的剂量将乌拉坦（氨基甲酸乙酯）由耳缘静脉缓慢注入，观察动物肌张力、呼吸与角膜反射的变化。
动物麻醉后背位固定于兔手术台上。
剪去颈部手术野的毛，沿颈正中线在喉头上一指至锁骨上一指的地方作一5～7cm的皮肤切口。
分离皮下组织及肌肉。
2、颈总动脉插管（此部由助教老师操作）
在气管两侧辨别并分离颈总动脉，颈总动脉下方穿两条线备用。
在左侧颈总动脉的近心端夹一动脉夹，在动脉夹远心端距动脉夹约3cm处结扎。
用小剪刀在结扎线的近侧（结扎线与动脉夹之间）沿向心方向剪一小斜口（约占管径的一半），向心脏方向插入动脉插管，由备用的线结扎固定。
取血时将动脉夹松开即可。
3、血液凝固的加速和延缓观察
1.打开兔颈总动脉夹，血液从动脉插管流出，弃去第一份1mL动脉血后，向每个试管中注入1mL兔动脉血，并摇匀。
2.自血液流出动脉插管开始计时。
除第1管外，其他各管每隔15秒钟将试管倾斜一次，观察液面是否倾斜即血液是否流动，直到试管内血液不再流动为止，记录凝血时间。
3.当第2管已经凝固时，再倾斜第1管看血液是否凝固，若尚未凝固则按上述方法每隔15秒钟倾斜一次，直到血液凝固为止，记录凝血时间，即为该兔血的凝固时间。
4.以第2管为对照，各管观察其他各管中血液凝固时间。
5.向第9管中滴加2％氯化钙2滴，观察血液是否凝固。
6.取出第5管中的玻棒，用水洗净，观察附着在玻棒上的纤维蛋白。
注意事项：
a）取放试管时要用拇指和食指捏住试管的上端，不要握住试管的底部，以免手的温度影响结果。
b）每支试管口径及采血量要尽量一致，不可相差太大。
c）记录凝血时间要准确。
d）判断凝血的标准要前后一致。
一般以倾斜试管达45°时，试管内血液不见流动为准。
【实验结果及相关讨论】
管号
实验条件
凝血时间
（一组）
凝血时间
（二组）
现象解释
1
加入0.1％肝素溶液0.1mL（6滴）
大于20min
大于20min
肝素是抗凝剂，能不可逆的阻止血液凝固。
由于肝素钠具有带强负电荷的理化特性，能干扰血凝过程的许多环节，在体内外都有抗凝血作用。
其作用机制比较复杂，主要通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，而增强后者对活化的Ⅱa、Ⅸa、Ⅹa、Ⅺa和Ⅻa凝血因子的抑制作用。
其后果涉及阻止血小板凝集和破坏，妨碍凝血激活酶的形成；阻止凝血酶原变为凝血酶；抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变成纤维蛋白。
中和组织凝血活素（因子Ⅲ）。
抑制血小板的聚集和释放。
它对血中有机成分和无机成分的测定均无影响。
2
加入2％草酸钾溶液0.1mL（6滴）
大于20min
血液凝固的多个环节中都需要钙离子的参与，故通常用枸橼酸钠、草酸钠和草酸钾作为体外抗凝剂，它们可与钙离子结合而除去血浆中的钙离子，从而起到抗凝作用。
理论上当继续向血液中加入CaCl2溶液，CaCl2中的钙离子会起到凝血因子IV的作用，从而使再次启动凝血过程，血液凝固。
草酸盐是可逆性抗凝剂。
但本次实验中加入CaCl2后并没有出现凝血现象，可能是CaCl2溶液配置有问题，或者由于操作不当，凝血因子已经完全失活。
3
室温（6滴生理盐水）
静置
7min30s
7min30s
血液流出血管后，很快会凝固。
血液流出血管后血小板
4
室温（6滴生理盐水）
每隔15S倾斜45°
4min
5min
倾斜可加速血小板的粘附聚集过程，并加大血小板释放的凝血因子与血细胞的接触面积，从而加快了凝血的过程。
该过程是内源性凝血过程。
5
细玻璃粉少许（6滴生理盐水）
2min45s
3min
玻璃粉是异物，可激活凝血因子Ⅶ及血小板，启动凝血过程。
6
脑组织浸出液（6滴）
15s
30s
脑组织液中有组织因子途径抑制物，是外源性凝血途径的特异性抑制剂，因而能加速凝血过程。
7
置于40℃水浴（6滴生理盐水）
165s
165s
适当升高温度，能增加酶的活性，加快凝血过程。
8
置于10℃水浴（6滴生理盐水）
大于20min
降低温度可以降低酶的活性，延缓凝血过程。
9
竹签搅拌（6滴生理盐水）
有富有弹性的纤维蛋白纠缠在竹签上
同上
在竹签的搅动下，特别是缠上线的接触面粗糙的竹签，能加速凝血过程，使凝血因子按一定顺序相继激活而生成凝血酶，最终使纤维蛋白原变为纤维蛋白，而纠结在竹签上，形成一层蛋白膜。
机体凝血系统包括凝血和抗凝两个方面，两者间的动态平衡是正常机体维持体内血液流动状态和防止血液丢失的关键。
机体的正常止凝血，主要依赖于完整的血管壁结构和功能，有效的血小板质量和数量，正常的血浆凝血因子活性。
其中，血小板和凝血因子是生理性止凝血的重要成分,（见图1）。
抗凝系统不仅包括抗凝因子，还包括纤溶系统。
BT出血时间 CFT束臂试验 CRT血块收缩试验 BPC血小板计数
CT凝血时间 RT复钙时间 APTT活化部分凝血活酶时间
PT凝血酶原时间 PF3血小板第3因子 TF组织因子 Fb纤维蛋白
TXA2血栓素A25-HT5－羟色胺 PK激肽释放酶原 HMWK高分子量激肽原
图1正常止血机制及血栓与止血常用筛选试验检测环节
血小板的作用：
在正常的血液循环中，血小板并不与内皮细胞表面或其他细胞发生作用，而是沿着毛细血管内壁排列，维持其完整性，血管局部受损伤时，血小板的止血兼有机械性的堵塞伤口和生物化学性粘附聚集作用。
止血时，首先是受损的血管壁发生收缩，使局部血液流动变慢或减少。
血液中的血小板在vWF因子存在下迅速粘附于暴露的胶原纤维，此时血小板被激活，血小板形态发生改变，由正常的圆盘状态变为圆球形，伪足突起，血小板发生聚集（血小板膜糖蛋白IIb/IIIa由纤维蛋白原介导发生互相粘附、聚集），此为血小板第一相聚集，激活的血小板便发生释放反应和花生四烯酸代谢，其中许多物质，如血小板的ADP等，可加速血小板的聚集、变性成为不可逆的“第二相聚集”，形成白色血栓，构成了初期止血的屏障。
与此同时，由血小释放和激活许多促凝物质参与血液凝固反应。
血小板膜磷脂表面提供了凝血反应的场所，血小板第3因子在凝血过程多个环节中发挥重要作用，血小板合成释放的TXA2和5-HT促使进一步收缩，血小板收缩蛋白则最终可使纤维蛋白收缩（血块收缩），使血栓更为坚固，止血更加彻底。
凝血过程：
血液凝固简称凝血，是血液由流动状态变为凝胶状态的过程，它是止血功能的重要组成部分。
凝血过程是一系列凝血因子被相继酶解激活的过程，最终生成凝血酶，形成纤维蛋白凝块。
迄今为止，参与凝血的因子共有14个。
其中用罗马数字编号的有12个（从Ⅰ－Ⅷ，其中因子Ⅵ并不存在）。
习惯上，前4个凝血因子常分别称为纤维蛋白原（因子Ⅰ）、凝血酶（因子Ⅱ）、组织因子（因子Ⅲ）和钙离子（因子Ⅳ）。
凝血因子VI已知是血清中活化的凝血因子V，故不再视为一独立的凝血因子。
1．内源性凝血途径
内源性凝血途径是指参加的凝血因子全部来自血液（内源性）。
临床上常以活化部分凝血活酶时间（APTT）来反映体内内源性凝血途径的状况。
内源性凝血途径是指从因子Ⅻ激活，到因子X激活的过程。
当血管壁发生损伤，内皮下组织暴露，带负电荷的内皮下胶原纤维与凝血因子接触，因子Ⅻ即与之结合，在HK和PK的参与下被活化为Ⅻa。
在不依赖钙离子的条件下，因子Ⅻa将因子Ⅺ激活。
在钙离子的存在下，活化的Ⅺa又激活了因子Ⅸ。
单独的Ⅸa激活因子X的效力相当低，它要与Ⅷa结合形成1：
1的复合物，又称为因子X酶复合物。
这一反应还必须有Ca2+和PL共同参与。
2．外源性凝血途径
外源性凝血途径：
是指参加的凝血因子并非全部存在于血液中，还有外来的凝血因子参与止血。
这一过程是从组织因子暴露于血液而启动，到因子Ⅹ被激活的过程。
临床上以凝血酶原时间测定来反映外源性凝血途径的状况。
组织因子是存在于多种细胞质膜中的一种特异性跨膜蛋白。
当组织损伤后，释放该因子，在钙离子的参与下，它与因子Ⅶ一起形成1：
1复合物。
一般认为，单独的因子Ⅶ或组织因子均无促凝活性。
但因子Ⅶ与组织因子结合会很快被活化的因子Ⅹ激活为Ⅶa，从而形成Ⅶa组织因子复合物，后者比Ⅶa单独激活因子Ⅹ增强16000倍。
外源性凝血所需的时间短，反应迅速。
外源性凝血途径主要受组织因子途径抑制物（TFPI）调节。
TFPI是存在于正常人血浆及血小板和血管内皮细胞中的一种糖蛋白。
它通过与因子Ⅹa或因子Ⅶa-组织因子-因子Ⅹa结合形成复合物来抑制因子Ⅹa或因子Ⅶa-组织因子的活性。
另外，研究表明，内源凝血和外源凝血途径可以相互活化。
3．凝血的共同途径
从因子X被激活至纤维蛋白形成，是内源、外源凝血的共同凝血途径。
主要包括凝血酶生成和纤维蛋白形成两个阶段。
（1）凝血酶的生成：
即因子Ⅹa、因子Ⅴa在钙离子和磷脂膜的存在下组成凝血酶原复合物，即凝血活酶，将凝血酶原转变为凝血酶。
（2）纤维蛋白形成：
纤维蛋白原被凝血酶酶解为纤维蛋白单体，并交联形成稳定的纤维蛋白凝块，这一过程可分为三个阶段，纤维蛋白单体的生成，纤维蛋白单体的聚合，纤维蛋白的交联。
纤维蛋白原含有三对多肽链，其中纤维蛋白肽A（FPA）和B（FPB）带较多负电荷，凝血酶将带负电荷多的纤维蛋白肽A和肽B水解后除去，转变成纤维蛋白单体。
从纤维蛋白分子中释放出的FPA和FPB可以反映凝血酶的活化程度，因此FPA和FPB的浓度测定也可用于临床高凝状态的预测。
纤维蛋白单体生成后，即以非共价键结合，形成能溶于尿素或氯醋酸中的纤维蛋白多聚体，又称为可溶性纤维蛋白。
纤维蛋白生成后，可促使凝血酶对因子ⅩⅢ的激活，在ⅩⅢa与钙离子的参与下，相邻的纤维蛋白发生快速共价交联，形成不溶的稳定的纤维蛋白凝块。
纤维蛋白与凝血酶有高亲和力，因此纤维蛋白生成后即能吸附凝血酶，这样不仅有助于局部血凝块的形成，而且可以避免凝血酶向循环中扩散。
在凝血共同途径中有两步重要的正反馈反应，有效地放大了内外源凝血途径的作用。
一是Xa形成后，可反馈激活因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ；
二是凝血酶形成后，可反馈激活因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅺ、以及凝血酶原。
凝血酶还可促使血小板发生聚集和释放反应，刺激血小板收缩蛋白引起血块退缩。
但大量凝血的产生却反过来破坏因子Ⅷ、和因子Ⅴ，这是正常凝血的负反馈调节，以防止不适当的过度凝血。
抗凝剂的选择：
（1）草酸钾：
常用于尿素、肌酐、纤维蛋白原等测定，不能用钾、钙等测定，对LDH、丙酮酸激酶、AKP和淀粉酶有抑制作用。
（2）肝素：
常用于电解质、血气分析、血氨等测定。
抗凝剂比例为50～61u肝素/5ml血。
注意钠盐可使淀粉酶升高。
（3）氟化钠：
常用氟化钠—草酸钠混合抗凝剂作血糖测定的抗凝剂，氟化钠可以抑止烯醇化酶，它可避免血细胞葡萄糖酵解酶的作用，延长标本的保存时间。
（4）二乙胺四乙酸钠盐（EDTA-Na2）：
生化常用的抗凝剂，但不能用于钙、钠、及含氮物质的测定，对淀粉酶、肌酸激酶、AKP、ALP、5’-核苷酸酶等可抑制，对丙酮酸激酶有明显升高的作用。
（5）枸橼酸钠，测定血沉用3.8%枸橼酸钠抗凝，抗凝剂与血液比例为1：
4，凝血试验需用3.2%枸橼酸钠抗凝，比例为1：
9。
（6）实验室使用抗凝剂种类较多，血细胞分析及红细胞比积测定宜用EDTA·K2抗凝，保证室温下6小时RBC体积不变，抗凝剂比例为1.0～2.0mg/1ml血。
【参考文献】
生理学姚泰人民卫生出版社
动物生理学实验魏香清华大学出版社XX大学生实习报告总结3000字
社会实践只是一种磨练的过程。
对于结果，我们应该有这样的胸襟：
不以成败论英雄，不一定非要用成功来作为自己的目标和要求。
人生需要设计，但是这种设计不是凭空出来的，是需要成本的，失败就是一种成本，有了成本的投入，就预示着的人生的收获即将开始。
小草用绿色证明自己，鸟儿用歌声证明自己，我们要用行动证明自己。
打一份工，为以后的成功奠基吧!
在现今社会，招聘会上的大字板都总写着“有经验者优先”,可是还在校园里面的我们这班学子社会经验又会拥有多少呢?
为了拓展自身的知识面，扩大与社会的接触面，增加个人在社会竞争中的经验，锻炼和提高自己的能力，以便在以后毕业后能真正的走向社会，并且能够在生活和工作中很好地处理各方面的问题记得老师曾说过学校是一个小社会，但我总觉得校园里总少不了那份纯真，那份真诚，尽管是大学高校，学生还终归保持着学生身份。
而走进企业，接触各种各样的客户、同事、上司等等，关系复杂，但你得去面对你从没面对过的一切。
记得在我校举行的招聘会上所反映出来的其中一个问题是，学生的实际操作能力与在校的理论学习有一定的差距。
在这次实践中，这一点我感受很深。
在学校，理论学习的很多，而且是多方面的，几乎是面面俱到的，而实际工作中，可能会遇到书本上没学到的，又可能是书本上的知识一点都用不上的情况。
或许工作中运用到的只是简单的问题，只要套公式就能完成一项任务，有时候你会埋怨，实际操作这么简单，但为什么书本上的知识让人学的那么吃力呢?
两耳不闻窗外事，一心只读圣贤书“只是古代读书人的美好意愿，它已经不符合现代大学生的追求，如今的大学生身在校园，心儿却更加开阔，他们希望自己尽可能早地接触社会，更早地融入丰富多彩的生活。
时下，打工的大学生一族正逐渐壮大成了一个部落，成为校园里一道亮丽的风景。
显然，大学生打工已成为一种势不可挡的社会潮流，大学生的价值取向在这股潮流中正悄悄发生着改变。
对于大学生打工，一直是”仁者见仁，智者见智“,许多人的看法不尽相同。
每个人都有自己的人生模式，我们有理由走自己选择的人生路，只要把握住自己，掌握好学习与打工的分寸，肯定能把大学这个人生阶段过得丰富多彩。
打工的途径或者形式多种多样，只要是对社会有益，对自己积累人生经历有益，还能够有少量收入，就可以毫不犹豫的参与其中。
虽然在实践中我只是负责比较简单的部分，但能把自己在学校学到的知识真正运用出来也使我颇感兴奋!
在学校上课时都是老师在教授，学生听讲，理论占主体，而我对知识也能掌握，本以为到了企业能够应付得来，但是在企业里并没有想象的那么容易，平时在学校数字错了改一改就可以交上去，但在工厂里，数字绝对不可以错，因为质量是企业第一生命，质量不行，企业生产就会跟不上，而效率也会随之下降，企业就会在竞争的浪潮中失败。
因此，每一个环节都不能出错。
这种要求是我们在课堂上学不到的。
在学校里可能只需会解一道题，算出一个程式就可以了，但这里更需要的是与实际相结合，没有实际，只是纸上谈兵是不可能在社会立足的，所以一定要特别小心谨慎，而且一旦出错并不是像学校里一样老师打个红叉，然后改过来就行了，在工厂里出错是要负责任的，这关乎工厂的利益存亡。
总之，这个寒假的社会实践是丰富而又有意义，一些心得和体会让人感到兴奋，但却决不仅仅用兴奋就能描述的，因为这是一种实实在在收获，是对”有经验者优先“的感悟。
……
在我的打工生活中，我也明白了许多：
在日常的工作中上级欺压、责备下级是不可避免的。
虽然事实如此，但这也给我上了宝贵的一课。
它让我明白到别人批评你或是你听取他人的意见时，一定要心平气和，只有这样才能表示你在诚心听他说话。
虽然被批评是很难受的，而且要明确表示你是真心在接受他们的批评。
因为这样才能在失败中吸取教训，为以后的成功铺路。
我们要学会从那里跌倒就从哪里爬起来，这才是我所应该做的。
我也从工作中学习到了人际交往和待人处事的技巧。
在人与人的交往中，我能看到自身的价值。
人往往是很执着的。
可是如果你只问耕耘不问收获，那么你一定会交得到很多朋友。
对待朋友，切不可斤斤计较，不可强求对方付出与你对等的真情，要知道给予比获得更令人开心。
不论做是事情，都必须有主动性和积极性，对成功要有信心，要学会和周围的人沟通思想、关心别人、支持别人。
打工的日子，有喜有忧，有欢乐，也有苦累，也许这就是打工生活的全部吧。
我不知道多少打工的人有过这种感觉，但总的来说，这次的打工生活是我人生中迈向社会的重要一步，是值得回忆的。
现在想来，二十四天的打工生活，我收获还是蛮大的。
我所学到的生活的道理是我在学校里无法体会的，这也算是我的一分财富吧。
现今，在人才市场上大学生已不是什么”抢手货“,而在每个用人单位的招聘条件中，几乎都要求有工作经验。
所以，大学生不仅仅要有理论知识，工作经验的积累对将来找工作也同样重要。
事情很简单，同等学历去应聘一份工作，公司当然更看重个人的相关工作经验。
就业环境的不容乐观，竞争形式的日趋激烈，面对忧虑和压力，于是就有了像我一样的在校大学生选择了寒期打工。
寒假虽然只有短短的一个月，但是在这段时间里，我们却可以体会一下工作的辛苦，锻炼一下意志品质，同时积累一些社会经验和工作经验。
这些经验是一个大学生所拥有的”无形资产“,真正到了关键时刻，它们的作用就会显现出来。
大学生除了学习书本知识，还需要参加社会实践。
因为很多的大学生都清醒得知道”两耳不闻窗外事，一心只读圣贤书“的人不是现代社会需要的人才。
大学生要在社会实践中培养独立思考、独立工作和独立解决问题能力。
通过参加一些实践性活动巩固所学的理论，增长一些书本上学不到的知识和技能。
因为知识要转化成真正的能力要依靠实践的经验和锻炼。
面对日益严峻的就业形势和日新月异的社会，我觉得大学生应该转变观念，不要简单地把暑期打工作为挣钱或者是积累社会经验的手段，更重要的是借机培养自己的创业和社会实践能力。
现在的招聘单位越来越看重大学生的实践和动手能力以及与他人的交际能力。
作为一名大学生，只要是自己所能承受的，就应该把握所有的机会，正确衡量自己，充分发挥所长，以便进入社会后可以尽快走上轨道。
除了工作中我学到很多很多在学习中无法学到的知识和经验外，在我看来，我收获最大的是，我变得很开朗很自信。
以前在人群里，我胆小得几乎宁愿缩在角落里，希望没人能注意到我。
而这一次，在我们的小组会议里，我变得很自信，我勇于在大家面前表达我的看法，勇于向组长提出建议。
更有甚者，在每一次活动中，我都踊跃参加，表现相当积极。
组员居然不相信我之前会是一个相当内向的人。
我觉得，这次社会服务活动给我最多的是，让我自己有了很大的改变，而且这个改变，是我之前都一直想要的。
在这次寒期的工作中，我懂得了理论与实践相结合的重要性，获益良多，这对我今后的生活和学习都有很大程度上的启发。
这次的打工是一个开始，也是一个起点，我相信这个起点将会促使我逐步走向社会，慢慢走向成熟。
这次的实践的确给予了我很多。
今后，我将继续保持认真负责的工作态度，高尚的思想觉悟，进一步完善和充实自己，争取在以后的学习中更好的完善自己，在以后的实践中更好的运用去自己的只是，做一个合格的大学生，将来做一名对社会有用的人。
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虽然被批评是很难受的，而且要明确表示你是真心在接受他们的批评。
因为这样才能在失败中吸取教训，为以后的成功铺路。
我们要学会从那里跌倒就从哪里爬起来，这才是我
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