第36讲细胞工程讲练结合.docx
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第36讲细胞工程讲练结合
第36讲 细胞工程
[考纲明细] 1.植物组织培养（Ⅱ） 2.动物细胞培养与体细胞克隆（Ⅱ） 3.细胞融合与单克隆抗体（Ⅱ）
板块一 知识·自主梳理
一、细胞工程的概念
1．原理和方法：
应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法。
2．操作水平：
细胞水平或细胞器水平。
3．目的：
按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品。
4．分类：
根据操作对象的不同，分为植物细胞工程和动物细胞工程。
二、植物细胞工程
1．细胞的全能性
（1）含义：
具有某种生物全部遗传信息的任何一个细胞，都具有发育成完整生物体的潜能。
（2）植物细胞全能性表达条件：
具有完整的细胞结构，处于离体状态，提供一定的营养、激素和其他适宜外界条件。
（3）全能性大小
植物细胞：
受精卵＞生殖细胞＞体细胞。
动物细胞：
受精卵＞生殖细胞＞体细胞核（动物细胞全能性受限制，但细胞核具有全能性）。
2．植物组织培养技术
（1）原理：
植物细胞具有全能性。
（2）过程
3．植物体细胞杂交技术
（1）概念：
将不同种的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。
（2）操作流程
①过程a为去除细胞壁获得具有活力的原生质体，用到的酶是纤维素酶和果胶酶。
②过程b是原生质体的融合，其原理是细胞膜具有一定流动性。
人工诱导的方法有物理法，包括离心、振动、电激等；化学法一般用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。
③过程c是原生质体融合后再生出细胞壁，这是原生质体融合成功的标志。
④过程d是植物组织培养，形成杂种植株，其原理是植物细胞的全能性。
（3）意义：
克服了远缘杂交不亲和的障碍。
4．植物细胞工程的应用
（1）微型繁殖
①概念：
指用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术，又叫快速繁殖技术。
②特点：
保持优良品种的遗传特性；高效快速地实现种苗的大量繁殖。
③实例：
利用组织培养技术来培育兰花。
（2）作物脱毒
①材料：
植物的分生区（如茎尖）。
分生区附近的病毒极少，甚至无病毒。
②优点：
使农作物增产。
（3）人工种子
①概念：
以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料，经过人工薄膜包装得到的种子。
②特点：
后代无性状分离；不受气候、季节和地域限制。
（4）单倍体育种
①过程
花药离体培养→单倍体植株
正常植株
②优点：
得到纯合子，能稳定遗传；明显缩短育种年限。
（5）突变体的利用
①突变体：
在植物组织培养过程中，由于培养细胞一直处于不断的分生状态，因此容易受到培养条件和外界压力的影响而发生突变，由此发育而成的个体称为突变体。
②利用：
从突变体中筛选出对人们有利突变体，进而培育成新品种，即突变体育种。
（6）细胞产物的工业化生产
①细胞产物：
蛋白质、脂肪、糖类、药物、香料等。
②技术：
植物组织培养技术。
③培养阶段：
愈伤组织阶段。
三、动物细胞工程
1．动物细胞工程常用的技术手段
动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。
2．动物细胞培养
（1）原理：
细胞增殖。
（2）过程
―→
―→
①动物组织块
选材：
一般选取胚胎或幼龄动物的器官或组织。
选材原因：
分化程度低，增殖能力强，易于培养。
②原代培养：
具有贴壁生长和接触抑制的特点。
③传代培养
做法：
贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶等处理后分瓶培养。
胰蛋白酶的作用：
使细胞从瓶壁上脱离下来。
培养细胞的特点：
10代以内，保持正常的二倍体核型；10～50代，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，部分细胞的细胞核型可能会发生变化；50代以后，少部分细胞获得不死性可无限增殖。
（3）培养条件
①无菌、无毒环境
培养液和培养用具进行无菌处理；培养过程加抗生素，防止培养过程中的污染；定期更换培养液，清除代谢产物。
②营养：
除糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素之外通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。
③适宜的温度：
36.5℃±0.5℃；适宜的pH：
7.2～7.4。
④气体环境
3．动物体细胞核移植技术和克隆动物
（1）核移植分类：
胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
（2）动物体细胞核移植技术的过程
（3）原理：
动物体细胞核具有全能性。
（4）选用去核卵（母）细胞的原因：
卵（母）细胞比较大，容易操作；卵（母）细胞细胞质多，营养丰富，含有促进核全能性表达的物质。
（5）克隆动物性状与供体基本相同
原因：
克隆动物的大部分性状受细胞核控制，而细胞核来自供体；克隆动物的细胞质遗传物质来自受体卵母细胞的细胞质；生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境影响。
4．动物细胞融合
（1）方法：
化学法：
需要用聚乙二醇（PEG）；生物法：
灭活的病毒；物理法：
电激等诱导因素。
（2）原理：
细胞膜的流动性。
（3）意义：
突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。
为制备单克隆抗体开辟了新途径。
5．单克隆抗体
（1）制备原理：
一种浆细胞产生一种抗体，浆细胞在体外不能无限增殖；骨髓瘤细胞能无限增殖；浆细胞与骨髓瘤细胞融合得到杂交瘤细胞，既能无限增殖，又能产生特异性抗体。
（2）制备过程
①杂交瘤细胞的特点：
既能大量增殖，又能产生某种特异性抗体。
②制备单克隆抗体过程中两次筛选的方法及目的
③单克隆抗体的提取场所
体外培养——培养液中提取。
体内培养——小鼠腹水中提取。
（3）单克隆抗体的优点：
特异性强、灵敏度高，可大量制备。
（4）用途：
作为诊断试剂；用于治疗疾病和运载药物。
◆ 深入思考
1．植物体未离体的组织、细胞并未表现出全能性，可能的原因是什么？
提示 在特定的时间和空间条件下，细胞中的基因会选择性地表达出各种蛋白质，分化形成不同的细胞，从而构成生物体的不同组织。
2．如何检测杂交瘤细胞是否产生单克隆抗体？
提示 可利用抗体与抗原的特异性结合原理检测。
杂交瘤细胞产生的单克隆抗体是一种分泌蛋白，能够和特定的抗原结合产生特定的反应，因此可用来检测抗体的产生。
◆ 自查诊断
1．棉花根尖细胞经诱导形成幼苗能体现细胞全能性。
（ ）
答案 √
2．利用物理法或化学法，可以直接将两个植物细胞进行诱导融合。
（ ）
答案 ×
3．肝细胞培养过程中通常在培养液中通入5%的CO2刺激细胞呼吸。
（ ）
答案 ×
4．与“多利”羊等克隆哺乳动物相关的技术有胚胎移植、细胞培养和核移植。
（ ）
答案 √
5．杂交瘤细胞进行体内培养，是为了获得能产生单克隆抗体的胚胎。
（ ）
答案 ×
板块二 考点·题型突破
考点1
植物组织培养与植物体细胞杂交
题型一 植物组织培养
1．下图是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，下列叙述不正确的是（ ）
A．该途径依据的原理是植物细胞具有全能性
B．过程①需控制好培养基中植物激素的比例
C．经过程①后细胞的形态和结构发生了变化
D．过程③需使用液体培养基，有利于细胞增殖
答案 A
解析 该过程是为了得到细胞群及细胞产物，没有体现细胞的全能性，A错误；过程①为脱分化，在培养基中应加入适量的生长素和细胞分裂素，B正确；愈伤组织是无定形的薄壁细胞，所以经过程①细胞的形态和结构发生了明显变化，C正确；过程③是细胞大量增殖的过程，需要液体培养基，D正确。
2．[2017·广州模拟]如图表示胡萝卜的韧皮部细胞通过无菌操作接入试管后，在一定的条件下，形成试管苗的培育过程。
请据图回答下列问题：
（1）要促进细胞分裂生长，培养基中应有营养物质和激素。
营养物质包括________________和小分子有机物，激素包括细胞分裂素和____________________两类植物激素。
（2）此过程依据的原理是_______________________________。
A和B阶段主要进行的分裂方式是________________，B阶段除了细胞分裂外，还进行细胞________等。
（3）此过程要无菌操作，主要是指对________进行灭菌消毒。
B阶段需要光照，原因是____________________________________。
（4）试管苗的根细胞没有叶绿素，而叶肉细胞具有叶绿素，这是基因__________________的结果。
答案
（1）无机物 生长素
（2）植物细胞的全能性 有丝分裂 分化
（3）培养基 芽发育成叶，叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照条件
（4）选择性表达
解析
（1）要促进细胞分裂生长，培养基中应有营养物质和激素。
营养物质包括无机物和小分子有机物，激素包括细胞分裂素和生长素两类植物激素。
（2）植物组织培养过程依据的原理是植物细胞的全能性。
A是脱分化过程，B是再分化过程，两者均进行有丝分裂，B阶段除了细胞分裂外，还进行细胞分化等。
（3）植物组织培养过程需要无菌操作，主要是指对培养基进行灭菌消毒。
再分化阶段需要光照，原因是在此过程中芽发育成叶，叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照条件。
（4）试管苗的根细胞没有叶绿素，而叶肉细胞具有叶绿素，这是基因选择性表达的结果。
技法提升
脱分化和再分化的比较
题型二 植物体细胞杂交
3．“白菜—甘蓝”是用细胞工程的方法培育出来的蔬菜新品种，它具有生长期短、耐热性强和易于储藏等优点。
如图是“白菜—甘蓝”的杂交过程示意图。
以下说法正确的是（ ）
A．除去细胞壁形成原生质体，可运用的酶是纤维素酶、淀粉酶和果胶酶
B．通常可诱导上述原生质体相互融合的方法是PEG诱导和灭活的病毒诱导
C．杂种细胞形成的标志是诱导产生了新的细胞壁
D．愈伤组织形成“白菜—甘蓝”植物体必须经过脱分化和再分化两个过程
答案 C
解析 除去细胞壁的酶有纤维素酶和果胶酶，A错误；诱导植物原生质体融合不能用灭活的病毒，B错误；杂种细胞形成的标志是诱导产生了新的细胞壁，C正确；愈伤组织形成“白菜—甘蓝”植物体属于再分化过程，D错误。
4.如图为细胞融合示意图（只考虑细胞两两融合），若A、B分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花粉，两对基因独立遗传，由于一对隐性纯合基因（rr或hh）的作用，在光照强度大于800lx时，都不能生长。
下列叙述正确的是（ ）
①诱导细胞融合的方法是用灭活病毒处理，原理是细胞膜的流动性 ②实验开始时必须用纤维素酶（或果胶酶）除去不利于原生质体融合的结构 ③在大于800lx光照下培养，可淘汰5种融合细胞，筛选出基因型为HhRr的杂种细胞 ④利用植物组织培养技术可将融合细胞培养成杂种烟草植株，原理是细胞具有全能性
A．①②③④B．①②③
C．②④D．②③④
答案 D
解析 诱导植物原生质体融合的方法没有灭活的病毒，灭活的病毒只能诱导动物细胞的融合，①错误；实验开始时必须用纤维素酶（或果胶酶）除去不利于原生质体融合的结构——细胞壁，②正确；根据基因的自由组合定律可以看出，A的花粉即配子的基因型为Hr、hr，B的花粉基因型为hR、hr，诱导融合产生的杂种细胞（只考虑两个原生质体的融合）共有6种基因型，即HHrr、hhrr、hhRR、HhRr、Hhrr、hhRr，在大于800lx光照下培养，其中HHrr、hhrr、hhRR、Hhrr、hhRr的个体不能生长，只有同时具备了H和R基因才能够生长，可淘汰5种融合细胞，筛选出基因型为HhRr的杂种细胞，③正确；利用植物组织培养技术可将融合细胞培养成杂种烟草植株，原理是细胞具有全能性，④正确。
技法提升
植物体细胞杂交后的遗传物质分析
（1）遗传特性：
杂种植株中含有两种植物的遗传物质，故杂种植株具备两种植物的遗传特性。
（2）染色体组数
①染色体组数＝两种植物体细胞内染色体组数之和。
②植物体细胞杂交形成的杂种植株，有几个染色体组就称为几倍体。
③若一植物细胞含有2x条染色体，2个染色体组，基因型为Aabb，另一植物细胞含有2y条染色体，2个染色体组，基因型为ccDd，则新植株应为异源四倍体，其体细胞中染色体为（2x＋2y）条，4个染色体组，基因型为AabbccDd。
考点2
动物细胞培养与动物体细胞核移植
题型一 动物细胞培养
1．关于动物细胞培养的错误叙述是（ ）
A．用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织
B．将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞
C．在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成细胞悬液
D．动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞会衰老死亡
答案 D
解析 选取胚胎或幼龄动物的器官、组织是因为它们分裂能力较强，A正确；动物组织间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，易被胰蛋白酶催化分解，从而使细胞分散，B正确；当贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时就停止分裂增殖，出现接触抑制现象，需定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，制成细胞悬液，C正确；动物细胞培养传至50代左右，部分细胞的遗传物质发生改变，并且带有癌变的特点，能在培养条件下无限制地传代下去，D错误。
2．[2017·银川模拟]回答下列有关动物细胞培养的问题：
（1）在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面______________________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的______________________。
此时，瓶壁上形成的细胞层数是________。
要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，常用的酶是____________。
（2）随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现________________的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成________细胞，这种细胞的黏着性________，细胞膜表面蛋白质（糖蛋白）的量________。
（3）用某种大分子染料对细胞进行染色时，观察到死细胞被染色，而活细胞不染色，原因是________________________。
（4）检查某种有毒物质是否能改变细胞染色体的数目，最好选用分裂到________期的细胞用显微镜进行观察。
（5）在细胞培养过程中，通常在____________________条件下保存细胞。
因为在这种条件下，细胞中________的活性降低，细胞新陈代谢的速率降低。
（6）给患者移植经细胞培养形成的皮肤后，发生了排斥现象，这是因为机体把移植的皮肤当作________进行攻击。
答案
（1）相互接触 接触抑制 单层（或一层） 胰蛋白酶
（2）衰老甚至死亡 不死性 降低 减少
（3）活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，故活细胞不能着色，而死细胞的膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色
（4）中 （5）冷冻（或超低温、液氮） 酶 （6）抗原
解析
（1）在动物细胞培养过程中，细胞会表现出接触抑制现象，此时是单层细胞。
用胰蛋白酶处理可以使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来。
（2）随着细胞传代培养代数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现衰老甚至死亡的现象，但极少数细胞可以连续增殖，有些细胞会因遗传物质改变而变成不死性细胞，这种细胞细胞膜表面糖蛋白减少，细胞黏着性降低。
（3）由于活细胞的膜具有选择透过性，大分子染料不能进入活细胞内，而死细胞的细胞膜丧失了选择透过性，大分子染料能够进入死细胞内而着色。
（4）由于细胞分裂中期染色体形态固定、数目清晰，因此最好选用分裂到中期的细胞用显微镜观察染色体数目。
（5）由于在冷冻、超低温或液氮条件下，细胞中酶的活性降低，细胞新陈代谢的速率降低，通常在此条件下保存细胞。
（6）机体把移植的皮肤当作抗原攻击，会发生排斥现象。
题型二 动物体细胞核移植
3．下列为克隆羊多利的培育过程示意图。
下列各项有关表述错误的是（ ）
A．克隆羊“多利”的主要性状与甲羊一致，因其细胞核基因来自甲羊
B．克隆羊“多利”的培育过程中采用的生物技术有核移植和动物细胞培养
C．乙羊的去核卵母细胞为重组细胞基因表达提供了细胞内的环境条件
D．此过程说明高度分化的动物细胞具有全能性
答案 D
解析 生物的性状主要是由细胞核中的基因控制，A正确；重组细胞发育成早期胚胎的过程需要进行动物细胞培养，B正确；由于卵母细胞的细胞质中含有调控细胞核发育的物质，所以其为重组细胞基因表达提供了细胞内的环境条件，C正确；此实验只能说明高度分化的动物细胞的细胞核具有全能性，而不能证明动物细胞有全能性，D错误。
4．[2018·最新科研]克隆猴“中中”“华华”的问世，中国率先开启了以体细胞克隆猴作为实验动物模型的新时代，实现了我国在非灵长类研究领域由“并跑”到“领跑”的转变，这两只克隆猴的名字象征着“中华”。
目前，两只克隆猴出生时间分别为8周和6周，同普通的猴子一样，能正常地生长。
克隆的成功将为脑疾病、免疫缺陷、肿瘤、代谢等疾病的机理研究、干预、诊治带来前所未有的光明前景。
非人灵长类核移植主要难在三个方面。
以猕猴为例：
一是猴细胞核不易识别，去核难度大；二是猴的卵母细胞容易提前激活。
操作稍一不小心，卵母细胞就可能被激活，然后它就会先开始自主卵裂，体细胞就跟不上了，最后导致这个卵无法发育；三是猴的体细胞克隆胚胎发育差，培养囊胚效率低，优质囊胚比例低。
体细胞克隆的关键节点主要分为四个阶段：
胚胎构建、激活、核基因启动，以及着床后发育。
下图是克隆猴的简易流程图，说法不正确的是（ ）
①克隆猴的过程可以发生基因突变、基因重组等 ②融合激活的手段只能用物理方法激活受体细胞，使其完成细胞分裂和发育进程 ③猴的卵母细胞容易提前激活，往往导致克隆程序无法正常启动 ④体细胞克隆猴的成功将促进针对阿尔茨海默病、自闭症等脑疾病，以及免疫缺陷、肿瘤、代谢性疾病的新药研发进程 ⑤克隆动物性状与供体性状完全相同，且克隆猴遗传背景相同，个体间无差异
A．①③④B．③④⑤C．②③④D．①②⑤
答案 D
解析 克隆猴为无性生殖过程，不会发生基因重组，①错误；融合激活的手段可以用物理或者化学的方法激活受体细胞，使其完成细胞分裂和发育进程，②错误；在克隆过程中，体细胞的细胞核进入卵母细胞时，需先“唤醒”卵母细胞，然后才能启动一系列发育“程序”。
因此，“唤醒”的时机要求非常准确，传统方式猴卵母细胞很容易提前激活，然后它就会先开始自主卵裂，体细胞就跟不上了，最后导致这个卵无法发育，③正确；体细胞克隆猴的成功将推动中国率先发展出基于非人灵长类疾病动物模型的全新医药研发产业链，促进针对阿尔茨海默病、自闭症等脑疾病，以及免疫缺陷、肿瘤、代谢性疾病的新药研发进程（可以帮助我们在药物临床前试验中，检测其有效性），同时也让中国成为世界脑科学人才的汇聚高地，④正确；克隆动物性状与供体性状基本相同，克隆出的猴遗传背景虽然相同，但是只能减少个体间差异，因为生物的遗传除了受基因的控制还受环境的影响，⑤错误。
技法提升
1.核移植中供体动物、提供卵母细胞的动物、代孕动物和克隆动物之间的关系：
克隆动物绝大部分性状与供体动物相同，少数由线粒体DNA控制的性状与提供卵母细胞的动物相同，与代孕动物的性状无遗传关系。
2．动物细胞核全能性的表达
细胞核全能性的表达，必须提供促进细胞核表达全能性的物质和营养条件，还要保证细胞的完整性，这样去核的卵细胞是最合适的受体细胞。
因为卵细胞体积大、易操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。
该技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了动物细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。
考点3
动物细胞融合与单克隆抗体
题型一 动物细胞融合
1．下面对动物细胞融合技术及意义叙述不合理的是（ ）
A．将来有可能通过此方法来生产白细胞介素
B．通过克服远源杂交不亲和现象来获得新物种
C．有助于对细胞这一生命单位的更为科学的认识
D．融合本身与生物膜的流动性直接相关
答案 B
解析 动物细胞融合技术是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，融合后的细胞具有原来两个或多个动物细胞的遗传信息，因此将来有可能通过此方法来生产白细胞介素，A正确；动物细胞融合后由于不能表现全能性，所以不能获得新物种，B错误；动物细胞融合技术有助于对细胞这一生命单位的更为科学的认识，C正确；动物细胞融合技术的原理是细胞膜的流动性，D正确。
2．植物体细胞杂交和动物细胞融合比较，正确的是（ ）
A．诱导融合的方法完全相同
B．所用的技术手段基本相同
C．所采用的原理完全相同
D．都能形成杂种细胞
答案 D
解析 植物体细胞杂交诱导融合的方法有物理法和化学法，动物细胞融合的诱导方法有物理法、化学法和灭活的病毒法，A错误；所用的技术手段不相同，植物体细胞杂交还需要采用植物组织培养技术，而动物细胞融合不需要，B错误；所采用的原理不完全相同，植物体细胞杂交的原理是细胞膜的流动性和细胞的全能性，而动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性，C错误；两者都能形成杂种细胞，D正确。
题型二 单克隆抗体
3．下图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。
下列有关叙述，正确的是（ ）
A．①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞
B．②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
C．③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
D．④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群
答案 D
解析 ①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的浆细胞，A错误；胰蛋白酶常用在动物细胞培养过程中，其作用是使组织分散成单个细胞，图示②中应使用促融剂如聚乙二醇（PEG），B错误；图示③为杂交瘤细胞，其同时具有浆细胞产生抗体的特性和骨髓瘤细胞无限增殖的特性，C错误；图示④是经筛选获得的能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，D正确。
4．下图是科学家利用供体生物DNA中的无限增殖调控基因，制备单克隆抗体的过程。
下列相关叙述错误的是（ ）
A．经限制酶处理后的目的基因与载体的黏性末端相同
B．Ⅰ是经特定抗原免疫过的B淋巴细胞
C．此种制备单克隆抗体的方法涉及转基因技术及动物细胞融合技术
D．经检测和筛选后的Ⅱ，既能无限增殖又可分泌单克隆抗体
答案 C
解析 分析题图，限制酶处理后露出相同的黏性末端，A正确；Ⅰ为经过免疫的B淋巴细胞，B正确；图中的过程包括转基因技术和动物细胞培养技术，不包括动物细胞融合，C错误；由于Ⅱ为导入了无限增殖基因的B淋巴细胞，因此既能够产生特异性抗体，又能无限增殖，D正确。
板块三 方向·真题体验
1．[2017·全国卷Ⅲ节选]现通过基因工程方法获得了甲、乙、丙三种蛋白，要鉴定这三种蛋白是否具有刺激T淋巴细胞增殖的作用，某同学做了如下实验：
将一定量的含T淋巴细胞的培养液平均分成四组，其中三组分别加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一组作为对照，培养并定期检测T淋巴细胞浓度，结果如图2。
图1
图2
（1）由图2可知：
当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，此时若要使T淋巴细胞继续增殖，可采用的方法是________。
细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是_____________
_____________________。
（2）仅根据图1、图2可知，上述甲、乙、丙三种蛋白中，若缺少________（填“A”“B”“C”“D”或“E”）片段所编码的肽段，则会降低其刺激T淋巴细胞增殖的效果。
答案
（1）进行细胞传代培养 维持培养液的pH
（2）C
解析
（1）当细胞浓度达到a时，添加蛋白乙的培养液中T淋巴细胞浓度不再增加，可能是由于发生了接触抑制，可用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞，制成细胞悬液分瓶继续传代培养。
动物细胞培养中，CO2的作用是维持培养液的pH。
（2）对照分析图1
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