酶底物法测定水中大肠菌群_康苏花.docx

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陶底物法测定水中大肠菌群

康苏花

石家庄市环境监测中心 050022

摘要：

本文介绍了科立得TM固定底物酶底物法则定生活饮用水及水凇水中大肠菌群的方法，该方法简便快速，结果精确可靠

关键词：

酶底物法 大肠菌群科立得 定量盘法

酶底物法（Defined汕b,;trateTechnology吟DST）是指在选择性培养基上能产生f3-半孔糖甘酶（f3-D-galacto,;ida,;e）的细菌群组能分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此技术来检测水中大肠菌群的方法[l] 该方法在全球广泛的被使用在检测水中粪大肠杆菌以及总大肠菌群

科立得是唯一商品化的固定底物酶底物法（MMO-MUG培养基）．在美国，95%以上的实验室使用[2]• 中国已有40余家供水公司，30余家疾病预防控制中心，30余家环境监测中心及水文站全面使用科立得试剂[3,4]

本文采用科立得TM酶底物法检测大肠菌群，结果表明该方法特异性强、时间周期短、数据准确，二次污染小、简便快速，适千推广应用

1科立得TM酶底物法介绍

科立得TM符合《生活饮用水标准检验方法》，也是美国EPA和《水与废水标准检验法》唯一认可的MMO-MUG培养基科立得TM和51或97孔定量盘联合使用，可以定量检测lOOmL水样中1-200个或1-2419个目标细菌，当细菌大千该范围时进行稀释

2酶底物法仪器与试剂

2.1仪器

培养箱（36土I°C）,高压蒸汽灭菌器，定量盘（51孔和97孔），程控定量封口机，试管，稀释瓶，移液管，量简

2.2试剂

巾售科立得TM的MMO-MUG培养基，灭菌稀释水

科立得TM的成分是受专利保护的MMO­

MUG选择性培养基（MinimalMediaONPG-

MUG）当科立得TM加入含有大肠菌群的水样，目标细菌在MMO-MUG培养基中繁殖，大肠菌群细菌组产生的特异性生物酶f3-半孔糖背酶能分解MMO-MUG培养基中的色原底物ONPG,使培养基呈现黄色反应当水样中少数非目标细菌的生物酶试图和ONPG反应，干扰检测结果时，MMO­

MUG培养基中特殊配方的基质会抑制其反应进程，控制假阳性的产生

1541河北环境科学 2011.增刊

3酶底物法检测步骤

3.1水样稀释

检测所需水样为lOOmL 若水样污染严重时可进行稀释，取lOmL水样加入到90mL灭菌稀释水中，必要时可加大稀释度 本实验取20个水样分别进行总大肠菌群（1-10）和粪大肠菌群（11-20）检测

3.2定性试验

用lOOmL的尤陌稀释瓶量取lOOmL水样，加入科立得TM培养基，摇晃至溶解36土1°C培养24小

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时

3.3定晕试验

用lOOmL的尤菌稀释瓶量取lOOmL水样，加入科立得TM培养基，摇晃至溶解吟将该溶液倒入

51孔（总大肠菌群）或97孔（粪大肠菌群）定量盘内，将定量盘放入程控定量封口机封口，36土I°C培养24小时

4结果报告

4.1定性反应

将水样培养24h后进行结果判读，如颜色变成黄色，判断为阳性反应，表示水中含有大肠菌

养基溶解后，即可使用 检测每个样品只需简单

5步即可，操作简单，快捷，实际手工操作的时间只需两分钟，尤需在尤伯室内操作，结果准确减少了假阳性反应与假阴性反应，判读容易，满足GB5749-2006生活饮用水卫生标准和GB8978-

1996.污水综合排放标准可应用千源水，瓶装水，饮用水，畜牧用水，废水，再生水，食品水，医疗用水等各种水样，可以很好的用千突发事件应急

表2总大肠菌群定量反应结果（51孔）

水样编号 阳性孔数 MPN/L

。

6 64

群；若水样未发生颜色变化，判断为阴性反应， 2

3

表示水样中不含大肠菌群 定性结果以大肠菌群 4

15 178

。

<10

。

。

<10

检出或未检出报告结果见表l

5 3 31

表l定性反应结果

水样编号 反应结果 水样编号 水源水样

＋ 11 ＋

2 ＋ 12 ＋

3 13 ＋

4 14

5 ＋ 15 ＋

6 16 ＋

7 17

8 ＋ 18 ＋

6 <10

7 <10

8 1 10

9 22 288

10 16 192

表3粪大肠菌群定量反应结果（<）7孔）

水样编号阳性孔数（大孔）阳性孔数（小孔）稀释倍数 MPN/L

11 38 21 100 l.17X105

。

。

12 25 16 100 5.73Xl04

9 ＋ 19 ＋

10 ＋ 20 ＋

13 19

14

14 50 8.32X103

<10

。

。

15 36 20 1000 l.03X106

16 19 2 1000 2.43X105

4.2定晕反应

将培养24h后的定量盘内水样进行结果判汶，如果孔穴内的水样变成黄色则表示该孔穴中含有大肠伯群，记录有黄色反应的孔穴数，总大肠菌群对照51孔定量盘法不同阳性结果的最可能数（MPN）及95%可信范围表，粪大肠菌群对照97孔定量盘法不同阳性结果的MPN值查出其代表的大肠伯群最可能数（MPN）,结果以MPN/L报告 如果所有孔均未产生黄色，以未检出报告结果见表2,3

5结语

本实验采用酶底物法检测水样中大肠菌群，尤需制备培养基，只需将独立包装的科立得TM培

17 <10

18 49 26 1000 4.88X106

19 48 28 10000 3.97X107

20 42 25 l.64X103

参考文献

[1]GB/T5750.12-20伽生志饮用水标准检验方法微生物指标

[2]高瑞坤美国环保署的大肠菌群（C0liforms）检则技木U]福建分析则试，200b,15

（2）:

沁-37

[3]赵春霞，张哲每，厉以强等酶底物去与多管发酵法和纸片去监则环境水样大肠菌群的比较U]环境监则管理与技木，2009,21（

2）:

局－卢

同崔松阳，饶欠平，篮先标固定底物酶底物去检则粪大肠菌群在生，奇亏水中的应用推广U]环境ENVIRONMENT,2009（zl）

2011增刊河北环境科学I155

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