酶底物法测定水中大肠菌群_康苏花.docx

1、L11n 11en x11an b,an陶底物法测定水中大肠菌群康苏花石家庄市环境监测中心050022摘要： 本文介绍了科 立得T M 固定底物酶底物法则定生活饮用水及水凇水中大肠菌群的方法，该方法简便快速，结果精确可靠关键词：酶底物法大肠菌群科立得定量盘法酶 底 物 法 (De fi ne d 汕 b,;t rate Technolog y 吟DST ) 是指在选择性培养基 上能产生 f3 -半孔糖甘酶 ( f3 - D- galacto ,;i da,;e ) 的细菌群组能分解 色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，以此 技术来检测 水中大肠菌群的 方法l该方法在全球广泛的被使用在检测

2、水中粪大肠杆菌以及总大 肠菌群科立得是唯一商品化的固定底物酶底物法（ MMO- MUG 培养基 ） 在美国， 9 5 %以上的实验室使用 2 中国已有40 余家供水公 司， 30 余家疾病预防控制中心， 30 余家环境监测中心 及水文站全面使用科立得试剂 3 ,4本文采用科立得T M 酶底物法 检测大肠菌群 ， 结果表明该方法特异性强、时间周期短、数据准确，二次污染小、简便快速，适千推广应用1 科立得T M 酶底物法介绍科立 得T M 符合 生活 饮用 水标 准检验方法， 也是美国EPA和水与废水标准检验法 唯一认可的 MMO- MUG 培养基 科立得T M 和51 或97孔定量盘联合使用，

3、可以定量检测l OOmL水样中1- 200 个或 1- 2419 个目 标细菌 ， 当细菌大千该范围时进行稀释2 酶底物法仪器 与试剂2 .1 仪 器培养箱 ( 36 土 I C ) , 高压蒸汽灭菌器，定量盘 ( 51 孔和9 7孔 ） ， 程控定量封口机， 试管， 稀释瓶，移液管，量简2 .2 试剂巾 售科 立得T M 的MMO- MUG 培养基 ， 灭菌稀释水科 立 得T M 的 成 分是受专 利 保 护 的 MMOMUG 选 择 性 培 养 基 ( Mi nimal Media ONPG-MUG) 当科立得T M 加入含有 大肠菌群的 水样， 目标细菌在MMO- MUG 培养基中繁殖

4、， 大肠菌群细菌组 产生的 特异性生 物酶 f3 -半孔糖背酶能分解MMO- MUG 培养基中的 色原底物 ONPG , 使培养基呈现黄色反应 当水样中少数非目标细菌的生物酶试图 和O NPG 反应， 干扰检测结果时 ， MMOMUG 培养基中特殊配方的基质会抑制其反应进程，控制假阳性的产生1541 河 北 环 境 科 学2011.增刊3 酶底物法检测步骤3.1 水样稀释检测所需 水样为l OOmL若水样污染严重时可进 行稀释， 取l OmL水样 加入到 90mL 灭菌稀释水中，必要时可加大稀释度本实验取 20 个水样分别进行总大肠菌群 ( 1- 10 ) 和粪大肠菌群（ 11- 20 ) 检

5、 测3.2 定性试验用lOOmL的尤陌 稀释瓶量取lOOmL水样 ， 加入科立得T M 培养基 ， 摇晃至溶解 36 土 1 C培养24 小L11n 11en x11an b,an时3.3 定晕试验用l OOmL的尤菌稀释瓶量取l OOmL水样， 加入科 立得T M 培养基， 摇晃至溶解吟 将该溶液倒入51 孔（ 总大肠菌群）或97孔（ 粪大肠菌群）定量盘内， 将定量盘放入程控 定量封口机封口， 36 土I C培养24 小时4 结果报告4 .1 定性反应将水样培养24h 后进行结果判读， 如颜色变成黄色，判断为阳性反应，表示水中含有大肠菌养基溶解后，即可使用检测每个样品只需简单5步即可， 操作

6、简单， 快捷， 实际手工操作的时间只需两分钟，尤需在尤伯室内操作，结果准确减少了假阳性反应与假阴性反应，判读容易，满足GB 5 749 - 2006 生活饮用水卫生标准和GB 8978-1996.污水综合排放标准 可应用千源水，瓶装水，饮用水，畜牧用水，废水，再生水，食品水，医疗用水等各种水样，可以很好的用千突发事件应急表2 总大肠菌群定量反应结果 ( 51孔 ）水样编号阳性孔数MPN/L。664群；若水样未发生颜色变化，判断为阴性反应，23表示水样中不含大肠菌群定性结果以大肠菌群415178。10。10检出或未检出报告 结果见表l5331表l 定性 反应结果水样编号反应结果水样编号水源水样1

7、121231341451561671781861071081109222881016192表3 粪大肠菌群定量反应结果 ( )7 孔 ）水样编号阳性孔数（大孔）阳性孔数（小孔） 稀释倍数MPN/L113821100l.17X 105。1225161005.73Xl04919102013191414508.32X 10310。1536201000l.03X 1061619210002.43X 1054 .2 定晕反应将培养24h 后的定量盘内水样进行结果判汶，如果孔穴内的水样变成黄色则表示该孔穴中 含有大肠伯群，记录有黄色反应的孔穴数，总大 肠菌群对照51孔定量盘法不同阳性结果的最可能 数 (

8、MP N ) 及9 5 %可信范围表， 粪大肠菌群对照97孔定量盘法不同阳性结果的MP N值查出其代表的大肠伯群最可能数 ( MP N ) , 结果以 MP N/L 报告如果所有孔均未产生黄色，以未检出报告 结果见表2 , 35 结语本实验采用酶底物法检测水样中大肠菌群， 尤需制备培养基， 只需将独立 包装的科立得T M 培171018492610004.88X 106194828100003.97X 107204225l.64X 103参考文献1 GB/T 5750.12-20伽 生志饮 用水标准检验方法 微生物指标2 高瑞 坤美 国环保署的大肠菌群 ( C0 li forms ) 检 则技

9、 木U 福 建 分析则试 ， 200 b, 15(2): 沁 - 373 赵春霞，张 哲 每，厉 以 强等 酶 底物去与 多 管发酵法和纸片去监则 环 境 水样大肠菌群 的比较 U 环 境 监 则 管理与技 木， 2009 , 21 (2) : 局 卢同崔松阳，饶欠平，篮先标固定底物酶底物去检则粪大肠菌群在 生，奇亏水中的应用推 广U 环 境 ENVI R O NM ENT , 2009 (zl)2011增刊 河北环境科学I 155(C)l 994-2019 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.