妇科养荣胶囊的质量标准研究1.docx

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妇科养荣胶囊的质量标准研究1

妇科养荣胶囊的质量标准研究

（1）

【摘要】目的：

按新药审批标准为妇科养荣胶囊制定质量标准。

方法：

以TLC法对妇科养荣胶囊中的当归、陈皮、黄芪三味药进行定性鉴别；以HPLC法测定妇科养荣胶囊白芍中芍药苷的含量。

结果：

试验采用薄层色谱法定性鉴别，色谱斑点清晰，阴性液无干扰；以HPLC法测定该胶囊白芍中芍药苷的含量，方法精密度、稳定性、重复性良好，平均回收率为%，RSD为%。

结论：

本试验所确定的质量分析方法稳定可靠，能作为妇科养荣胶囊的质控标准。

【关键词】妇科养荣胶囊质量标准化方研究

StudyontheQualityStandardofFukeYangrongCapsules

　　【Summary】Object:

formulatethequalitystandardfortheFukeYangrongCapsulesaccordingtotherequirementbyEvaluationofChinese:

thequalitativeidentifyingmethodbyTLCwasestablishedforDanggui、Chenpi、HuangqiandShaoyaoganwasquantitativelydeterminedby　shows:

thespotsontheTLCareclearbythemethodsofqualitativeidentificationbyTLC,theresolutioniswellandhavenonegativesample　methodfordeterminatingthecontentofCapsulesbyHPLCissuitablefortheformulateofthequalitystandardwithsufficientaccuracy、stabilityand　everageofrecoveryrateis%,RSDis%.Conclusion:

thequalitativeandquantitativeanalyticmethodsarestableandreliable.

　　【Keyword】TheFukeYangrongCapsules;QualityStandard;MethodAppraise

　妇科养荣胶囊是根据已有国家标准的妇科养荣丸改变剂型制得，属中药8类品种。

方中当归、川芎、白芍对补血活血、调经止痛、月经不调、经闭痛经有较好的作用。

根据药品标准[中药成方制剂标准1998年，标准号：

WS3-B-2893-98]进行了质量标准的研究，拟定了质量标准。

本对处方中各药味定性、定量方法加以筛选和分析，从而确立稳定可靠的生产质控标准。

1薄层定性鉴别

　　妇科养荣胶囊由当归、白术、熟地黄、川芎、白芍、香附、益母草、黄芪、杜仲、艾叶、麦冬、阿胶、甘草、陈皮、茯苓、砂仁十六味药材经加工制成。

本品所参照的妇科养荣丸中药质量标准WS3-B-2893-98中并无药材的薄层鉴别试验，对于本品的定性鉴别试验，经查阅有关文献与现行药典，拟订了鉴别①当归的薄层鉴别，②陈皮的薄层鉴别，③黄芪的薄层鉴别。

本试验对具有对照品与对照药材的药味重点进行了筛选，最后确立采用TLC法检查当归、陈皮、黄芪，试验条件与方法说明如下。

　　其中在黄芪的鉴别中，我们对鉴别试验进行了研究，结合“张启明等，妇科养荣丸鉴别方法研究”文献中的鉴别方法，为使样品的显示的荧光点更清晰，我们对检视部分进行了优化，经试验省略了原有的显色部分[喷以10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热5分钟后，在紫外光灯下检视]，而是直接在紫外光灯下检视，从而使鉴别方法更简便、准确。

所有仪器：

薄层层析装置、薄层板、聚酰胺薄膜、紫外光灯、烘箱。

试剂：

所用试剂为分析纯，薄层层析用硅胶G为化学纯。

　鉴别当归

　　实验方法：

本试验参照《妇科养荣丸质量标准研究》中方法试验，采用正己烷-乙酸乙酯为展开剂。

取本品内容物10g，研细，加乙醚20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取当归对照药材，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法《中国药典》2005年版一部附录ⅥB试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

经多次试验，待测组分斑点清晰，方法重复性良好，阴性液无干扰。

　鉴别陈皮

　　实验方法：

本试验参照《妇科养荣丸鉴别方法研究》方法试验，采用36%的冰醋酸为展开剂。

取本品内容物10g，研细，加醋酸乙酯-冰醋酸混合液40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加水30ml溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20ml，分取乙醚液，挥干，残渣加1ml醋酸乙酯使之溶解，作为供试品溶液。

另取陈皮对照药材，加醋酸乙酯-冰醋酸混合液10ml，同法制成对照药材溶液。

照薄层色谱法《中国药典》2005年版一部附录ⅥB试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以36%的冰醋酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光下检视。

供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

经多次试验，待测组分斑点清晰，方法重复性良好，阴性液无干扰。

　鉴别黄芪

　　实验方法：

本试验参照《妇科养荣丸鉴别方法研究》方法试验，采用氯仿-甲醇-水为展开剂。

取本品内容物10g，研细，加甲醇40ml，加热回流2小时，滤过，浓缩，浓缩液加于已处理好的中性氧化铝柱上，用40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水20ml使之溶解，用饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使之溶解，作为供试品溶液。

另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法《中国药典》2005年版一部附录ⅥB试验，分别吸取供试品溶液10μl、对照品溶液25μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光下检视。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光主斑点。

经多次试验，待测组分斑点清晰，方法重复性良好，阴性液无干扰。

2检查

　砷盐按砷盐检查法《中国药典》2005年版一部附录ⅨF试验。

　　精密量取每1ml含1μg的标准砷溶液、、，置坩埚中，同供试品砷斑制备方法，依法制备标准砷斑。

取本品10粒，研细，取约1g，精密称定置坩埚中，缓缓灼烧至完全炭化，放冷，加硫酸1ml使湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸，蒸干，至氧化氮蒸汽除尽，放冷，在540℃灼烧使完全炭化，放冷，加水25ml，定量转移至A瓶中，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚硒试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即连接导气管C与A瓶，置37℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得。

试验结论：

检验其砷盐含量低于2ppm。

　炽灼残渣按炽灼残渣检查法《中国药典》2005年版一部附录ⅨJ测定。

　　取本品10粒，研细，取约1g，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温，加硫酸1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，在540℃炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在540℃炽灼至恒重。

试验结论：

检验其炽灼残渣含量低于%。

　重金属按重金属检查法《中国药典》2005年版一部附录ⅨE第二法测定。

　　取炽灼残渣项下残渣，分别加硝酸，蒸干，至氧化氮蒸汽除尽，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显中性，再加醋酸盐缓冲液2ml，微热使溶解，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml；另取配制供试品溶液的试剂共四份，分别置瓷皿中蒸干，各加醋酸盐缓冲液2ml与水15ml，微热使溶解，分别移置纳氏比色管中，分别加每1ml相当于10μg的标准铅溶液、、、，加水稀释成25ml。

在甲乙两组管中，加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上而下透视，比较甲管与乙管的颜色。

结果：

乙管1、2、3的颜色均比甲管2的颜色浅。

试验结论：

检验重金属含量低于10ppm。

　　　其它检查应符合胶囊剂项下有关的各项规定。

3含量测定

　测定指标与测定方法的确立

　　本制剂由当归、白芍、黄芪等十六味中药经提取加工制成，我们以液相色谱法测定主要药物白芍中芍药苷的含量。

当归为本方君药，其有效成分藁本内酯缺乏对照品，测定阿魏酸时川芎又有干扰，难于建立含量测定方法。

因此，选择方中主要药物白芍中的芍药苷作为含量测定方法。

本实验参考《中国药典》2005年版一部“含量测定”项下方法采用HPLC法测定白芍中芍药苷的含量。

在选定的色谱条件下，供试溶液中芍药苷与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。

经方考察，方法的重复性、稳定性、精密度、回收率试验均符合有关规定。

因此，确立本制剂定量指标为芍药苷，定量方法为液相色谱法。

　仪器与所用试剂

　　仪器：

高效液相色谱议；电子天平；试剂：

甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯；芍药苷，中国药品生物制品检定所。

　检测波长的确立

　　精密称取芍药苷对照品适量，加50%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，摇匀，照紫外分光光度法《中国药典》2005年版一部附录ⅤA，在200～500nm处扫描，溶液在236nm波长处有最大吸收，确定检测波长为236nm。

　方法系统适用性试验考察

　流动相的筛选与确立本实验先后采用/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，甲醇-水-冰醋酸为流动相，在系统的条件下，供试溶液中芍药苷与相邻组分分离度良好，阴性液无干扰。

故确立甲醇-水-冰醋酸为流动相系统。

　色谱条件色谱柱：

DiamonsilC18柱；柱温：

室温；流动相：

甲醇-水-冰醋酸；流速：

/min；检测波长：

236nm。

　阴性干扰试验

　阴性液制备取除去白芍以外的其它药材，按样品制备方法制成阴性液。

　　供试品溶液制备方法：

取装量差异项下的本品内容物，研细，过三号筛，取细粉，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用50%甲醇约10ml，分次转移至已处理好中性氧化铝柱上，再用50%甲醇35ml洗脱，收集洗脱液置50ml量瓶中，加50%甲醇定容到刻度，摇匀，精密量取10ml浓缩至干，残渣用50%甲醇1ml溶解，即得。

　对照品溶液制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，即得。

　　测定法精密吸取供试品溶液、阴性液、对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，绘制液相色谱，由色谱图提示在对照品色谱相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性液在此保留时间处无色谱峰。

测定结果提示，其它组分对本品中芍药苷含量测定无干扰，方法专属性良好。

根据测定结果，确定本实验理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

　线性范围考察

　　取芍药苷对照品10mg，置10ml量瓶中，加50%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取、、、、，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。

精密量取上述溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表。

以峰面积对进样浓度进行线性回归，回归方程为Y=－，相关系数R2=。

结果表明，芍药苷浓度在60～140μg/ml范围内，峰面积与芍药苷浓度线性关系良好。

表芍药苷线性关系试验结果

　最低检测限

　　取线性关系试验项下的3号溶液1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，再取1ml置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取20μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，信噪比约为3︰1，最低检测限为4ng。

　定量限

　　取线性关系试验项下的3号溶液1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，再取3ml置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

色谱图中，信噪比约为10︰1，计算定量限约为12ng。

　稳定性试验考察

　　精密吸取供试品溶液20μl，每隔2小时进样测定一次，共测定4次，结果见下表。

平均值为，RSD为%。

表稳定性试验结果结果表明，供试品溶液在8小时内基本稳定。

　精密度试验考察

　重复性试验考察取含量测定项下的供试品溶液，精密量取20μl，连续测定6次，结果见下表。

峰面积平均值为，RSD为%，本法重复性良好。

表重复性试验结果测定结果表明，本试验精密度良好，符合有关规定。

　重现性试验考察取胶囊内容物适量，按供试品制备方法，分别制备6份供试品溶液，分别测定含量，峰面积平均值为，RSD为%，表明本法重现性良好，结果见下表。

表重现性试验结果测定结果表明，本试验精密度试验良好，符合有关规定。

　回收率试验考察

　　取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，作为对照品溶液。

取装量差异项下的本品内容物，研细，过三号筛，取细粉，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用50%甲醇约10ml，分次转移至已处理好的中性氧化铝柱上，再用50%甲醇35ml洗脱，收集洗脱液置50ml量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，精密量取10ml浓缩至干，残渣用50%甲醇1ml溶解，即得，作为供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，测得供试品中芍药苷的含量为558μg/g。

　　取芍药苷对照品10mg，置10ml量瓶中，加50%

甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，从中精密量取1ml，置10ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含100μg的溶液，作为加样用对照品溶液。

　　取上述已经测定含量的供试品药粉，分别精密称定约、、各三份，分别精密加入加样用对照品溶液4ml，精密加入甲醇至25ml，称定重量，加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用50%甲醇约10ml，分次转移至已处理好中性氧化铝柱上，再用50%甲醇35ml洗脱，收集洗脱液置50ml量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，各精密量取10ml浓缩至干，残渣用50%甲醇1ml使溶解，即得，作为加样溶液。

　　精密量取上述各溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定含量，计算加样回收率，测得9次平均回收率为%，RSD为%，结果见下表。

测得量=A供/A对×C对×1÷10×50÷10×25=；样品中芍药苷含量=供试品取样量×558μg/g=，结果见下表。

测定结果，平均回收率为%，RSD为%。

　据上述方法学考察结果，确定含量测定方法为

　　色谱条件：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸为流动相，检测波长为236nm；柱温：

室温，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备：

取芍药苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含100μg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：

取装量差异项下的本品内容物，研细，过三号筛，取细粉，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，加热回流提取1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。

精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用50%甲醇约10ml，分次转移至已处理好中性氧化铝柱上，再用50%甲醇35ml洗脱，收集洗脱液置50ml量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，精密量取10ml浓缩至干，残渣用50%甲醇1ml溶解，即得。

测定法：

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入色谱仪，测定即得。

本品每粒含白芍以芍药苷计，不得少于。

　含量限度确定试验

　　为制定含量限度，制备供试品三批。

按上述测定方法，测定其芍药苷含量，结果见下表。

根据上述测定结果，并根据文献和《中国药典》2005年版一部收载白芍与芍药苷的含量测定项中规定及考虑到本品的收膏率，暂定本品每粒含白芍以芍药苷计，不得少于。

4讨论

　　在黄芪的鉴别中，为使样品的显示的荧光点更清

晰，对检视部分进行了优化，经试验省略了原有的显色部分[喷以10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热5分钟后，在紫外光下检视]，而是直接在紫外光灯下检视，其呈橙黄色荧光，能够准确的鉴别。

　　选择流动相时曾以/L磷酸二氢钾溶液-乙腈，甲醇-水-冰醋酸分别考察，结果的分离效果好，因此选择后者作为流动相。

　　在芍药苷的含量测定中，供试品制备通过氧化铝柱预处理，能有效地除去大量的干扰杂质，提高色谱分离结果和含量测定的精密度。

结果表明，用氧化铝进行前处理，效果较佳。