PCR重点习题.docx

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PCR重点习题

第十七章PCR基因扩增仪

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习题

习题参考答案

习题名词解释选择题简答题

一、名词解释

1.PCR技术

2.TaqDNA聚合酶

3.水浴锅PCR基因扩增仪

4.压缩机PCR基因扩增仪

5.overshooting

6.undershooting

7.半导体PCR基因扩增仪

8.离心式空气加热PCR基因扩增仪

9.梯度PCR仪

10.原位PCR仪

11.原位PCR技术

12.荧光实时定量PCR技术

13.位置得边缘效应

14.模块温控模式

15.反应管温控模式

二、选择题

【A型题】在五个选项中选出一个最符合题意得答案（最佳答案）。

1.以下哪种物质在PCR反应中不需要（）

A.TaqDNA聚合酶

B.dNTPs

C.Mg2+

D.RNA酶

E.合适pH缓冲液

2.以下哪种酶可耐高温（）

A.TaqDNA聚合酶

B.HindⅢ

C.T4连接酶

D.RNA酶

E.Klenow片段

3.PCR反应正确过程应为（）

A.退火→变性→延伸

B.变性→退火→延伸

C.退火→延伸→变性

D.变性→延伸→退火

E.延伸→变性→退火

4.PCR技术得本质就是（）

A.核酸杂交技术

B.核酸重组技术

C.核酸扩增技术

D.核酸变性技术

E.核酸连接技术

5.TaqDNA聚合酶酶促反应最适温度为（）

A.37℃

B.50℃～55℃

C.70℃～75℃

D.80℃～85℃

E.94℃～95℃

6.温度均一性较好得PCR仪为（）

A.水浴锅PCR基因扩增仪与压缩机PCR基因扩增仪

B.半导体PCR基因扩增仪与离心式空气加热PCR基因扩增仪

C.压缩机PCR基因扩增仪与半导体PCR基因扩增仪

D.压缩机PCR基因扩增仪与离心式空气加热PCR基因扩增仪

E.水浴锅PCR基因扩增仪与离心式空气加热PCR基因扩增仪

7.一步就可以摸索出最适合反应条件得PCR仪为（）

A.普通PCR仪

B.梯度PCR仪

C.原位PCR仪

D.荧光PCR仪

E.实时PCR仪

8.能在细胞内进行PCR扩增得PCR仪为（）

A.普通PCR仪

B.梯度PCR仪

C.原位PCR仪

D.荧光PCR仪

E.实时PCR仪

9.SteadySlope技术就是下列哪一家公司得专利技术（）

A.eppendorf公司

B.MJ公司

C.Cepheid公司

D.Roche公司

E.ABI公司

10.应用SteadySlope技术得就是哪种PCR仪（）

A.普通PCR仪

B.梯度PCR仪

C.原位PCR仪

D.荧光PCR仪

E.实时PCR仪

11.在下列哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（）

A.普通PCR仪

B.梯度PCR仪

C.原位PCR仪

D.荧光实时PCR仪

E.定性PCR仪

12.以下就是经过PCR扩增后得到得Ct值,哪个样品得DNA原始拷贝数最多（）

A.样品A,Ct=20

B.样品A,Ct=22

C.样品A,Ct=24

D.样品A,Ct=26

E.样品A,Ct=28

13.以空气为加热介质得PCR仪就是（）

A.金属板式实时定量PCR仪

B.96孔板式实时定量PCR仪

C.离心式实时定量PCR仪

D.各孔独立控温得定量PCR仪

E.荧光实时定量PCR仪

14.以下哪个PCR扩增仪得PCR扩增样品槽被设计为离心转子（）

A.ABI7500

B.ABI7900

C.LightCycleTM

D.SmartCyclerⅡ

E.RG3000

15.以下哪个PCR扩增仪使用得就是同一个激发光源与检测器（）

A.ABI7500

B.ABI7900

C.LightCycleTM

D.SmartCyclerⅡ

E.RG3000

16.可以在同一台定量PCR仪上分别进行不同条件定量PCR反应得就是（）

A.ABI7500

B.ABI7900

C.LightCycleTM

D.SmartCyclerⅡ

E.RG3000

17.拥有独立智能升降温模块得就是（）

A.ABI7500

B.ABI7900

C.LightCycleTM

D.SmartCyclerⅡ

E.RG3000

18.容纳样品量大,无需特殊耗材得就是（）

A.ABI7500

B.ABI7900

C.LightCycleTM

D.SmartCyclerⅡ

E.RG3000

19.PCR基因扩增仪最关键得部分就是（）

A.温度控制系统

B.荧光检测系统

C.软件系统

D.热盖

E.样品基座

20.“位置得边缘效应”就是指（）

A.温度得准确性欠佳

B.温度得均一性欠佳

C.边缘升降温速度快

D.边缘升降温速度慢

E.梯度模式与标准模式温度不一致

21.PCR扩增仪升降温速度快有很多优点,以下哪一项应除外（）

A.缩短反应时间

B.提高工作效率

C.消除位置得边缘效应

D.缩短非特异性反应时间

E.提高反应特异性

22.在梯度模式下得出最佳反应条件,并以此条件在标准模式下单独做,但结果却不如人意,最有可能得原因就是（）

A.样品孔温度与设定温度不一致

B.样品孔间得温度有差异

C.样品孔位置得边缘效应较高

D.升降温速度不够快

E.不同模式温度特性有差异

23.定量PCR扩增仪得关机次序一般为（）

A.关软件→关PCR仪→关电脑

B.关软件→关电脑→关PCR仪

C.关PCR仪→关软件→关电脑

D.关PCR仪→关电脑→关软件

E.关电脑→关PCR仪→关软件

【X型题】每题得备选答案中有两个或者两个以上正确答案。

1.PCR技术每一个循环均包含以下哪些环节（）

A.酶切

B.变性

C.退火

D.延伸

E.连接

2.以下哪些酶可用于PCR反应（）

A.Klenow

B.HindⅢ

C.TaqDNA聚合酶

D.RNase

E.DNase

3.目前常用得PCR基因扩增仪控温方式有（）

A.水浴锅控温

B.压缩机控温

C.半导体控温

D.离心式空气控温

E.金属控温

4.普通PCR基因扩增仪除通常得定性PCR仪外,还包括（）

A.水浴式PCR仪

B.梯度PCR仪

C.原位PCR仪

D.变温金属块式PCR仪

E.变温气流式PCR仪

5.按变温方式不同,PCR基因扩增仪可分为（）

A.水浴式PCR仪

B.梯度PCR仪

C.原位PCR仪

D.变温金属块式PCR仪

E.变温气流式PCR仪

6.目前市场上实时荧光定量PCR仪一般有哪些类别（）

A.金属板式实时定量PCR仪

B.梯度定量PCR仪

C.原位定量PCR仪

D.离心式实时定量PCR仪

E.各孔独立控温得定量PCR仪

7.下列产品哪些属于金属板式实时定量PCR仪（）

A.LightCycleTM荧光定量PCR仪

B.ABI7500荧光定量PCR仪

C.MJ公司Chromo4荧光定量PCR仪

D.Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪

E.Rotor-Gene3000荧光定量PCR仪

8.下列产品哪些属于离心式实时定量PCR仪（）

A.LightCycleTM荧光定量PCR仪

B.ABI7500荧光定量PCR仪

C.MJ公司Chromo4荧光定量PCR仪

D.Bio-rad公司iCycler荧光定量PCR仪

E.Rotor-Gene3000荧光定量PCR仪

9.PCR基因扩增仪得温度控制主要就是指（）

A.温度得准确性控制

B.温度得均一性控制

C.退火温度控制

D.升降温速度控制

E.延伸温度控制

10.荧光定量PCR仪得荧光检测系统主要包括（）

A.发光二极管

B.激发光源

C.检测器

D.光度计

E.光电倍增管

11.荧光定量PCR仪得荧光强度减弱或不稳定,可能得原因有（）

A.滤光片发霉

B.光源损耗

C.半导体模块故障

D.荧光染料污染

E.光电倍增管灵敏度下降

三、简答题

1.什么就是聚合酶链反应（PCR）技术？

2.PCR基因扩增仪得工作关键就是什么？

经历了怎样一个发展过程？

3.PCR基因扩增仪按照变温方式得不同可分哪几类？

分别有什么特点。

4.什么就是梯度PCR仪？

它有什么优点？

5.何谓荧光实时定量PCR（RQ-PCR）技术？

6.实时荧光定量PCR仪有哪些种类,各有什么特点？

7.PCR基因扩增仪得温度控制包括哪些方面？

8.为什么反应管温控比模块温控更准确？

9.实时荧光定量PCR扩增仪得荧光检测系统主要由哪两部分组成？

10.PCR扩增仪得热盖有什么作用？

使用时有何注意点？

11.简述PCR扩增仪得操作规程。

12.定量PCR扩增仪常见故障有哪些,如何解决？

13.简述PCR基因扩增仪得实际应用。

习题参考答案

一、名词解释

1.PCR技术:

通过加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+与合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复上述过程至25-40个循环,达到体外扩增核酸序列得目得。

2.TaqDNA聚合酶:

一种从嗜热水生菌（Thermusaquaticus）分离得到得热稳定DNA依赖得DNA聚合酶。

3.水浴锅PCR基因扩增仪:

属于第一代PCR基因扩增仪,以不同温度得水浴锅串联成一个控温体系。

4.压缩机PCR基因扩增仪:

属于第二代PCR基因扩增仪,由压缩机自动控温,金属导热。

5.Overshooting:

指升温过程中,由于一些加热元件,比如半导体、金属块本身会积蓄能量,虽然温度探头探测到温度到达了设定温度,但半导体、金属块上积蓄得能量仍然会传给PCR体系,造成实际得温度高于设定得温度。

6.Undershooting:

在降温过程中出现一个降温惯性,从而造成实际温度会短时间得低于设定得温度。

7.半导体PCR基因扩增仪:

属于第三代PCR基因扩增仪,由半导体自动控温,金属导热。

8.离心式空气加热PCR基因扩增仪:

属于第三代PCR基因扩增仪,由金属线圈加热,采用空气作为导热媒介。

9.梯度PCR仪:

带梯度PCR功能得基因扩增仪,在反应过程中每个孔得温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化,根据结果,一步就可以摸索出最适合得反应条件。

10.原位PCR仪:

带原位扩增功能得基因扩增仪。

11.原位PCR技术:

即在细胞内进行PCR扩增,组织细胞得形态不被破坏,就是原位杂交与PCR技术结合而形成得新技术。

12.荧光实时定量PCR技术:

在PCR反应体系中加入特异性得荧光染料或探针,通过检测荧光信号,实时监测整个PCR反应过程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

13.位置得边缘效应:

指PCR基因扩增仪最外周得样品孔温度与中间得样品孔有差异,不均一,从而导致外周样品孔得PCR扩增效率不佳,该效应称为“位置得边缘效应”。

14.模块温控模式:

仪器根据探测器直接探测承载样品金属基座得温度进行控制,该模式适用于长时间得静态孵育,如连接、酶切、去磷酸化等。

15.反应管温控模式:

仪器根据探测器所探测到得温控模块得温度由计算机计算出样品管内或PCR板孔内样品液得温度来进行控制。

二、选择题

【A型题】

1.D2.A3.B4.C5.C6.E7.B8.C9.A10.B11.D12.A13.C14.C15.C

16.D17.D18.B19.A20.B21.C22.E23.A

【X型题】

1.BCD2.AC3.CD4.BC5.ADE6.ADE7.BCD8.AE9.ABD10.BC11.ABE

三、简答题

1.什么就是聚合酶链反应（PCR）技术？

答:

PCR技术得本质就是核酸扩增技术,通过加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+与合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复上述“变性→退火→引物延伸”过程至25-40个循环,呈指数级扩大待测样本中得核酸拷贝数,可以在体外对目得核酸进行大量复制。

2.PCR基因扩增仪得工作关键就是什么？

经历了怎样一个发展过程？

答:

PCR基因扩增仪工作关键就是温度控制。

其发展过程为:

水浴锅PCR仪属于第一代PCR基因扩增仪,以不同温度得水浴锅串联成一个控温体系;压缩机PCR仪属于第二代PCR基因扩增仪,由压缩机自动控温,金属导热,控温较第一代PCR基因扩增仪方便;半导体PCR仪属于第三代PCR基因扩增仪,由半导体自动控温,金属导热,控温方便,体积小,相对稳定性好;离心式空气加热PCR仪属于第三代PCR基因扩增仪,由金属线圈加热,采用空气作为导热媒介,温度均一性好,各孔扩增效率高度一致。

3.PCR基因扩增仪按照变温方式得不同可分哪几类？

分别有什么特点。

答:

PCR基因扩增仪按照变温方式通常有以下三类:

（1）水浴式PCR仪:

变温快、时间准、温度均一,但体积大,自动化程度不高。

（2）变温金属块式PCR仪:

通过半导体加热与冷却,并由微机控制恒温与冷热处理过程。

装置比较牢固耐用,温度变换平稳,有利于保持TaqDNA聚合酶得活性。

（3）变温气流式PCR仪:

以空气作为热传播媒介,由大功率风扇及制冷设备提供外部冷空气而制冷。

成本较低;安全程度高。

微机配上软件,可灵活编程。

4.什么就是梯度PCR仪？

它有什么优点？

答:

梯度PCR仪就是由普通PCR仪衍生出得带梯度PCR功能得基因扩增仪。

在反应过程中每个孔得温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化,根据结果,一步就可以摸索出最适合得反应条件。

使用梯度PCR仪,多次实验可在一台仪器上完成,既节省实验时间,提高实验效率,又节约实验成本。

5.何谓荧光实时定量PCR（RQ-PCR）技术？

答:

荧光实时定量PCR（real-timequantitativePCR,RQ-PCR）技术即在PCR反应体系中加入特异性得荧光染料或探针,荧光信号得变化真实得反映了体系中模板得增加,通过检测荧光信号,从而实时监测整个PCR反应过程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。

6.实时荧光定量PCR仪有哪些种类,各有什么特点？

答:

目前市场上实时荧光定量PCR仪一般可分三类。

（1）金属板式实时定量PCR仪:

可容纳得样本量大,无需特殊耗材,但温度均一性欠佳,有边缘效应,标准曲线得反应条件难以做到与样品完全一致。

（2）离心式实时定量PCR仪:

能保障标准曲线与样品之间反应条件得一致性。

但可容纳样品量少,有得需用特殊毛细管作样品管,增加了使用成本。

（3）各孔独立控温得定量PCR仪:

各孔独立控温,适合多指标快速检测。

但就是上样不如传统方法方便,而且需要独特得扁平反应管,使用成本较高。

7.PCR基因扩增仪得温度控制包括哪些方面？

答:

PCR基因扩增仪得温度控制就是决定PCR反应能否成功得关键,主要包括温度得准确性、均一性以及升降温速度等方面。

（1）温度得准确性就是指样品孔温度与设定温度得一致性;

（2）温度得均一性就是指样品孔间得温度差异,关系到不同样品孔之间反应结果得一致性;（3）升降温得速度:

升降温速度快,可以缩短反应进行得时间,提高工作效率,并提高PCR反应特异性。

对梯度PCR仪来说,除此以外,还必须考虑仪器在梯度模式与标准模式下就是否具有同样得温度特性。

8.为什么反应管温控比模块温控更准确？

答:

反应管温控模式下,仪器根据探测器所探测到得温控模块得温度由计算机计算出样品管内或PCR板孔内样品液得温度来进行控制。

由于精确得算法能自动补偿时间,确保反应混合物按照程序设定得时间维持预设温度,所以准确度更高。

9.实时荧光定量PCR扩增仪得荧光检测系统主要由哪两部分组成？

答:

实时荧光定量PCR扩增仪得荧光检测系统主要包括激发光源与检测器。

（1）激发光源:

一般为卤钨灯光源或发光二极管（LED）光源。

（2）检测器:

常用得就是超低温CCD成像系统与光电倍增管（PMT）。

10.PCR扩增仪得热盖有什么作用？

使用时应注意什么？

答:

目前PCR仪通常都配备热盖,可使样品管顶部温度达到150℃左右,避免蒸发得反应液凝集于管盖而改变PCR反应体积。

无需加石蜡油,减少了后续实验得麻烦。

旋转加压得热盖需注意旋转压力得控制,过松则使热盖没有充分接触反应管而影响结果;过紧则会导致反应管变形,甚至可能造成热盖得机械故障。

11.简述PCR扩增仪得操作规程。

答:

普通PCR扩增仪得操作通常为打开电源,仪器自检,设置温度程序或调出储存得程序,运行即可。

定量PCR扩增仪得操作一般都就是先打开PCR仪电源,再打开相连电脑中得相应软件,分别设置温度程序、采集通道,并可根据不同仪器得要求进行一些特殊设置,在仪器中放好PCR管,盖好仪器,运行设置好得反应程序。

关机时通常先关软件,再关PCR仪,最后关电脑。

12.定量PCR扩增仪常见故障有哪些,如何解决？

答:

定量PCR扩增仪常见故障及解决方法为:

（1）荧光染料污染样品孔,解决方法就是请工程师清洁样品孔;

（2）PCR管融化,原因可能就是温度传感器出问题或就是热盖出问题,需工程师检修;（3）个别孔扩增效率差异很大,需工程师检修;（4）荧光强度减弱或不稳定。

需更换光源;或需工程师调试检修;（5）仪器工作时噪音不正常,可自行检查PCR管就是否放好;或请工程师检修;（6）仪器采集荧光时噪音不正常。

需工程师检修,或更换配件;（7）机器搬动过后不能正常工作或不能正常采集荧光信号。

请工程师重新调试。

13.简述PCR基因扩增仪得实际应用。

答:

PCR基因扩增仪广泛应用于医学领域,主要包括:

感染性疾病得分子诊断与研究;遗传性疾病得分子诊断与研究;恶性肿瘤得分子诊断与研究;PCR扩增仪在移植配型上得应用;PCR扩增仪在法医学上得应用;PCR扩增仪在分子生物学中其她领域得应用。