届 苏教版 无菌操作技术 单元测试Word下载.docx

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A．在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌

B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上

C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的

D．第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数

解析　在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；

进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；

注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；

第1区和第5区的划线不能相连。

4．下面关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述中，正确的是（　　）

A．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素

B．筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质

C．统计样品中的活菌数目一般用平板划线法

D．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌

答案　A

解析　只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A正确；

筛选分解尿素的细菌的实验中，采用的是以尿素为唯一氮源的培养基，B错误；

统计样品中的活菌数目一般用涂布平板法，C错误；

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂变红，这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素，D错误。

5．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。

A．培养基分装到培养皿后进行灭菌

B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线

C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养

D．培养过程中每隔一周观察一次

解析　培养基灭菌后再分装到培养皿中；

转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线的末端开始进行划线；

接种后的培养皿必须放在恒温箱中进行培养；

培养过程中一般每隔12h或24h观察一次。

6．下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是（　　）

成分

蛋白胨

葡萄糖

K2HPO4

伊红

美蓝

蒸馏水

含量

10g

2g

0.4g

0.065g

1000mL

A.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基

B．该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨

C．该培养基缺少提供生长因子的物质

D．该培养基调节合适的pH后就可以接种使用

解析　分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A项错误；

该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，B项正确；

该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，C项错误；

培养基调节完pH还要进行灭菌等操作后才能使用，D项错误。

7．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。

现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。

请分析下列操作中错误的是（　　）

①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢

②接种操作要在酒精灯火焰附近进行

③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒

④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌

⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌

⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

A．①③B．②④

C．③⑤D．④⑥

答案　D

解析　无菌操作包括消毒和灭菌。

需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂（指示剂或染色剂）等。

煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；

为防止空气中杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；

家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌；

培养基常进行高压蒸汽灭菌。

故④⑥操作错误。

8．下图中甲是涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。

下列叙述中错误的是（　　）

A．甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液

B．对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不一定是由单一的细胞或孢子繁殖而成

C．乙培养皿中所得的菌落都符合要求

D．乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端

解析　灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，A正确；

稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B正确；

平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C错误；

连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体的密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成，D正确。

9．选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。

利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。

为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为（　　）

A．伊红美蓝培养基、含青霉素的培养基

B．含青霉素的培养基、含氨的无机培养基

C．含氨的无机培养基、含青霉素的培养基

D．含青霉素的培养基、伊红美蓝培养基

解析　酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长。

硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量，把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。

10．漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。

下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（多选）（　　）

A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品

B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落

C．在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化

D．斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株

答案　BC

解析　漆酶降解“木质”，则漆酶菌株多存在于“木质”丰富的场所，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有产漆酶的菌株，A错误；

产漆酶菌株可降解木质素，在筛选培养基中加入木质素可筛选产漆酶的菌株，筛选时可通过菌落特征挑出产漆酶的菌落，B正确；

在涂布平板上长出的菌落可能还有其他杂菌，可再通过平板划线法进一步纯化，C正确；

斜面培养基中含有大量营养物，可在低温下长期保存菌株，D错误。

11．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（　　）

A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

解析　A项，高压灭菌过程中加热结束后，让其自然冷却，待压力表的压力降到零时，再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物；

B项，倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖；

C项，灼烧接种环之后，要在火焰旁冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种；

D项，在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。

12．高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性。

研究者从热泉中筛选出了能高效生产高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如下图所示。

请据图回答：

（1）Ⅰ号培养基从物理状态来看，属于固体培养基，配制时要加入________作为凝固剂，从用途来看属于选择培养基，应以________作为唯一碳源。

（2）配制固体培养基的基本步骤是（　　）

A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌

B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌

C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板

D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板

（3）溶化时，烧杯中加入琼脂后要不停地____________，防止琼脂糊底引起烧杯破裂。

对培养基灭菌的方法一般为____________________。

（4）①过程是__________，②过程所使用的接种方法是________________法。

（5）部分嗜热菌在Ⅰ号培养基上生长时可释放________分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈，挑选相应的菌落，接种到Ⅱ号培养基进一步分离纯化后，再对菌种进行________培养。

答案　

（1）琼脂　淀粉　

（2）C　（3）搅拌　高压蒸汽灭菌

（4）稀释　涂布平板　（5）淀粉酶　扩大

解析　固体培养基通常加入琼脂作为凝固剂。

本实验的目的是获得产生高温淀粉酶的嗜热菌，故其选择培养基中应以淀粉作为唯一碳源。

配制固体培养基的基本步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

配制培养基加热溶化时，要注意加入琼脂后要不断搅拌，防止琼脂糊底和溢出。

对培养基的灭菌一般采用高压蒸汽灭菌。

仔细观察题图可知过程，①是菌液稀释过程，②是采用涂布平板法接种。

能产生淀粉酶的部分细菌能分解利用淀粉，其菌落周围会出现透明圈，取这样的菌落再分离纯化可获得相应菌种，以后可以扩大培养用于生产。

13．牛奶是微生物培养的良好培养基，牛奶在饮前都要经过巴氏消毒，以杀死有害微生物，为检测消毒前后牛奶中细菌含量变化情况，做如图所示操作。

用无菌吸管从锥形瓶中吸取1mL生牛奶稀释液至盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，如此再重复2次。

请回答下列有关问题：

（1）巴氏消毒的方法是________________，使用这种方法对生鲜牛奶进行消毒的好处是________________。

（2）取最终的牛奶稀释液0.1mL滴在培养基上进行涂布，应选择的涂布工具是图中的________。

（3）图中所示方法为涂布平板法，理想情况下，培养一段时间后可在培养基表面形成菌落。

若用该方法培养设置了3个培养皿，菌落数分别为35个、33个、34个，则可以推测生牛奶中每毫升含细菌数为________个，运用这种方法统计的结果往往较实际值________（填“偏大”或“偏小”），原因是____________________________________________________。

（4）消毒后的牛奶中绝大部分细菌被杀死，若继续用该方法检测消毒后的牛奶中细菌的数量，则在操作步骤上应做什么改动？

________________。

（5）从生牛奶取样培养得到的菌落中混有各种杂菌，从中检测出大肠杆菌的方法是在培养基中加入________________，菌落具有________________特征的可以认定为大肠杆菌。

答案　

（1）在70～75℃煮30min（在80℃煮15min）　牛奶的营养成分不被破坏　

（2）B　（3）3.4×

106　偏小　个别菌落可能是由2个或多个细菌形成的　（4）稀释次数减少　（5）伊红美蓝　（金属光泽的紫）黑色

14．下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：

（1）图甲是利用________法进行微生物接种，图乙是利用__________________法进行微生物接种。

这两种方法所用的接种工具分别是____________和______________；

对这两种接种工具进行灭菌和消毒的方法依次是________________和酒精消毒。

（2）接种操作为什么一定要在火焰附近进行？

________________________________________________________________________。

（3）接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？

（4）如图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是________（填“图甲”或“图乙”）。

答案　

（1）平板划线　涂布平板　接种环　玻璃涂布器　灼烧灭菌

（2）火焰附近存在着无菌区域

（3）防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基

（4）图乙

解析　图甲和图乙分别是平板划线法和涂布平板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和玻璃涂布器。

由于酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接种常在火焰附近进行。

在微生物培养过程中为防止培养基中水分蒸发形成水珠落入培养基中影响菌体生长，故需要倒置培养。

15．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。

某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。

请据图回答下列问题：

（1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________（填“影响”或“不影响”）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用____________________法。

（2）④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于________________________________________________________________________

________________________________________________________________________；

使用______________________________法可以在⑥上获得单菌落。

采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是_______________________________________________

（3）实验过程中如何防止其他微生物的污染？

________________________________________________________________________

答案　

（1）苯酚　影响　涂布平板

（2）④的培养基中没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基中加入了苯酚作为碳源　涂布平板法或平板划线　防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基

（3）培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作

解析　根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，再进行接种培养即可获得纯目的菌。

为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。

在设计实验时要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌操作。

16．下表是某同学列出的分离土壤中微生物的培养基配方，据此回答下列问题：

培养基配方

KH2PO4

1.4g

Na2HPO4

2.1g

MgSO4·

7H2O

0.2g

10.0g

尿素

1.0g

琼脂

15.0g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

（1）从作用上看，该培养基属于________培养基，提供氮源的物质是________，细菌能利用该氮源是由于体内能合成________酶。

（2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入________指示剂，若指示剂变________，说明有目的菌株存在。

（3）为了测定微生物的数量，接种时应采用__________________________法，某同学在4个培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则每毫升原土壤样液中上述微生物的数量为____________个，测定的活菌数比实际活菌数________（填“低”“高”或“基本一致”）。

答案　

（1）选择　尿素　脲（催化尿素分解的）

（2）酚红　红

（3）涂布平板　1.6×

109　低

解析　

（1）题干指出表中是分离土壤中微生物的培养基配方，其中尿素是唯一氮源，能生长的菌落说明能利用尿素中的氮源，以尿素为唯一氮源的培养基可以选择尿素分解菌，所以从用途上属于选择培养基。

（2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，说明有目的菌株存在。

（3）纯化微生物可以用涂布平板法和平板划线法，其中涂布平板法能用于微生物的计数。

1mL原土壤样液中上述微生物数量＝（180＋155＋176＋129）÷

4×

106×

10＝1.6×

109个；

涂布平板法计数，统计的数量比实际数量会偏少，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

17．（2016·

天水一中期末）某实验小组欲从豆油污染的土壤中筛选出高效降解脂肪的菌株。

请回答：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以______________为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于________培养基。

（2）为避免培养基污染，需将培养皿呈________状态放置。

为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行________处理。

为了排除________________________，需设置接种等量无菌水的培养基作为空白对照。

（3）为了筛选出菌株，可将适量的________试剂滴加在平板中的菌落周围，洗去浮色后，如果菌落周围的现象是________，则说明此种菌能够分泌脂肪酶。

（4）纯化菌种时，为了得到菌落，可采用________法接种于新的培养基平板上。

（5）实验操作应在酒精灯火焰附近进行的原因是_______________________________________

答案　

（1）豆油　选择

（2）倒置　梯度稀释　实验组中非测试因素对实验结果的影响（培养基被污染）

（3）苏丹Ⅲ　出现透明圈（不出现橘黄色圈）

（4）平板划线　（5）避免周围环境中微生物的污染

18．（2016·

全国乙，39）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。

某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。

实验步骤如下：

①配制培养基（成分：

牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）；

②制作无菌平板；

③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；

④将各组平板置于37℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。

回答下列问题：

（1）该培养基中微生物所需的氮来源于______________________________。

若要完成步骤②，该培养基中的成分X通常是________________。

（2）步骤③中，实验组的操作是________________________________________________

（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了________现象。

若将30（即36－6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法________（填“正确”或“不正确”）。

答案　

（1）牛肉膏、蛋白胨　琼脂　

（2）将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间

（3）污染　不正确

解析　

（1）牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质的水解产物，都可以作为氮源；

平板为固体培养基，故需要加入凝固剂琼脂。

（2）实验探究的是教室内“不同高度空气”中微生物的分布，其中变量为不同高度，故需在不同高度下放置开盖平板。

同时，为了保证单一变量，需要保证开盖放置时间一致。

为了保证实验可靠性，需要设置多个平行组。

（3）在完全正确的操作情况下，空白对照组中不应出现菌落。

若出现菌落，表明操作过程中存在杂菌污染，属于实验失误，所有实验数据均不应采用。

19．（2016·

四川，10）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。

（1）图中选择培养基应以________________为唯一氮源；

鉴别培养基还需添加________________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________________色。

（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

该过程采取的接种方法是________________，每克土壤样品中的细菌数量为________×

108个；

与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较________。

（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAG、UGA和UAA）。

突变基因转录的mRNA中，终止密码为__________，突变基因表达的蛋白质含__________个氨基酸。

答案　

（1）尿素　酚红　红　

（2）涂布平板法　1.75　少　（3）UGA　115

解析　

（1）脲酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯一氮源。

由于尿素被分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，使酚红指示剂变红色。

（2）用于计数细菌菌落数的接种方法是涂布平板法，统计

的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数，每克土壤样品中的细菌数为（156＋178＋191）÷

3÷

0.1×

105＝1.75×

108。

由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏少。

（3）密码子由三个相邻的碱基组成，271个碱基和后面2个碱基一起共构成91个密码子，箭头处插入的70个核苷酸和后面2个碱基一起共构成24个密码子，紧随其后是UGA，应为终止