陕西地方标准编制说明小麦品种抗白粉病鉴定技术规范文档格式.docx
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（4）病原物
①病原物来源
在陕西番茄种植区采集灰霉病病株，从发病植株叶片的典型病斑上进行分离纯化，形态学鉴定确认为BotrytiscinereaPers.，PDA平板扩繁，经致病性测定后，试管斜面培养，4℃保存备用。
②灰霉病菌长期保存
在超净工作台上，将灰霉菌菌饼接种到PDA培养基平板上，23℃培养3-4d，然后切取小块长有菌丝的PDA培养基，放在灭菌的蒸馏水中保存，灭菌蒸馏水盛在有螺盖的小玻璃瓶中，-20保存。
或将灰霉菌小块菌饼放在30%灭菌甘油中，-80℃长期保存。
③孢子悬浮液的制备
灰霉病菌在PDA平板上黑暗培养7d产孢后，收集孢子，2%的蔗糖溶液配置孢子悬浮液（1×
106孢子/ml）。
（5）抗病性鉴定
①抗病性鉴定方法
ⅰ室内苗期抗性鉴定
选取待测番茄品种和感病对照T2-01六叶期幼苗，分别进行孢子悬浮液喷雾接种，用手持喷雾器喷雾，至叶面均匀布满小液滴。
接种后在23℃、相对湿度90%的黑暗条件下保湿24h。
每份试材3次重复，每重复10株。
接种4d后调查发病率和严重度，并计算番茄叶片灰霉病病情指数。
ⅱ离体叶片抗性鉴定
选取待测番茄和感病对照T2-01六叶期植株第3片复叶，采用孢子悬浮液点滴接种。
在小叶中心近轴处用移液器加5µ
L孢子悬浮液，以2%蔗糖溶液作对照。
将接种后的叶片置于直径9cm的培养皿内，封口膜封口。
在23℃、相对湿度90%的黑暗条件下培养24h后进行光照培养，光照时间为12h/d，光照强度为3000lx。
接种4d后计算病情指数。
每份试材3次重复，每重复10株，每株接种3片小叶。
ⅲ离体果实抗性鉴定
取大小一致的青果，在果实侧面用消毒针尖扎3mm深的孔，接种5µ
L孢子悬浮液，以灭菌蒸馏水5µ
L作对照。
将果实置于湿度90%的器皿中保湿，20℃黑暗条件下保存，接种第4d测量病斑面积，计算病斑扩展速率和相对病斑扩展速率。
每份试材3次重复，每重复5个果，每果扎2个孔。
ⅳ成株期鉴定病圃鉴定
鉴定圃设置在人工营造的有利于番茄灰霉病发病的抗性鉴定圃或病害常发区域。
田间鉴定病圃的栽培条件（品种、土壤类型及施肥）须均匀一致，且符合科学的农业实践（GAP），设立保护区。
在鉴定病圃中采用高垄栽培，每待鉴定品种种2行，每行15株，行长4.5m，行距0.6m，每隔12行种植一行当地感病品种做对照，重复3次，顺序排列编号。
灰霉病菌在PDA平板上培养7d产孢后，收集孢子，用2%蔗糖溶液配置孢子悬浮液（1×
106孢子/ml），即可用于病圃的接种，接种采用喷雾法。
选择傍晚喷雾，喷雾接种后24h保持棚内相对湿度80%以上。
接种前2d田间需浇灌保湿以满足发病所需条件。
接种时间：
番茄初花期。
在果实膨大期调查两次，间隔15d；
调查时目测每份鉴定品种群体的发病状况，逐株进行调查并记载病情级别。
病情调查方法
ⅰ最高病情级别个体确认
每个品种（系）取两次调查结果的最大值。
根据病害症状描述，逐份材料进行调查并记载病情级别。
如每个重复最高病情级别植株只有1株（叶），就需要对该株番茄主要特征特性与本品种典型特征特性进行比较，在确认符合本品种典型性后，该株番茄所表现出的病情级别就作为划分该品种（材料）抗性类别的主要依据。
如该株番茄不符合本品种典型性，应不记载病情。
按上述规定逐株向下确认，直到某病情级别被确认为止。
ⅱ鉴定调查记载表要有鉴定人员和复核人员签字。
在开展鉴定调查时，鉴定人员与复核人员一同进行，鉴定人员对鉴定植株病情级别进行判断，经复核人员确认后记载。
ⅲ抗性分离记载若一个鉴定群体中出现明显的抗、感类型，应在调查表中注明“抗性分离”，用“/”表示。
病情级别划分标准
（1）室内苗期和鉴定圃（喷雾接种）病情级别划分标准
病情级别
症状
0级
叶片无病斑
1级
单叶片有病斑3个
3级
单叶片有病斑4～6个
5级
单叶片有病斑7～10个
7级
单叶片有病斑11～20个，部分密集成片
9级
单叶片有病斑密集占叶面积四分之一以上
（2）离体叶片病情级别分级标准
病斑面积占整个叶面积的5%以下
病斑面积占整个叶面积的6%～15%
病斑面积占整个叶面积的16%～25%
病斑面积占整个叶面积的26%～50%
病斑面积占整个叶面积的50%以上
（3）离体果实病情级别分级标准
无病斑
病斑直径小于1cm
病斑直径1～2cm
病斑直径2～3cm
病斑直径3～4cm
病斑直径大于5cm
（6）抗性评价
①抗性类别划分标准
按严重度划分抗性类别
抗性级别
最高严重度级别
抗性类别
缩写
类别
I
免疫
1
HR
高抗
3
R
抗
5
MR
中抗
7
S
感
9
HS
高感
有效性判别
对照感病品种或任一鉴定品种的抗性级别达到7～9，该批次鉴定有效。
重复鉴定
同一鉴定品种的抗性级别一年为5，另一年在5以下或5以上的，如果两年抗性级别相差2个级别以上（包括2个级别）的，则需要做第三次抗性鉴定。
或一年在5以上，另一年在5以下的，则需要做第三次抗性鉴定。
抗性评价
ⅰ在有3年鉴定的结果中，如有2年的抗性类别是一致的，则此抗性类别作为最终鉴定结论。
ⅱ达到免疫-抗或感-高感类别的鉴定品种，当两年抗性类别不一致时，以记载的被确认的最高病情级别所对应的抗性类别为准。
ⅲ人工接种鉴定，同一鉴定品种的抗性级别一年为5级，一年在5以下或5以上的，如果两年抗性级别相差1个等级，取抗性级数值别较大的鉴定结果，对照标准重新划分抗性类别；
如果两年抗性级别相差2个级别以上（包括2个级别）的，则需要做第三次抗性鉴定，取位于中间的抗性级别，重新划分抗性类别。
ⅳ同一鉴定品种的抗性级别一年在5以上，另一年在5以下的，则需要做第三次抗性鉴定，重新划分抗性类别。
（7）鉴定报告
①人工接种鉴定一般以鉴定品种对番茄灰霉病的反应出具鉴定报告。
鉴定报告一般以单个品种单独出具。
如集中批量送样的，也可以多个品种出一份报告。
以番茄品种灰霉病抗性出具一份番茄品种抗病性鉴定报告，鉴定报告格式见《农作物品种抗病性鉴定指南》。
鉴定报告要盖鉴定单位公章，要有制表人、复核人和签发人签字。
三、试验验证：
包括试验（或验证）准确度、可靠性、稳定性的分析和说明，实验结果综述等；
本课题组对番茄品种抗灰霉病鉴定进行了多年的试验，以下对各种鉴定方法举一例说明。
1.番茄品种室内苗期抗性鉴定
（1）陕西省番茄灰霉菌的分离和鉴定
2012-2013年在番茄灰霉病发病盛期，分别从陕西省杨凌、兴平等地区采集62株番茄灰霉菌标样，经分离纯化后进行形态学鉴定，确定为灰葡萄孢菌，经致病性测定后，4℃保存备用或-80℃长期保存。
（2）室内盆栽法对陕西省番茄品种抗灰霉病的鉴定
2013-2015年，在室内采用盆栽法、离体叶片法、离体果实法和成株期鉴定圃对收集的62个陕西省番茄品种按照本技术规范进行了为期两年的抗灰霉病鉴定，鉴定过程中灰霉病发病比较充分，有些品种的灰霉病严重度达到九级，鉴定结果可以对这些材料的苗期抗灰霉性作出客观评价。
表1番茄品种（系）抗灰霉病鉴定
品种
编号
品种名称
品种来源
严重度病情级别
抗性
1.
长丰9号
陕西长天种业有限公司
2.
艾丽
中感
3.
贝丽
4.
金珠1号F1
5.
紫香玉F1
6.
粉珠3号
7.
绿水晶F1
8.
长丰3号
9.
长丰5号
10.
长丰8号
11.
北斗红石
西安北斗种业有限公司
12.
北斗棚乐
13.
北斗鑫澳
14.
北斗鑫粉
15.
北斗鑫尊
抗病
16.
凯特
17.
凯越
18.
欧客319
19.
欧美亚333
20.
欧亚迪
21.
欧亚嘉琪
22.
欧亚圣华
23.
北斗八号
24.
北斗三号
25.
北斗一号
26.
北斗鑫跃
27.
红玫瑰
28.
博瑞
西安金田种业有限公司
29.
金田盈粉
30.
欧帝
31.
奥菲斯
32.
菲亚特
33.
凤冠109
34.
禾胜丽茸
西安秦杰农业科技有限公司
35.
粉秀珠
36.
红香蜜
37.
禾胜菲龙
38.
禾胜丽龙
39.
禾胜雪龙
40.
禾胜天香
41.
禾盛大欧龙
42.
特丽达
43.
寒裕
44.
金珍珠
45.
雷顿
46.
丽妍
47.
超级保冠一号
西安秦蔬种业有限公司
48.
秦蔬一号
49.
秦蔬丰冠
50.
秦蔬低架王
51.
秦蔬粉冠王
52.
秦蔬农富
53.
秦蔬三号
54.
刚石明珠
55.
太空九号
56.
太空一号
57.
美琪1号
杨凌农业高科股份有限公司
58.
美琪2号
59.
美琪12号
60.
美琪6号
61.
美琪10号
62.
美琪8号
鉴定人：
赵新贝复核人：
王阳
四、知识产权说明：
标准涉及的相关知识产权说明；
本技术规程知识产权归研制单位所有，没有相关知识产权纠纷。
五、采标情况：
采用国际标准和国外先进标准的程度或与国内同类标准水平的比较；
目前国内外尚没有该方面的鉴定行业标准和地方标准。
本项目所制定的地方标准属首次提出。
该方法和体系可以作为我省鉴定番茄灰霉病的地方标准，填补我省在该领域的空白。
六、重大意见分歧的处理：
包括处理过程、依据和结果；
无重大分歧意见。
七、标准性质的建议说明：
建议审批发布为推荐性标准或强制性标准的说明及理由；
由于本标准涉及我省番茄抗灰霉病育种及番茄品种审定，而且目前国内尚没有番茄品种抗灰霉病鉴定的相关国家标准和行业标准，因此，建议将本标准作为推荐性地方标准批准发布，用于指导和规范番茄品种抗灰霉病鉴定。
八、其他应予说明的事项
无
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