丝蛋白创面敷料临床试验报告主要结果.docx

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丝蛋白创面敷料临床试验报告主要结果

丝蛋白创面敷料临床试验报告（主要结果）

1、概述

1.1研究背景

人体皮肤是维持内环境稳定和阻止微生物入侵的屏障。

烧伤后这一皮肤屏障功能丧失，临时性创面覆盖物部分替代皮肤的屏障作用，并为创面愈合提供良好的环境。

近几十年来，在烧伤创面的不同阶段根据创面的特性可应用不同创面覆盖物。

就II度烧伤和供皮区的创面治疗而言，往往选用凡士林纱布、水凝胶、水胶体敷料、藻酸盐敷料等各具特点的敷料。

在创面覆盖物中，应用于II度烧伤创面和供皮区的敷料主要性能除了常规要求：

包括粘附性、通透性、屏障功能、减少疼痛、顺应性、耐用性、不干扰创面愈合过程以外，根据创面愈合理论研究的进展，如果能够适度将渗液保留在敷料中造成一个湿润的环境，往往可以促进创面愈合。

我们通过一系列前期研究发现：

丝蛋白创面敷料能维持创面湿润环境、主动抑制创面渗液渗出，具有促进创面坏死组织脱落，从而减轻炎症反应、抑制创面进行性加深的作用，达到加速创面愈合进程的效果。

1.2.丝蛋白创面敷料简介

1.2.1主要用途

1用于治疗深II度及中厚供皮区创面为代表的深度创面或皮肤缺损：

作为创面修复敷料，避免创面暴露，防止创面感染，减轻疼痛，促进创面愈合。

2用于治疗浅II度及刃厚供皮区创面为代表的浅度创面或皮肤缺损：

作为创面修复敷料，以避免创面暴露，减轻疼痛，防止创面感染，加速创面上皮化，促进创面愈合；

作为创面治疗敷料，应用时间：

1—15天。

1.2.2形态结构

如图1所示，丝蛋白创面敷料由下层和上层所组成。

下层是丝蛋白创面敷料的主体，是以蚕丝蛋白为主要原料制成的丝素微孔材料，它是将蚕丝经脱胶、溶解、透析、提纯后，采用冷冻干燥工艺加工而成，微孔材料的外观为白色；上层

医用硅橡胶膜（见图2）。

敷料厚度：

2.0mm左右

图1丝蛋白创面敷料的结构示意图

（a）上表面（b）下表面

图2丝蛋白创面敷料表面的扫描电子显微镜照片

1.2.3产品特性及作用机理

①较好的创面亲和性：

由于蚕丝丝素蛋白良好的组织亲和性，能迅速而牢固地与创面粘附；

②较好的屏障功能：

上层医用硅橡胶膜能阻止细菌入侵，减少热量、蛋白质和离子的流失；

3良好的生物安全性：

无细胞毒性、刺激性、过敏性；

4良好的顺应性：

具有良好的柔韧性，可随体形覆盖创面，不因缝合、牵拉而撕裂；

5能减轻疼痛：

保护神经末梢免受外界刺激；

6促进创面愈合：

利用蚕丝丝素蛋白良好的生物相容性和丝素微孔材料保水能力，为细胞生长因子和组织修复细胞的聚集创造良好的微环境，促进创面上皮化，但不促使暂时的新的基质过度沉积，无占位性；

7适当的通透性：

能控制水分蒸发。

1.2.4生产工艺过程

桑蚕生丝—脱胶（碳酸钠溶液，98-100℃，2小时）—洗涤—干燥—丝素纤维—溶解（氯化钙的乙醇溶液，70℃，1-2小时）—纯化水透析—调整溶液组成—冷冻干燥—吸湿—表面医用硅橡胶膜复合—高温处理—切割—包装—消毒—制品。

1.2.5原料来源

本产品使用的主要原料是桑蚕生丝——由定点缫丝厂生产。

从蚕茧加工成生丝（缫丝）的工艺流程：

新鲜桑蚕茧（来自于绿色养蚕基地）—烘茧（70—125℃，4-7小时）—干茧—混茧—剥茧（剥去蚕茧外层散乱的茧衣）—选茧（选除有明显疵点的蚕茧）—煮茧（90—100℃水蒸气及高温水，10-18分钟）—缫丝（将蚕丝从茧层上离解出来，合并若干跟茧丝制成连续的生丝）—复摇—整理（绞丝、检验、包装、再检验等）—桑蚕生丝。

原料丝素和生丝分别有相应的行业标准和国家标准。

原料源头控制：

蚕种——家（桑）蚕种，来源于江苏省蚕种场；养蚕及烘茧——苏豪国际集团下属蚕业公司溧阳绿色养蚕基地；缫丝——江苏省海安缫丝厂（定点企业）。

1.2.6产品特性说明

（1）丝蛋白创面敷料的非吸收性：

由于本品采用高温等工艺处理，使丝素微孔材料内的丝素结晶化，使其在覆盖在创面的短期（15天）内不会被降解、吸收，重量不会明显损失[1－3]。

（2）丝蛋白创面敷料的保水性：

利用丝素的较强亲水性，同时利用微孔丝素材料的多孔网络和可膨胀性，赋予丝蛋白创面敷料良好的保水性，为创面愈合提供良好的湿润微环境。

（3）丝蛋白创面敷料的透湿性：

丝蛋白创面敷料上表面的医用硅橡胶膜能有效避免创面暴露，阻止细菌入侵，减少水分、热量、蛋白质和离子的流失；同时

允许适量水蒸气透过，可以有效防止创面积液。

1.3.蚕丝丝素材料的安全性

1.3.1蚕丝丝素的结构

蚕丝是指由蚕“纺制”出来的蛋白质纤维，通常所说的“蚕丝”一般是指家蚕（桑蚕）丝。

蚕丝由丝素（又称“丝芯蛋白”,约占75%）和丝胶（约占25%）两种蛋白质组成。

丝素纤维位于蚕丝内部，是纤维状蛋白，结晶度较高，不溶于水；丝胶包裹于丝素外围，是球状蛋白，可溶于水。

家蚕丝素的主要成分是H链，H链的核心区域由12个低复杂度的“结晶”区域和11段几乎相同拷贝的43个氨基酸残基组成的间隔序列组成。

“结晶”区全部由中性氨基酸组成，其中Gly-X重复序列覆盖了94%的序列，X中丙氨酸占65%,丝氨酸占23%,酪氨酸占9%。

每个结晶区都由若干个子域组成，每个子域包含约70个氨基酸残基,大部分以GAGAGS六肽重复序列开始而以GAAS四肽重复序列结束。

在子域中，Gly-X严格重复。

1.3.2根据蚕丝丝素的产生原理，丝素蛋白纯度高，不含有生物杂质

当蚕进入5龄期后，蚕的绢丝腺（蚕体内的一个腺体）发育成熟，绢丝腺后部内壁上的内皮细胞活跃地表达丝素蛋白。

丝素蛋白从内皮细胞分泌出来后，储存于绢丝腺内，此时丝素是液态的。

在5龄末期，蚕依靠机体的收缩作用，使储存于绢丝腺内的液态丝素向吐丝口推进，在推进过程中丝素被浓缩、纤维化，到达吐丝口时已经转变为高度有序排列的结构——液晶。

吐出后即形成丝素纤维。

由于：

①从内皮细胞分泌出来后，在储存、吐丝过程中，单独存在，不与其他生物成分共存，未接触其他组织、器官，未受生物污染，所以丝素是天然高纯度蛋白质，不需要提纯（这与大多数蛋白质不同，很多蛋白质例如胶原蛋白等，是由细胞分泌后与其他很多成分混杂，共同构成细胞外基质，同时提取时又需要粉碎组织，因此提纯难度很大）。

②若含有生物杂质，则丝素蛋白不可能形成高度有序排列的液晶结构。

③国内外以往对蚕丝丝素进行过大量研究，从未发现丝素中含有生物杂质。

所以，丝素蛋白纯度高，不含有细胞、细胞器、其他蛋白、多糖、DNA或其片段、蚕病原微生物等生物杂质。

1.3.3尚未发现蚕与人类存在病原微生物交叉感染的可能性蚕属于昆虫纲、鳞翅目、蚕蛾科昆虫，是无脊椎动物，是非哺乳动物。

从遗传学的角度看，与人类及哺乳动物的遗传学距离很远。

从流行病学和病理学的角度看，各种病原微生物都有其对应的可寄生物种，都有特定的寄生部位、繁殖速度、扩展途径、机能损伤机制和排除路径,在无脊椎动物与脊椎动物的共患病毒中不包含蚕病原微生物，并且在可感染人类的高致病性病原微生物名录中没有蚕病原微生物。

因此，蚕病病原微生物不属于可感染人类的高致病性病原微生物。

蚕病原微生物与人类不存在交叉感染的风险。

正由于上述原因，国外已经将类似产品作为医用缝线等医疗器械用品。

1.3.4国内外大量的研究表明，丝素蛋白材料具有可靠的生物安全性

近20年来，美国、中国、日本、韩国、意大利等国的多个生物医用材料研究组广泛开展了丝素蛋白材料细胞相容性的研究，涉及的细胞几乎包含了作为生物材料有可能接触的所有细胞，例如：

表皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、成骨细胞、胶质细胞、软骨细胞、肝细胞、肌肉细胞、间充质干细胞、神经干细胞等。

所有的研究都表明：

丝素材料与人类细胞、哺乳动物细胞都具有良好的相容性，有利于各种组织修复细胞的黏附和生长。

列举几篇研究报道如下：

Unger等（R.E.Unger,K.Peters,etal.Endothelializationofanonwovensilkfibroinnetforuseintissueengineering:

growthandgeneregulationofhumanendothelialcells.Biomaterials,2004,25:

5137-5146）研究了几种人源细胞对丝素蛋白无纺材料的反应。

他们将来自人体不同组织的细胞，如上皮细胞、内皮细胞、角化细胞、成骨细胞等种植于丝素蛋白材料上，采用激光共聚焦显微镜和电子显微镜观察了细胞在丝素材料上的黏附和生长情况。

结果表明这些细胞在丝素材料的纤维上能迅速黏附并扩增。

细胞不仅能覆盖单根纤维的表面而且能在纤维与纤维间架桥形成组织结构。

扫描电镜显示细胞与丝素纤维结合紧密，而且细胞的生长不会改变纤维的结构。

Zhang等（X.Zhangetal.Invitroevaluationofelectrospunsilkfibroinscaffoldsforvascularcellgrowth.Biomaterials，2008，29：

2217-2227）从分子水平研究了丝素材料对人主动脉内皮细胞及冠状动脉平滑肌细胞的影响，研究表明丝素材料与这两种细胞具有很好的相容性，丝素作为血管修复材料有良好的开发前景。

Kuniyo等（KuniyoInouye,MasatoKurokawa,ShigemichiNishikawa,MasuhiroTsukada.UseofBombyxmorisilkfibroinasasubstratumforcultivationofanimalcells.BiochemicalandBiophysicalmethods,1998,37:

159-16）4研究了多种哺乳动物细胞在丝素蛋白材料、Ⅰ型胶原蛋白材料和聚苯乙烯板上的生长情况。

研究结果表明，细胞在丝素蛋白材料和胶原蛋白材料上的粘附、分化和增殖的情况分别比在聚苯乙烯板上高30%和50%。

丝素蛋白能促进贴壁细胞的生长，并且丝素材料可以替代胶原蛋白作为细胞培养的基质材料。

Norihiko等（NorihikoMinoura,Sei-IchiAiba,etal.Attachmentandgrowthoffibroblastcellsonsilkfibroin.Biochemicalandbiophysicalpesearchcommunications,1995,2（208）:

511-516）指出家蚕丝素膜与胶原膜一样能够促进成纤维细胞的黏附、迁移和增殖。

IlariaDal等（IlariaDalPra,GiulianoFreddi,etal.Denovoengineeringofreticularconnectivetissueinvivobysilkfibroinnonwovenmaterials.Biomaterials,2005,26:

1978-99）将家蚕丝素多孔材料植入大鼠的皮下组织后，经过持续六个月后表明，丝素多孔材料不仅有很好的生物相容性，还可以引导网状结缔组织血管物质的再生。

L．Meinel等（ReginaV,SamuelP,WayneM.OrientationofsilkⅢattheairwaterinterface.Journalofcolloidand