免疫检验项目标准操作程序概要Word文档下载推荐.docx

免疫检验项目标准操作程序概要Word文档下载推荐.docx

《免疫检验项目标准操作程序概要Word文档下载推荐.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《免疫检验项目标准操作程序概要Word文档下载推荐.docx（24页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

科主任：

1.乙肝病毒表面抗原诊断操作规程1

2.乙肝病毒表面抗体诊断操作规程2

3.乙肝病毒e抗原诊断操作规程3

4.乙肝病毒e抗体诊断操作规程4

5.乙肝病毒核心抗体诊断操作规程5

6.甲型肝炎病毒IGM抗体诊断操作规程6

7.戊型肝炎病毒IgG抗体诊断操作规程7

8.人类免疫缺陷病毒抗体检测规程9

9.抗双链DNA检测程序11

10.抗核抗体检测程序12

11.T0RCH-IgM四联检测规程13

12.EB病毒抗体检测程序14

13.可提取性核抗体原自身抗体操作规程15

14.抗精子抗体检测规程17

15.抗子宫内膜抗体检测规程18

16.HPV抗体检测规程19

17.结核分支杆菌抗诊断试剂20

18.梅毒甲苯胺红不加热血清试验22

19.流行性出血热IGM24

20.丙型肝炎病毒抗体诊断25

乙肝病毒表面抗原诊断操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

5、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

洗板机洗板：

选择洗涤5次程序后拍干。

6、每孔加显色剂A液、B液各1滴,充分混匀,封板，置37度孵育15分钟。

7、每孔加终止液1滴，混匀。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

三、注意事项：

1、使用前试剂应摇匀，并弃去1〜2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

乙肝病毒表面抗体诊断操作规程

一、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

2、将标本对应微孔按顺序编号。

乙肝病毒e抗原诊断操作规程

3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计算，高于0.05按实际OD值计算。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

乙肝病毒e抗体诊断操作规程

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

3、每孔加入待测标本50微升，设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

5、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

选择洗涤5次程序后拍干。

6、每孔加显色剂A、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育15分钟。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

二、结果判断：

CutoffValue计算：

COV=阴性对照平均0D值+阳性对照平均0D值12标本0D值大于等于

COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性。

三、注意事项：

2、封片不能重复使用。

3、结果判断须在反映终止后10分钟内完成。

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6、试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

乙肝病毒核心抗体诊断操作规程

1、操作步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出至室温中平衡30分钟后使用。

3、每孔加入待测标本50微升（待测标本用生理盐水1：

30稀释，检测结果为临床意义，请用户自行选择），设阴、阳性对照各两孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。

4、每孔加入酶结合物1滴，（空白对照孔除外）充分混匀，封板，置37度孵育30分钟。

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。

6、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育15分钟。

7、每孔加终止液1滴，混匀。

8、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔0D值。

2、结果判断：

CutoffValue计算：

原倍血清C0V=阴性对照平均0D值乘以0.3。

1：

30稀释血清COV=阴性对照平均OD值乘以0.5。

标本OD值大于等于COV为阴性，标本OD值小于COV为阳性。

三、注意事项：

5、待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

甲型肝炎病毒IGM抗体诊断操作规程

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

3、代待测标本用生理盐水作1：

1000稀释，每孔加入稀释标本100微升，设阴，阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各2滴，并设空白对照1孔，封板，置37度孵育20分钟。

4、手工洗板：

弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复3次后拍干。

选择洗涤3次程序后拍干。

5、每孔加入HAVAg1滴，酶结合物1滴（空白对照孔不加），充分混匀，封板，置37度孵育20分钟。

6、手工洗板：

7、每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37度孵育10分钟。

8、每孔加终止液1滴，混匀。

9、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

COV=样品OD值/阴性对照平均OD值大于等于2.1判断为阳性，否则为阴性。

阴性对照OD值低于0.05作0.05计高于0.05按实际OD值计。

1、使用前试剂应摇匀，并弃去1〜2滴后垂直滴加。

2、封片不能重复使用。

4、不同批号的试剂不可混用。

5、使用试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

戊型肝炎病毒IGg抗体诊断操作规程

一、测定步骤：

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用。

3、每次实验均需设立空白对照2孔，阳性对照2孔，阴性对照2孔。

4、每孔加样品稀释液100微升。

（阳性对照孔、阴性对照孔除外）空白对照直接加入样品稀释液100微升。

5、加待测标本，每孔10微升。

阳性对照、阴性对照不需稀释，直接加入

100微升于各相应孔内。

震荡混匀，封板，置37度孵育30分钟。

6、手工洗板：

7、每孔加入酶结合物100微升（或两滴），封板，置37度孵育30分钟。

8、手工洗板：

9、每孔加显色剂A液、B液各50微升（或一滴），充分混匀，封板，置37度孵育10分钟。

10、每孔加终止液1滴，混匀。

11、用酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

CutoffValue的计算：

COV=阴性对照平均OD值+0.22

标本OD值大于等于CutoffValue为阳性

标本OD值小于CutoffValue为阴性

阴性对照平均OD值小于0.05，按实际计，若阴性对照平均OD大于等于0.05，按0.05计。

1、使用前试剂应摇匀。

4、若试验结果阴阳性对照有疑问，该试验视为无效，需重做。

5、洗涤液用前需25倍稀释，若洗涤液出现结晶，可置37度使之溶解

6、不同批号的试剂不可混用。

7、使用试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理

人类免疫缺陷病毒抗体检测规程

1、将试剂盒从冰箱中取出，至室温中平衡30分钟后使用

3、配液：

将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。

4、编号：

将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照一型、二型各一孔，空白对照一孔。

5、加样：

分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照100ul。

6、温育：

覆盖黏胶纸，置37度孵育30分钟。

7、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。

8、每孔加酶结合物100微升，取新粘胶纸覆盖放映板，置37度孵育30分钟。

9、取出已孵育完毕的反应板，弃去粘胶纸，吸干板内液体，将洗涤液注满各孔（约300微升/孔），吸干，反复5次，在干净纱布上将板拍干。

10、每孔加入底物缓冲液50微升，TMB50微升，混匀，置37度显色10分钟。

11、加终止液50微升震荡反应板5秒钟，使之充分混匀。

12、在酶标度数仪上，取波长450nm（建议使用双波长酶标仪比色，参考波长630nm），仪空白对照孔校零，读取每孔吸收值（加终止液后，务必在15分钟内读数完毕）

抗HIV阳性对照OD值大于0.8，抗HIV阴性对照OD值小于0.08。

CutoffValue=阳性对照值乘以10%（若阳性对照OD值大于2.5按2.5计算）

标本OD值小于等于CutoffValue为阴性。

标本OD值大于CutoffValue为阳性。

3、注意事项：

1、在试剂的使用单位必须使当地卫生行政部门标准的HIV初筛试验室。

2、整个检测工作必须符合HIV试验室管理范围和生物安全守则规定，严格防止交叉感染。

操作时必须带手套，穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。

3、HIV检测结果的判定不许以酶标仪的读数为准。

4、标本和酶结合物均应用加样器加注，并经常校对其准确性。

5、所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

6、洗涤液若出现结晶，可置37度溶解。

7、粘胶纸不能反复使用。

8、微孔条从冷藏环境中取出时，应在室温平衡至无潮气方可使用，未用完的须放入有干燥剂的密封袋中保存。

抗双链DNA检测程序

3、滴入2滴试剂一（洗涤液）于反应板中央孔中，待完全渗入

4、滴入100ul血清于反应板孔中待完全渗入。

5、滴加3滴试剂二（金标液）于反应板孔中，待完全渗入。

6、滴入三滴试剂一于反应板孔中，待完全渗入。

二、结果判断

阳性：

反应板孔中央出现2个红色圆斑，为阳性。

阴性：

反应板孔中央出现1个红色圆斑，为阴性。

1、若遇冬天室内温度较低时（16度左右），可在37度水浴箱内操作2、陈旧血清盒高脂血症血清一般不宜使用。

3、如果质控斑点太浅请多加2滴市集二。

若膜的背景较深，可多滴几滴试剂二。

若膜的背景较深，可多滴加几滴试剂一充分洗涤。

阳性斑点较弱时，可延长至20分钟观察结果。

4、检测一旦开始操作，应按操作步骤连续进行，直至结束。

抗核抗体检测程序

3、滴入2滴试剂一（洗涤液）于反应板中央孔中，待完全渗入。

二、结果判断阳性：

1、若遇冬天室内温度较低时（16度左右），可在37度水浴箱内操作。

2、陈旧血清盒高脂血症血清一般不宜使用。

3、如果质控斑点太浅请多加2滴试剂2。

若膜的背景较深，可多滴几滴试剂2。

若膜的背景较深，可多滴加几滴试剂1充分洗涤。

阳性斑点较弱时，可延长至20分钟观察结果。

TORCH-IgM四联检测规程

1、取出试剂盒，室温放置5－10分钟。

2、取出检测板，在中央孔加A液200ul（四滴），待渗入。

3、加待测血清200ul（四滴），待渗入。

4、加A液洗涤液100ul（2滴），待渗入。

5、加B液检测液200ul（四滴），待渗入。

6、在加A液150ul（3滴），然后直接观察结果。

阴性：

仅质控点出现红色斑点为阴性反应。

除质控点出现红色斑点外，四角的检测点也有红色或浅红色斑点出现。

哪一个检测点出现红色斑点即为相应的IgM抗体阳性。

如左上角检测点TOX出现红色斑点即为弓形体IgM抗体阳性；

左上角TOX和左下角CMV出现红色斑点为弓形虫和巨细胞病毒检测双阳性；

左上角TOX和左下角CMV，和右上角RUV出现红色斑点为弓形虫、巨细胞病毒和风疹病毒三项阳性；

左上角TOX，左下角CMV、右上角RUV、和右下角HSV二出现红色斑点即为弓形虫、巨细胞病毒、风疹病毒和单纯疱疹病毒二型检测阳性。

EB病毒抗体检测程序

可提取性核抗体原自身抗体操作规程

3、按所需量将浓缩洗涤液用蒸馏水1：

10稀释。

4、取出反应槽，每槽加入0.5ml洗涤液然后加入待检血清10ul，充分混匀，缓慢摇动于37度孵育30分钟。

5、弃去槽内液体，再吸水纸上拍干，用洗涤液洗涤4次，每次每槽1ml洗涤一分钟。

6、每槽加入洗涤液0.5ml，酶标抗体20ul，混匀，缓慢摇动于37度孵育30分钟。

7、弃去槽内液体，再吸水纸上拍干，用洗涤液洗涤4次，每次每槽1ml洗涤一分钟。

8、加入显色液A液B液各0.5ml,室温反应10分钟。

9、每槽加入0.5ml终止液，终止反应，1分钟后弃去液体，用自来水洗涤数次，取出膜条，用吸水纸吸干后即可进行结果判断。

1、结果判断请参看标准谱带图，零位线下约2mm出的第一条显色带为试剂质控线，此显色带若不出现，说明试剂失效。

2、判断结果时，要注意将谱带定位与带型结合起来。

带型指一种抗体有多条区带时，区带间相对不变的位置关系构成的图形。

如抗Scl-