玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌Word格式.docx

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（1）洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:

浓溶液重铬酸钠或重铬酸钾（工业用）50g

自来水150mL

浓硫酸（工业用）800mL

稀溶液重铬酸钠或重铬酸钾（工业用）50g

自来水850mL

浓硫酸（工业用）100mL

配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。

配好后的洗涤液应是棕红色或桔红色。

贮存于有盖容器内。

（2）原理重铬酸钠或重铬酸钾与硫酸作用后形成铬酸，酪酸的氧化能力极强，因而此液具有极强的去污作用。

（3）使用注意事项（a）洗涤液中的硫酸具有强腐蚀作用，玻璃器皿浸泡时间太长，会使玻璃变质，因此切忌到时忘记将器皿取出冲洗。

其次，洗涤液若沾污衣服和皮肤应立即用水洗，再用苏打水或氨液洗。

如果溅在桌椅上，应立即用水洗去或湿布抹去;

（b）玻璃器皿投入前，

应尽量干燥，避免洗涤液稀释;

（c）此液的使用仅限于玻璃和瓷质器皿，不适用于金属和塑料器皿;

（d）有大量有机质的器皿应先行擦洗，然后再用洗涤液，这是因为有机质过多，会加快洗涤液失效，此外，洗涤液虽为很强的去污剂，但也不是所有的污迹都可清除;

（e）盛洗涤液的容器应始终加盖，以防氧化变质;

（f）洗涤液可反复使用，但当其变为墨绿色时即已失效，不能再用。

（二）空玻璃器皿的包扎

1.培养皿的包扎

培养皿常用旧报纸密密包紧，一般以5—8套培养皿作一包，少于5套工作量太大，多

于8套不易操作。

2.吸管的包扎

准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段约1.5cm长的棉花，以免

使用时将杂菌吹入其中，或不慎将微生物吸出管外。

棉花要塞得松紧恰当，过紧，吹吸

液体太费力;

过松，吹气时棉花会下滑。

然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的近

左端，与报纸约呈45度角，并将左端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷入

报纸，右端多余的报纸打一小结。

如此包好的很多吸管可再用一张大报纸包好，进行干

热灭菌。

3.试管和三角烧瓶等的包扎

试管管口和三角烧瓶瓶口塞以棉花塞，然后在棉花塞与管口和瓶口的外面用两层报纸

（不可用油纸）与细线包扎好，进行干热灭菌。

试管塞好棉花塞后也可一起装在铁丝篓中，

用大张报纸将一篓试管口做一次包扎，包纸的目的在于保存期避免灰尘侵入。

空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若需湿热灭菌，则要多用几层报纸包扎，外面最好再加

一层牛皮纸。

（三）干热灭菌法适用于玻璃器皿，如试管、培养皿、三角瓶、移液管等的灭菌;

1.装入待灭菌物品预先将各种器皿用纸包好或装入金属制的培养皿筒、移液管筒内，然

后放入电热烘箱中。

2.升温关好电烘箱门，打开电源开关，旋功恒温调节器至所需温度刻度（本实验所需为

160—170?

），此时烘箱红灯亮，表明烘箱已开始加热，当温度上升至所设定温度后，

则烘箱绿灯亮，表示巳停止加温。

3.恒温当温度升到所需温度后，维持此温度2h。

4.降温切断电源，自然降温。

5.取出灭菌物品待电烘箱内温度降到70?

以下后，才能打开箱门，取出灭菌物品。

常用培养基的配制和湿热灭菌

学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。

牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/LNaOH、NaCL、1mol/LHCl、KHPO?

3HO、MgSO4?

7HO、FeSO?

7HO242242

试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布

（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。

其配方如下:

牛肉膏3g、蛋白胨l0gNaCl5g、琼脂15—20g、水1000mL、pH7.4—7.61.称药品:

按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。

牛肉膏可放在小烧杯

或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯;

也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，

牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。

蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。

2.加热溶解:

在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒

搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。

若配制固体培养基，则将称好的琼脂放

入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中（需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后

补足所失的水分。

3.调pH:

检测培养基的pH，若pH偏酸，可滴加1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH

试纸检测，直至达到所需pH范围。

若偏碱，则用1mol/LHCl进行调节。

pH的调节通常

放在加琼脂之前。

应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。

4.过滤:

液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。

5.分装:

可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。

分装时可用三角漏斗以免使培养基沾

在管口或瓶口上面造成污染。

分装量:

固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜

面。

分装入三角瓶内以不超过其容积内一半为宜。

半固体培养基以试管高度的1/4为宜，

灭菌后垂直待凝。

6.加棉塞:

棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防

止杂菌侵入和有利透气的作用。

要使棉塞总长约3,5塞人试管口或瓶口内，以防棉塞脱

落。

7.包扎:

加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉

塞。

若培养基分装于试管中，则应先把试管扎成捆后，再于棉塞外包—层牛皮纸。

然后

用记号笔注明培养基名称、组别、日期。

8.灭菌将上述培养基于121.3?

湿热灭菌20min。

如因特殊情况没能及时灭菌，则应放人

冰箱内暂时保存。

9.摆斜面灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，使

斜面长度不超过试管总长的一半。

10.无菌检查将灭菌的培养基放入37?

温箱中培养24-48h，无菌生长时可以使用，或放置

在冰箱或清洁的橱内，备用。

（二）高氏1号培养基的配制

高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。

1.配方:

可溶性淀粉20g、KNO1g、NaCl0.5g、KHPO?

3HO0.5g、KSO?

7HO0.5g、3242242

FeSO?

7HO1g、琼脂15—20g、水1000mL、pH7.4—7.642

2.称量和溶解:

经计算后称量，按用量先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水

将其调成糊状，再加至少于所需水量的沸水中，继续加热，边加热边搅拌，至其完全溶

解。

再加入其他成分依次溶解。

对微量成分FeSO?

7HO可先配成高浓度的贮备液后再42

加入，方法是先在100mL水中加入1g的FeSO?

7HO，配成浓度为0.01g/mL的贮备液，再42

在1000mL培养基中加入以上贮备液1mL即可。

待所有药品完全溶解后，补充水分到所

需的总体积。

如要配制固体培养基，其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白脏培养基配制3.pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基配制。

（三）马丁氏培养基的配制

马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。

1.配方:

KHPO1g、FeSO?

7HO0.5g、蛋白胨5g、葡萄糖10g、琼脂15—20g、水2442

1000mL、自然pH。

先计算后称量，按用量称取各成分，并将其溶解在少于所需量的水中。

待各成分完全溶解后，补充水分到所需体积。

再将孟加拉红配成1,的水溶液，在

1000mL培养液中加人以上孟加拉红溶液3.3mL，混匀后，加入琼脂加热融化，方

法同牛肉膏蛋白胨培养基配制。

3.分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋自胨培养基配制。

4.链霉素的加入:

链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基融化后待温度降全45?

左右时才能加入。

可先将链霉素配成1,的溶液（配好的链霉素溶液保存于

—20?

），在1000mL培养基中加1,链霉素0.3mL，使每毫升培养基中含链霉素30

μg。

（四）高压蒸汽灭菌法

高压蒸汽灭菌法适用于培养基、无菌水、工作服等物品的灭菌。

1.加水:

将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，以水面与三角架相平为宜。

2.装料:

将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。

装有培养基的容器放置时要防止液体溢

出，瓶塞不要紧贴桶壁，以免冷凝水沾湿棉塞。

3.加压:

将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐

螺口，然后以同时旋紧相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀。

4.排气:

用电炉或煤气加热（待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔排出。

一般排出

的气流很强并有嘘声时，表明锅内空气已排净（沸后约5min）。

5.升压:

当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。

本实验用121?

，20min

灭菌。

6.降压:

达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下降到零后，打开排气阀，放净余

下的蒸汽后，再打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。

7.无菌检查:

将已灭菌培养基于37?

培养24h，无杂菌生长，即可待用。

四、注意事项

1.称药品用的牛角匙不要混用;

称完药品应及时盖紧瓶盖:

调pH时要小心操作，避

免回调。

2.不同培养基各有配制特点，要注意具体操作。

六、实验报告

1.记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。

2.配制培养基有哪几个步骤?

在操作过程中应注意些什么问题?

为什么?

3.培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌,若不能及时灭菌应如何处理?

已灭菌的

培养基如何进行无菌检查,