HIV实验室检测方法和步骤文档格式.docx

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8/8孔×

12 

6.1.4.2. 

HIV酶标记物 

12ml×

1瓶 

6.1.4.3. 

阴性对照 

1ml×

6.1.4.4. 

阳性对照 

1瓶

6.1.4.5. 

25倍浓缩洗液 

80ml×

用去离子水或蒸馏水稀释 

6.1.4.6. 

底物缓冲液 

8ml×

6.1.4.7. 

底物液 

6.1.4.8. 

终止液 

7ml×

6.1.4. 

9. 

封口袋 

1个

6.1.4.10. 

说明书 

1份

6.1.5操作方法

6.1.5.1.加样：

将预包被板条固定于板架上。

每次试验设阴性对照2孔、阳性对照2孔，分别加入阴、阳性对照100ul；

设空白对照1孔，不加样品。

其余孔加入待测样品100ul。

6.1.5.2.温育：

置37℃温育60分钟。

6.1.5.3.洗涤：

弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30－60秒，弃去孔内洗液，扣干。

重复洗5次。

6.1.5.4.加酶：

空白对照孔不加酶，其余孔加入酶标记物100ul。

6.1.5.5.温育：

置37℃温育30分钟。

6.1.5.6.洗涤：

弃去孔内酶标记物，重复洗5次（同操作步骤3）。

6.1.5.7.显色：

每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，振荡混匀，置37℃温育10分钟。

6.1.5.8.终止：

每孔加入终止液50ul，轻拍混匀。

在单波长450nm或双波长450nm/630nm下，用空白孔校零，再读取各孔OD值。

6.1.6结果判读

9

6.1.6.1.要求：

阳性对照OD值应>

0.80

阴性对照OD值应<

0.08（空白校零后）

6.1.6.2.临界值（C.O.）计算：

临界值（C.O.）＝阳性对照平均OD值×

10%

备注：

阳性对照OD值大于2.5按2.5计算。

6.1.6.3.结果判定：

样品OD值＞临界值（C.O.）为HIV抗体阳性

样品OD值≤临界值（C.O.）为HIV抗体阴性

初筛试验阳性者应重新取样进行双孔复试，按照《全国艾滋病检测工作规范》需将血样或重新采血送“HIV筛查中心实验室”进行确认试验。

6.2.1试剂名称：

6.2.2试剂厂家：

英科新创（厦门）科技有限公司

6.2.3原理及用途:

本试剂盒采用双抗原夹心两部法检测人血清或血浆样本中（HIV1/2）型抗体.采用多种HIV-1和HIV-2的特异性抗原制作预包被板及酶结合物.当待检样本中存在HIV抗体时,在反应过程中形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”的免疫复合物,加入底物后形成显色反应.适用于辅助诊断及献血员筛查。

6.2.4试剂盒组份

6.2.4.1.测抗-HIV酶联板 

1块（96孔） 

7.显色剂A 

1瓶（7ml）

6.2.4.2.测抗-HIV样品稀释液 

1瓶（7ml） 

8.显色剂B 

1瓶 

（7ml）

6.2.4.3.测抗-HIV酶标抗原 

1瓶（13ml） 

9.终止液 

1瓶（7ml）

6.2.4.4.抗-HIV阳性对照（已灭活） 

1瓶（1ml） 

10.不干胶封片 

2张

6.2.4.5.抗-HIV阴性对照（已灭活） 

11.说明书 

6.2.4.6.20×

洗涤液 

1瓶（50ml） 

12.密封袋、干燥剂 

1套

6.2.5标本要求血清或血浆（可用枸橼酸钠、肝素等作抗凝剂）

6.2.6仪器要求酶标仪 

洗板机 

恒温箱 

加液器等

6.2.7检测程序

6.2.7.1．将各种试剂移到室温（18-25℃）平衡半小时后，取一瓶20×

洗涤液，加蒸馏水至1000ml，混匀后备用。

6.2.7.2．将酶联板从密封袋中取出，每孔加入1000μl酶标抗体，设一个空白对照孔，两个阳性对照孔，两个阴性对照孔。

取阳性对照和阴性对照分别充分混匀后各20μl 

加入对照孔中，其余每个孔加待检血清20μl，充分混匀，将酶联反应板置微板振荡器上混合5－10秒，用不干胶封片封盖反应板。

未用完的板条在密封袋中保存。

6.2.7.3．酶联板置37℃温育60分钟,小心吸干孔中血清，用洗涤液洗5次，然后在吸水纸上拍干。

6.2.7.4．每孔加显色剂A 

50μl，显色剂B 

50μl，轻轻振荡后置37℃暗处显色30分钟，每孔加终止液50μl。

6.2.7.5．选择酶标仪测定波长450nm，用空白孔调零点，测定各孔OD值。

也可选择630nm作为参考波长，用双波长测定。

6.2.8结果判定

6.2.8.1．Cutoff值＝0.12＋N（阴性对照的平均值）

6.2.8.2．阴性对照OD值大于等于0.10。

6.2.8.3．阳性对照OD值大于等于0.80，阴性对照OD值大于0.1，则实验不成立，全部实验重做。

6.2.8.4．标本OD值小于Cutoff值为阴性，大于等于Cutoff值为阳性。

6.2.8.5．阳性者须重新取样双孔复试，复试阳性者应按全国HIV管理规范，送HIV筛查中心实验室进行确认。

6.2.9注意事项

6.2.9.1.本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。

6.2.9.2.整个HIV检测必须符合《全国艾滋病检测技术规范》生物安全守则规定，严格防止交叉感染。

操作时必须戴手套、穿工作服，严格健全和执行消毒隔离制度。

6.2.9.3.HIV-1/HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。

6.2.9.4.样品及各种试剂应用加液器加注，并经常校对其准确性。

6.2.9.5.洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.2.9.6.所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

6.2.9.7.微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方可使用，未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。

6.2.9.8.用于检测的样品应保持新鲜。

6.2.9.9.剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

6.2.9.10.若倍浓缩洗液出现结晶，请放置37℃至溶解。

6.2.9.11.结果判读请在15分钟内完成。

6.2.9.12.不同批号的试剂组份不可混用。

6.3.1试剂名称：

6.3.2试剂厂家：

珠海丽珠试剂有限公司

6.3.3原理及用途：

本品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型（HIV-1/HIV-2）抗原（合成肽或基因重组蛋白）包被的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理（SandwichELISA）检测人血清或血浆中的HIV-1/HIV-2抗体。

6.3.4.1. 

HIV抗原包被板 

6.3.4.2. 

6.3.4.3. 

6.3.4.4. 

6.3.4.5. 

20倍浓缩洗液 

50ml×

用去离子水或蒸馏水稀释至1000ml 

6.3.4.6. 

6.3.4.7. 

6.3.4.8. 

6.3.4. 

6.3.4.10. 

6.3.5操作方法

6.3.5.1.将试剂盒平衡至室温，取出所需的条板，剩余的即时封存。

6.3.5.2.用去离子水和蒸馏水20倍稀释浓缩洗涤液。

6.3.5.3.将所需数量的条板固定于支架，按顺序编号，设置样品孔、空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔（每次实验需设空白对照1孔，阳性对照2孔，阴性对照3孔。

）。

在样品孔中加入50ul待测样品，空白孔不加任何液体，阴性、阳性对照孔分别加入50ul阴性或阳性对照，轻拍混匀。

6.3.5.4.置37℃温育30分钟。

6.3.5.5.将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍，扣干。

（注：

洗涤时各孔要加满洗液，勿使孔间交叉污染。

采用洗板机时应设定每遍有60秒的浸泡时间。

）

6.3.5.6.每孔加入50ul酶标记物（空白孔除外），轻拍混匀。

6.3.5.7.置37℃温育30分钟。

6.3.5.8.将孔内液体甩干，置洗板机用洗涤液充分洗涤6遍，扣干。

6.3.5.9.每孔加入50ul底物缓冲液和50ul底物液，轻拍混匀，置37℃避光温育30分钟。

6.3.5.10.每孔加入50ul终止液终止显色反应.

6.3.5.11.用酶标仪单波长450nm（需设空白对照孔，并以空白对照孔调零）或双波长450nm/630nm测定各孔A值。

6.3.6结果判定

6.3.6.1.临界值（Cutoff）＝0.15＋阴性对照的平均A值

6.3.6.2．样品的A值≥Cutoff值为HIV抗体反应阳性。

6.3.6.3．样品的A值<

Cutoff值为HIV抗体反应阴性。

6.3.6.4.正常时，阴性对照A值应≤0.12，阳性对照A值应≥0.80，阴性对照值若小于0.08以0.08计算。

6.3.6.5.若阳性对照A值孔间之差大于30%，应重复实验。

6.3.6.6.初次实验阳性者应重新取样进行双孔复试，按全国HIV检测管理规范的要求，须将血样或重新采血送HIV确认实验室做确认实验，确认报告阴性者，血可以发放使用；

凡确认实验阳性和可疑者，血不能发放使用，统一送确认实验室处理。

6.3.7注意事项

6.3.7.1.本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。

6.3.7.2.整个HIV检测必须符合《全国艾滋病检测技术规范》生物安全守则规定，严格防止交叉感染。

6.3.7.3.HIV-1/HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。

6.3.7.4.样品及各种试剂应用加液器加注，并经常校对其准确性。

6.3.7.5.洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.3.7.6.所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

6.3.7.7.微孔板条从冷藏环境中取出时应在室温中平衡至潮气干尽方可使用，未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。

6.3.7.8.用于检测的样品应保持新鲜。

6.3.7.9.剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

6.3.7.10.不同批号的试剂组份不可混用。

6.4.1试剂名称：

人类免疫缺陷病毒（HIV1/2）抗体诊断试剂（乳胶层析法）

6.4.2试剂厂家：

艾康生物技术（杭州）有限公司

6.4.3实验原理：

本品系用特异性重组HIV1/2抗原gp41和gp36及兔抗HIV1/2多克隆抗体包被硝酸纤维素膜,配以红色乳胶标记重组HIV1/2抗原pg41和pg36及其他试剂制成,应用双抗原夹心反应原理,定性检测血清/血浆标本忠HIV1/2抗体,用于无偿献血的现场筛查.

6.3.4.试剂组成

6.3.4.2.艾康人类免疫缺陷病毒（HIV1/2）抗体诊断试剂（乳胶层析法）

6.3.4.3.一次性吸管.

6.3.5试验方法:

6.3.5.1.本试剂使用人血清或血浆。

检测时应尽量使用新鲜的样本；

样本出现浑浊时，通过离心或过滤取上清检测。

6.3.5.2.不能检测含有悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样品。

6.3.5.3.样品中应无微生物，无菌分离的样品可以再2-8℃储存1周，长期储存应于-20℃或更底温度条件，避免反复冻融。

6.3.5.4.使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。

6.3.5.5.不能使用放置时间过常、长菌、发臭的标本，这样避免因标本污染而造成的非特异反应。

6.3.6实验方法：

在加样处滴加样品80ul，平置于室温，30分钟内看结果，

9.6.3.7结果判定

6.3.7.1.在30分钟后的结果无效。

6.3.7.2.样品视为传染品，注意安全操作。

6.3.7.3.测试卡上显示两条红线时，即可判为初筛实验阳性结果。

6.3.7.4.测试卡从包装中取出后，应在60分钟内使用，潮湿空气中暴露时间过长将影响检测结果。

如测试卡储存于冰箱（2-8℃），取出后，应平衡至室温再开口使用。

6.3.7.注意事项

6.3.7.1.检测为阳性的标本药注意保藏，并需要进一步确正。

6.3.7.2.检测为阳性的样品，需要进行复检，复检为阳性的样品，应按《全国艾滋病检测技术规范》送HIV确证实验。

6.3.7.3.测试卡应在HIV初筛实验室由经过HIV检测技术培训的人员进行操作使用。

7附录

7.1北京万泰双抗原夹心法试剂盒使用说明书

7.2英可新创双抗原夹心法试剂盒使用说明书

7.3珠海丽珠双抗原夹心法试剂盒使用说明书

7.4人类免疫缺陷病毒（HIV1/2）抗体诊断试剂（乳胶层析法））使用说明书