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这两种调控方式是长期自然选择的结果,也是生物体采用的经济有效的

原则选择的。

原核生物基因组小,基因少而简单,生命繁殖快,多采用负控制的保险机制,即使调节蛋白质失活,酶系统照样合成,只不过有时浪费一点罢了,绝不会使细胞因缺乏该酶系统而造成致命的后果。

另外,采用负控制具有一开俱开,一关俱关的特点,减少不必要的环节;

而真核生物基因组大,基因多且复杂,采用正控制具有更大的优越性,转录因子相互作用缺一不可,可以保证真核生物基因表达调控的严谨性和灵活性以及经济性原则。

4.答:

真核生物的转录因子可以分为两部分'

BindingDomam和ActivatedDomaino

BindingDomain负责结合在DNA上,ActivatedDomam负责激活转录。

二者都是相互独立的区域,但二者单独时都不能有转录活性,必须结合在一起或相互鼎近在一起才有活性。

在研究蛋白质相互作用中,将一种蛋白质的基因连接在BindingDomain上,将另一种蛋白质的基因结合在BindingDomain_h»

蛋白质基因表达后就与转录因子的两个Domain分别结合,两个蛋白质因相互作用而结合在一起,进而使BuidingDomain和ActivatedDomain相互靠近在一起,从而形成具有转录活性的转录因子。

在欲表达的基因区域连上报告基因,通过报告基因的表达与否,就可判断蛋白质之间是否发生了相互作用。

三.详细回答下列问题

DNA结构如下:

GCCAATTATAIleadingATGsignalexonlintronlexon2mtroii2exon3TAGAATAAA

岛boxboxsiteseq.

脱用序列

TGA

huRNA结构如下:

leadmgAUGsignalexoulintion1exoii2mtroii2exou3UAGAAUAAAseq.seq.UAA脱尾序列

UGA

MatureRNA结构如下:

m^GpppleadmgAUGsignalexonlexon2exon3UAGAAUAAApolyA

Capseq.seq.UAA脱尾序列

蛋白质结构如下:

越多的生物,如支原体、大肠杆菌、线虫、果蝇、人的完幣DNA序列得以测定,功能基因组学,蛋白质组学研究正试图揭示这些基因的功能,寻找与生命现象的联系。

生物学研究正将生命现象逐步建立在分子基础之上。

基于坚实的理论基础來描述诸如遗传、发育、免疫、进化等生命现象也因此成为可能。

然而,生物体是一个复杂系统,它不仅仅是基因与蛋白质的集合,系统特性也不能仅仅通过勾画其相互联系而获得完全理解。

生命所具有的性质往往涌现于整体而不是各个分离的部分。

毫无疑义,这要求我们从系统水平來理解生物学系统。

作为生物学研究的新领域,其对生物系统的研究专注于系统水平,而不是细胞或生物体中各个孤立的部分。

目前,各部分之间的相互关系正越來越得到重视。

功能基因组学、蛋白质组学正开始探索基因之间、蛋白质之间、基因与蛋白质之间的相互作用。

细胞层次的研究则开始揭示代谢网络、信号转导网络、基因调控网络的结构与功能。

3・解:

1th

2ed

3rd

校正ROt(l⑵

0.00075

0.006

10.5

K.C

2,000

15,000

26,000,000

niRNA种类

1

7-8

13,000

1thmRNA

(0.275*0.965*109bp*2*0.5)/2000=130,OOOcopies(ovalbumingene)ledmRNA

(0.275*0.965*109bp*2*0.15)/15,000=5,000copies

3rdniRNA

(0.275*0.965*109bp*2*035)/26,000,000=7copies

4:

答:

(1)a,从适应角度來看,这是生物进化的需要;

b,当入噬菌体侵染大肠杆菌后,大肠杆菌中的RNApol就结合到入噬菌体的Pr启动子上,转录表达CRO-P和CII-H,而CROB能ljOR3区域特异高效的亲和,从而关闭了Prm的启动,使建立溶原的CI・P不能表达,使大肠杆菌进入裂解途径;

c.

CII-P能够正调控Pre,使入噬茵体进入溶原状态,而大肠杆菌上具有HFL基因,该基因正常表达的蛋白HFL-P能够降解CII-P,促使入噬菌体选择裂解途径。

(2)将X噬菌体涂布于大肠杆菌的培养皿中,入噬菌体高频侵染大肠杆菌。

使CII-P积累,而CII-P能够正调控强启动子Pre,Pre能够转录表达CI・P,同时转录CRO基因的反义RNA,抑制CRO基因的表达;

CI-P乂能打OR1区域特异髙效的结合,使Pr不能继续转录CRO-P,从而进入溶原。

(3)具有入溶原状态的大肠杆菌中积累有大量的CI-P,当再有入噬菌体侵染时,CI-P会直接结合J-0R1区域,从而阻止了RNApol»

-jPr结合,不能启动CRO-P的表达,使这些入噬菌体不能进入裂解状态,从而体现出大肠杆繭的免疫性。

华中农业大学本科课程考试参考答案

考试课程与试卷类型:

分子生物学B姓名:

学年学期:

2005-2006-2学号:

考试时间:

2006-09-班级:

03级生物工

程专业一、名词解释(每小题3分,如果只翻译名词给1分)

gRNA:

一种引导RNA编辑的小RNA分子,它能决定核苗酸対mRNA的插入或删除。

Promoter:

启动子,与RNA聚合酶结合的DNA区域。

Pseudogcnc:

假基因,与正常基因结构相似、但丧失正常功能的DNA序列,往往存在

于真孩生物的多基W家族中。

Paiacodou:

负密码子,iRNA中决定负載特定aa的空间密码。

iRNA中特定序列与AARS

的(RNA结合位点的特异基团间的分子契合。

Extern:

前体多肽经过剪接后保留在成熟多肽中的肽链。

Trans-actingfactor:

反式作用因子,通过扩散自身表达产物控制其它基因的表达。

PCD:

细胞程序性死亡,在正常生理条件卜・,细胞自身遗传程序控制有关基因的正常表

达,细胞裂解成凋亡小体,逐渐死亡的现彖。

Cis-doniuiance:

Cis-actmgfactor对与其紧密连锁基因的控制效应不受其等位基因的影响。

Genomeirnpnim基W印记,一定的组织和细胞中•某些基W在DNA水平上的表达程

度及表达时受到甲基化修饰•使仅來门双亲中的某一亲本的基因得以表达•

Homcobox:

在调节发育的蛋白编码序列中存在的180bp的保守序列。

二、简答题(共70分,每小题7分)

1.扼要说明原核生物.B核生物启动子的结构和功能。

K核生物

CAP-cAMP结介位点转录调控

克核生物帕子位点

TAIA框

CAAT框增强子

RNA聚合酶进入位点转录准确起始

转录起始起始点选择转录起始频率转录效率

2.举三例RNA的研究成就及其讎动分子生物学发展中的重要意义。

Ribozyme:

拓展了酶的概念、内含子自我剪切、生命起源和分子进化

Antiscnsc-RNA:

基因表达调控、基因工程

RNA1:

基因表达调控.功能基因组学

3•中心法则的提岀对分子生物学研究的理论意义和指导作用;

中心法则体现了遗传信息的唯一性.遗传物质的自决性.信息表达的单程性、序列转

换的共线性,为分子生物学研究提供了一个理论框架,分子生物学是一部从DNA到蛋白质的中心法则的演绎。

中心法则面临的挑战;

反转录酶、内含子、不连续转录-非翻译序列、伴刀豆球蛋白A肽链一级结构的重排.RNA变通性剪切.RNA编辑、以蛋白质为模板的肽链合成、肮病毒的发现•

中心法则的修正

从DNA到RNA到肽链不断有新的遗传信息的加入:

DNA:

.遼排

RNA:

反转录■不连续转录■多种方式剪切、编辑luRNA:

跳跃翻译、折叠

肽链:

氨基酸巫排.蛋白质内含子剪切肮病議复制

4.笛述蔑核生物转录后处理的呃頤分子生協学功能

5’端加W:

①保护5’不被酶解

2有利于inRNA通过细胞核运输

3有一定的识别功能,被核糖体结合。

3’端加polyA尾:

①使mRNA在细胞中更稳定

2方便运输

3与帽子一样可形成特殊的识别位点。

内部甲基化:

形成tRNA等产物。

剪接:

去除内含子•可变剪接扩充模板的编码信息最

RNA编辑:

在niRNA分子水平上对碱基的插入,去失,修改遗传信息。

5・比较DNA复制和RNA转录的异同

不同:

RNA转录时的RNA聚合酶仅有5到3的聚合能力,而DNA聚合酶还有5,到

3、3到5的外切能力。

DNA复制是半保留,RNA转录是全保留.

DNA复制的原料是dNTP,RNA转賊足NTP,相同:

方向都是5到3

都以DNA为模板

都遵从W基互补原则,只是DNAfi制中的A与T配对,RNA中A与U配对。

6・RNAediting的分子生物学意义:

形成或删除AUG(起始密码子)、UAA、UAG、UGA(终止密码子);

改变codon信息:

扩大编码的遗传信息量;

使基因的DNA序列仅是一串简略总义模糊的序列:

中心法则的发展・

g制过程中的错配修复

DNA的损伤修复

基因的回复突变

密码的简并

致死突变

多倍体

Cis-spliciiig与Traiis-spliciiig的比较

Cis-splicmg

Traiis-splicmg

以一条pre-mRNA为底物

以两条不同来源的pre-iuRNA为底物

在splicesome(剪接体)中完成

在splicesomc中完成

组成型剪接选择型剪接

在成熟RNA的前导序列中拼接一个外來的35Nt的剪接前导序列或微小外显子或发生在两pre-inRNA间的选择型剪接

Laiiatintron

Y^intron

原核生物与真核生物转座模式

9,

柑似处:

a.靶位点中的错切序列以DR形式出现在转座因子两侧:

b.转座因子的IR序列是转座酶的识读和作用的位点:

C.转座因子的准确切离将引起靶基因的回S突变。

不同点:

原核生物

真孩生物

a制式

剪贴式

拷贝的复制与转移

拷贝的复制与转移,但多数情况下为先切除后整合

转座与切除是不同弔件

切除、整合、转座为同一那件的不同过程

非准确切离表现缺失、倒位效应

非准确切离主要表现为footprint效应

10・4种基因表达调控类型的区分:

正、负调控:

调节蛋白缺乏时对操纵子的影响

可诱导、阻遏:

操纵子对调节基因表达的小分子所作出反应的特点

有或无Glu调节cAMP-CAP活性的分子生物学机制:

G1U代谢物抑制腺苛环化酶、促进磷酸二酯酶调节细胞中CAMP的水平。

当缺乏G1U时,生物体内ATP环化酶会使ATP变成CAMP.CAMP与CAP蛋白结介,进入操纵元上CAP位点,此时RNA聚合酶才能进入结合位点开始转录。

不缺乏G1U的情况下,无法生成CAMP,也就无法形成复合物,

iW进入结合位点,开始转录。

也不能使RNA聚合

华中农业大学本科课程考试参考答案考试课程与试卷类型:

分子生物学A姓

2005-2006-2学

2006-07-班

程专业

号:

级:

一、名词解释(每小题3分,如果只翻译名词给1分)

Molecularbiology:

广义指在分子水平上阐明生物学现彖:

狹义指在分子水平上研究基因的

结构与功能。

Cis-actiiigfactor:

通过核If酸自身的特异二级结构控制

与其紧密连锁的结构基因的表达•一般不编码蛋白

质产物。

MolecularCliaperone:

帮助其它多肽进行正确折叠的蛋白质,一旦折叠完成后,该蛋白质

将解离出去,

不构成功能多肽的一部分。

Polaritvmutation:

在一个操纵子中・与操纵基因近邻的结构基闵发生终止突变后•它除了影

响该a因自身

产物的翻译外,还影响其后结构基W多肽的翻译,并Hrt有极性梯度的特

征。

RNAediting:

向uiRNA中插入、删除核tf酸的一种转录后加工过程。

是一种RNA对基W表达的干涉现象。

一些小的RNA分子能够引起柑应的mRNA降

解及DNA的

甲基化-导致基因的沉默。

Reguloii:

由一个调节基W的产物调控几个操纵尤基W农达的基W表达调控单尤。

Leadingsequence:

引导序列,转录起始点到翻译起始密码子之间的DNA序列。

Replicon:

从DNA制起始到复制终止的DNA区域。

Openreadingframe:

在DNA片段屮一种潜在的蛋白编码序列,具右起始密码子、终止密码

密码子区域。

二、简答题(共50分)

1.(3分)分子生物学遵循的三大原则:

构成生物大分子的单体是相同的

生物遗传信息的表达的中心法则相同生物大分子之间的互作

(2分)三大支撑学科:

细胞学、遗传学、生物化学

2.DNA作为遗传物质的优点。

(每点各1分,共计5分)

DNA可以携帯的遗传信息量很人,;

DNA2-OH脱氧,使其溶液中比RNA稳定很多,适合作为遗传物质:

DNA双链中AT,CG的碱基互补原则,保证其遗传稳定性:

DNA分子中有T无U便于制:

DNA分子可发生突变,对于物种的进化有总义:

DNA的多种修fi机制也町以保证其遗传稳定性。

3.在肽链终止处常常会出现双重终止密码子:

(2.5分)生命有机体选择UAA作为最有效的终止密码子,与反密码子形成的互补产

物的Tmto最低,

很少被图表现的tRNA无义抑制;

(2.5分)UAG、UGA易被漏读,错读;

4.核昔酸的C值悖论:

(3分)最大C值(单倍体基因组的总DNA含量);

最小C值(•编码基因信息的总DNA含量)。

生物体进化程度与最人C值不成明显正相关:

亲缘关系相近的生物间最大C值

村1差较大;

一种生物内最大C值与最小C值相差极人.

(2分)原因右:

重叠基因、重复基因、间隔基因、跳跃基因、假基因。

5.保证peptide准确翻译的机制有:

(2分购LjtRNA间负我专一性!

AARS对aa的特界识别与结合

在AARS的介导下,tRNA的paracodon对aa的负裁

(1分)Anti-codon对codon的准确识读

(1分)对第一个AUG的准确起译

(1分)成肽前对aa-tRNA-在A位点进行最后的两次校正。

6.

7.

子链DNA延伸方向从5'

端到3’端的原因:

(1分)只有3'

端有游离的OH;

生物在进化中保留的深刻的、选择与适应的、化学及功能的根源;

(2分)如果以3’端到5’端方向延伸,磷酸S团间的强负电性,使dNTP难以聚合到DNA的5'

端,而且双链DNA的5'

端碱基配对怵]难,需婆其它机制解脱:

(2分)碱基发生错配后的校正费时、费能,增加脱磷酸、加磷酸的能量消耗。

原核生物与真核生物基因表达调控机制的相似性有:

共同的起源与共同的分子基

(1分)调控机理上:

核酸分子间的互作:

核酸与蛋白质分子间的互作;

蛋白质分子间的互作

调控层次上:

转录水平、转录后水平、翻译水平、M译后水平

(2分)原核生物多采用负控制:

提供了一个万一保险机制,即万一调节蛋白质失活,酶系统町以照样合成,只不过右时浪费一点,决不会使细胞W为缺乏该酶系统而适成致命的后果。

起初,这种酶系统的表达是组成型的,后來细胞中产生一种干预表达的机制给细胞提供了选择优势,演化成现在的负调控系统。

(2分)真核生物多采用正控制:

灵活性:

真核生物基W组人,某一种顺式因子出现的机率高,可与多种反式因子结合

严谨性:

随机出现套顺式因子和反式因子完全相同组合的机率小

经济合理有效:

真核生物特异基因表达,产生细胞分化。

以基因数量look为例,10%基因表达,在负控制下,需要介成90k的阻遏蛋白:

在正控制下,只需要停止合成90k特异反式因子.

E.CO1I在Tip缺乏时至少会启动哪3种调控机制:

(1分)①町能会启动町诱导的氨基酸负调控,在缺乏氨基酸的情况卞,无活性的阻遏蛋白无法与操纵子结合,冈此可转录用于氨基酸合成酶类。

(2分)©

启动严谨反应,肖细胞内贵白质缺乏时,会调节tRNA*jniRNA合成,从而提高蛋白质合成。

(2分)®

前导序列中的弱化效应消除。

X噬菌体选择溶原、裂解发育途径时采用的基因表达调控方式有:

(至少5点,

9.

每点2分,

共计10分)

正调控:

如CII,CIII蛋白与Pre位点结合开始从右向左转录,生成CI«

负调控:

如CI与Pre位点结合,使转录终止,从而选择溶原途径。

抗终止调控:

如N®

白与终止子结合,使转录继续进行.

反义调控:

在FE位点开始转录,編码出一段勺50蛋白基因相反的mKNA均其结合形成双链,抑制CK)蛋白的产生。

反向调控:

sib位点

口主性的反馈调控:

CI蛋白

HFL(营养耗竭人MOIO10)

三.计算题(共20分)

快fi性组分

中间复性组分

慢a性组分

实际Cot"

(6分)

3.25X2

0.57

283

杂性(bp)(6分)

340

6.0X105

3.0X10®

逼复频率(4分)

500000

350

(2分)基W组动力学复杂长度为3.0X108+45%・6.7X108

(1分)(4・2X106bpX样品DNACog)4-Err?

//DNAColp:

(1分)巫复频率f・化学复杂长度・动力学复杂长度

华中农业大学本科课程考试答案

分子生物学(B)

一、详细解释下列名词;

(每小题2.5分)

hoogsteenbonding:

在形成三螺旋与四螺旋DNA结构时・嗓吟A或G

第6,7位与喘呢3,4位形成的H键连接

homeobox:

不同的转录因子基因内具有相似的与DNAseq.结合的同源区

域。

heteroallele:

非全同等位基因,在同一基因座位(locus)中,不同突变位

点(site)发生突变所形成的等位基因

syucoiifbniiationofnucleoside:

核甘中碱基以糖甘键为轴旋转时的夹角沪0。

土90。

的构相

R-Loop;

whenanRNAstrandhybridizedwithitscomplementarystrandina

DNAduplex,therebydisplacingtheoriginalstrandofDNAmthe

fbnnofaloopextendingovertheregionofhybridizationpaiacodoii:

tRNA分子中为AARS特定氮基酸所识别的若干Nts

epigeuetics:

Theabilityofdifferentstates,whichmayhavedifferent

phenotypeconsequences,tobeuilientedwithoutanychangein

theDNAsequence.

Ultronearly:

认为所有基因原初均有intron,进化中原核生物中的uition

逐渐消失的

PCD:

细胞内由细胞死亡(凋亡)的皋因启动,而导致DNA降解.细胞

形成凋亡小体的程序化过程

retro-transposon:

由RNA,cDNA介导的DNA分子插入基因组的现象,

导致基因组的扩增

二.说明下列现象的分了生物学原理(每小题5分)

1.具有"

绿色革命基因的矮杆小麦对赤霉素(GA)表现不敏感。

GA引起抑制植株生长的DELLA蛋白磷酸化,泛素化,进而被265$白酶体

降解,-绿色革命基网啲矮杆基因即为DELLA,其结构域突变,导致对GA

不敏感。

2.RNA1是基因转录后水半上的抑制。

RNA1是双链RNA分子对靶RNA的同源区结合,进而被剪接为25Nt左右的

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