食用菌多糖抗氧化性的研究Word格式文档下载.docx
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性别
女
学院
化学
03学分
论文题目
食用菌多糖抗氧化性能研究
课题来源
自选
课题类别
论文
选做本课题的原因及条件分析：
人们研究发现食用菌具有抗肿瘤，抗病毒，抗衰老，抗氧化，降血脂，提高机体免疫力，减少各种放疗化疗的毒副作用等生理功能。
而食用菌的这些生理作用与其所含的多糖有密切的关系。
实验采用能够产生羟基自由基Fenton体系和产生超氧阴离子自由基的邻苯三酚自氧化体系，用分光光度计测定食用菌多糖对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用
指导教师意见：
所选论文题目的研究内容，具有较高的应用价值和实际意义。
同意选做该题目。
签名：
2006年11月27日
学院毕业论文（设计）领导小组意见：
（签章）
年月日
B指导教师用表
毕业论文（设计）任务下达书
学院化学专业化学（师范类）学号06姓名孙原原
现将毕业论文（设计）任务下达书发给你。
毕业论文（设计）任务下达书内容如下：
一、毕业论文（设计）题目
食用菌多糖抗氧化性能研究
二、要紧内容
从食用菌子实体中提取粗多糖；
食用菌多糖清除羟自由基能力的研究；
食用菌多糖清除超氧阴离子自由基能力的研究。
三、具体要求
把握分光光度计的原理和操作方式；
能够熟练而准确地进行经常使用分析操作；
能够阅读英文文献。
四、要紧参考文献
一、徐向荣,王文华,李华斌.羟自由基的测定方式[J].中国卫生查验杂志,1997,7（5）:
311～313
二、张宏,谭竹钧.四种邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性方式的比较.内蒙古大学学报（自然科学版）,2002,33（6）:
677～681
五、进程安排
阶段
起止日期
主要内容
第一阶段
查阅相关文献资料，确定实验方法
第二阶段
食用菌多糖清除超氧阴离子自由基试验
第三阶段
食用菌多糖清除羟自由基试验
第四阶段
撰写论文
六、本毕业设计（论文）任务下达书于2006年12月4日发出。
毕业设计（论文）应于2007年1月30日前完成后交指导教师，由指导教师评阅后提交毕业论文（设计）答辩委员会。
七、毕业设计（论文）任务下达书一式两份，一份给学生，一份留学院存档。
指导教师：
签发于2006年12月3日
分管院长（主任）：
签发于200年月日
毕业论文（设计）开题报告
预计完
成时间
11月15日至1月25日
姜华
毕业论文（设计）实施方案：
首先通过查阅文献资料，确定采用热水浸提的方法提取食用菌粗多糖；
然后采用分光光度法利用改进了的Fenton反应体系测定食用菌粗多糖对羟基自由基的清除作用，通过粗多糖对邻苯三酚自氧化过程的影响测定多糖清除超氧阴离子自由基的能力，并与具有抗氧化作用的维生素C对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用作为对比。
论文（设计）主要内容（提纲）：
1、食用菌多糖抗氧化能力的测定方法及多糖抗氧化能力的研究进展。
2、实验部分：
食用菌粗多糖的提取；
食用菌多糖清除羟基自由基能力的测定；
多糖清除超氧阴离子自由基能力的测定。
3、结果与讨论：
不同食用多糖清除羟基自由基能力的比较；
不同食用菌多糖清除超氧阴离子自由基能力的比较。
实验方案设计合理，实验内容全面具体，同意开题。
2006年12月10日
（公章）
年月日
毕业论文（设计）结题报告
论文（设计）题目
本课题完成情况介绍（包括研究过程、实验过程、结果分析、存在的问题及应用情况等。
）
本文以香菇、木耳、裙带菜、真姬菇为原料提取粗多糖，并通过改进了的Fenton反应和邻苯三酚自氧化反应，以维生素C和甘露醇为对照，测定了这几种多糖清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力，对其抗氧化性进行了研究。
实验结果表明，香菇、木耳、裙带菜、真姬菇等粗多糖对羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除作用，其中羟基自由基清除率达50%时香菇粗多糖浓度为199μg/ml，木耳为149μg/ml，裙带菜为263μg/ml。
相同浓度的多糖溶液清除超氧阴离子自由基的能力大小依次是木耳粗多糖、香菇粗多糖、裙带菜粗多糖。
签名：
2007年3月12日
论文（设计）
成绩
毕业论文（设计）答辩成绩评分表
（答辩委员会用表）
学院化学与材料科学学院学号06姓名孙原原
评价内容
具体要求
分值
评分
A
B
C
D
E
报告内容
思路清晰；
语言表达准确，概念清楚，论点正确；
实验方法科学，分析归纳合理；
结构严谨；
论文结果有应用价值。
50
45
40
35
30
创新
对前人工作有改进或突破，或有独特见解。
10
9
8
7
6
答辩
回答问题有理论根据，基本概念清楚，主要问题回答准确、有深度。
27
24
21
18
报告时间
符合要求。
总分
答辩委员会委员（小组）签名：
、、
毕业论文（设计）答辩情形记录表
学院：
化学与材料科学学院答辩日期：
2007年3月日
03级学分
食用菌抗氧化性能的研究
答辩时间
时分至时分
答辩地点
记录人
答辩委员会（小组）出席情况：
主任（组长）签名：
委员（成员）签名：
答辩记录：
（所提出问题及对问题答辩要点）
（能够加页）
毕业论文（设计）成绩评定表
化学与材料科学学院学号：
姓名
论文（设计）总成绩：
指
导
教
师
评
语
评定成绩：
2007年3月16日
阅
人
答
辩
小
组
答辩成绩：
组长签名：
注：
一、论文（设计）总成绩=指导教师评定成绩（50%）+评阅人评定成绩（20%）+答辩成绩（30%）二、将总成绩由百分制转换为五级制，填入本表相应位置。
（化学与材料科学学院，化学教育，03级学分二班，06）
摘要：
本文以香菇、木耳、裙带菜、真姬菇为原料提取粗多糖，并通过改良了的Fenton反映和邻苯三酚自氧化反映，以维生素C和甘露醇为对照，测定了这几种多糖清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力，对其抗氧化性进行了研究。
实验结果说明，香菇、木耳、裙带菜、真姬菇等粗多糖对羟基自由基和超氧阴离子自由基均有必然的清除作用，其中羟基自由基清除率达50%时香菇粗多糖浓度为199μg/ml，木耳为149μg/ml，裙带菜为263μg/ml。
关键词：
食用菌；
多糖；
抗氧化；
自由基
Abstract:
Inthisarticle,thepolysaccharideswasisolatedfromediblefungisuchasmushroom,auriculariaauricula,undariapinnatifida,andsoon.AndthroughimprovedtheFentonresponseandthepyrogallicacidfromtheoxidizingreaction,wehasdeterminedthesekindofpolysaccharideeliminationhydroxylfreeradicalandultraoxygenanionfreeradicalabilitybytakingVitaminCandthemannitolasthecomparison.Theexperimentalresultindicatedthatthepolysaccharidefrommushroom,theauriculariaauricula,theundariapinnatifidahascertainscavengingactiontothehydroxylfreeradicalandtheultraoxygenanionfreescavengingactivitytohydroxylfreeradicalwasrepresentedbythecontentofscavenging50%ofallradicals（Ec50）.TheEc50ofpolysaccharidefrommushroomtohydroxylfreeradicalwas199μg/ml,andauriculariaauriculafor149μg/ml,undariapinnatifidafor263μg/ml.Thesamedensitypolysaccharidesolutioneliminatestheultraoxygenanionfreeradicalabilitysizeisinturntheauriculariaauriculathickpolysaccharide,theshiitakemushroomthickpolysaccharide,theundariapinnatifidathickpolysaccharide.
Keywords:
ediblefungi;
polysaccharide;
antioxidation;
freeradical
1．引言………………………………………………………………………………
1
1．1食用菌多糖的提取、纯化…………………………………………………………
多糖的抗氧化性…………………………………………………………………
3
1.2.1多糖的抗氧化机制
1.2.2清除羟基自由基活性分析方法
4
1.2.3清除超氧阴离子自由基活性分析方法
2实验部分
5
材料与试剂
仪器设备
实验方法
2.3.1粗多糖的制备
2.3.2清除羟基自由基的实验方法
2.3.3清除超氧阴离子自由基的实验方法
3结果与讨论
清除羟基自由基实验研究
清除超氧阴离子自由基实验研究
15
4.结论
16
5.结束语
17
参考文献
致谢
19
1引言
食用菌已经成为人们日常生活中的一种重要的食物，它不仅味道鲜美，而且营养丰硕。
最近几年来，人们对食用菌的研究也愈来愈深切普遍，人们研究发觉食用菌具有抗肿瘤，抗病毒，抗衰老，抗氧化，降血脂，提高机体免疫力，减少各类放疗化疗的毒副作用等生理功能。
食用菌的这些生理作用与其所含的多糖有紧密的关系。
有关文献就曾经报导，发觉食用菌中提取的水溶性多糖能够抑制肿瘤的生长[1]。
多糖是由多个单糖分子以糖苷键结合而成的天然高分子化合物，普遍存在于植物、动物和微生物的组织中，是生命机体的重要组成部份。
多糖在机体内具有特殊的活性和多种生物学功能。
真菌多糖是从真菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出来的，能够操纵细胞割裂分化，调剂细胞生长衰老的一类活性多糖。
真菌多糖在国际上被称为“生物反映调剂剂”简称BRM，作为一种生物非特异性免疫增进剂，具有抗肿瘤，抗病毒，延缓衰老，讲学质，护肝排毒，增进核酸和蛋白质生物合成等多种生物功效[2]。
最近几年来，对多糖的活性研究说明，其中部份多糖对物理化学和生物来源的多种活性氧（ReactiveoxygenspeciesROS）具有清除作用，这其中三个具有代表性的自由基：
超氧阴离子自由基（O2•—），羟基自由基（•OH），脂质过氧化物（LPO）[3，4]，其中超氧阴离子自由基（O2•—）和羟基自由基（•OH）是生物体内两种重要的自由基，地球上的生物大多是需氧生物，在氧分子同意电子还原为水的进程中第一产生O2•—或其质子化产物，若是能在现在期将其淬灭，阻断自由链式反映，无疑具有十分重要的意义。
•OH是体内最活跃的活性氧，可介异许多病理转变[6]。
自由基的产生与机体的许多功能障碍和疾病的发生如吞噬，解毒，炎症，肿瘤，衰老，辐射损伤等有紧密关系，氧化代谢进程中自由基一旦产生，便会呈几何级数增加，直到加入自由基清除剂后才会减少和消失。
以下从食用菌多糖的提取、抗氧化活性及作用机理等方面作了综述。
食用菌多糖的提取纯化[10-15]
食用菌多糖的提取流程一样是固体原料→粉粹→脱脂→溶剂浸提2~3次→浸取液浓缩→醇沉→真空低温干燥→粗多糖制品。
取得的粗多糖一样含有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质。
因此要取得比较精制的多糖还需要进一步的纯化，一样的纯化进程包括去蛋白，除色素，除低聚糖、氨基酸等小分子杂质，最后要取得分子量不同的纯化多糖还要进一步纯化
食用菌多糖的提取常常受提取时刻，温度，PH值，加水量，提取次数，乙醇沉淀浓度等因素的阻碍，从而阻碍多糖提取率的高低。
为解决那个问题咱们在提取进程中可采纳正交实验方式通过排除或减少干扰因素，确信最正确提取方式，提高食用菌多糖的提取率。
多糖的抗氧化性
1.2.1多糖抗氧化作用的机制
近几年来，随着自由基生物学与自由基医学研究的迅速进展，现已证明多种疾病的发生和进展与自由基对组织细胞的损伤关系紧密[16]。
若是自由基的产生和清除失衡，就会对机体造成损伤，致使疾病。
大量研究说明多糖具有抗氧化性，可是关于多糖抗氧化性的机理此刻才方才起步，有些机理还不甚明确，人们以为多糖的抗氧化性机理可能与以下几种情形有关：
（1）多糖分子间接作用与自由大体身。
具体又能够分为两种：
①多糖直接作用于抗氧化酶。
通过提高体内原有抗氧化酶如：
SOD，CAT，GSH2Px等的活性，间接发挥抗氧化作用。
②多糖分子络合产生活性氧所必需的金属离子。
多糖结构中的醇羟基能够与产生•OH
等自由基所必需的金属离子（如Fe2+，Cu2+等）络合，使羟基自由基的产生受到抑制，进而阻碍脂质过氧化的启动，最终抑制活性氧的产生[17]
（2）多糖分子直接作用于自由大体身。
关于脂质过氧化而言，多糖分子能够直接捕捉脂质过氧化链式反映中产生的活性氧，阻断或减缓脂质过氧化的进行；
关于•OH而言，多糖碳氢链上的氢原子能够与其结合成水，达到清除•OH的目的，而多糖的碳原子那么因此成为碳自由基，并进一步氧化形成过氧自由基，最后分解成对机体无害的产物；
关于超氧阴离子自由基而言，多糖可与其发生氧化反映，达到清除的目的[18]。
1.2.2清除羟基自由基活性分析方式
目前国内外对有关•OH的分析测定方式有许多报导，关于•OH的分析一样是通过必然的体系产生•OH，再用一些方式来测定反映产生的•OH，产生•OH的体系有Fe3+—EDTA—抗坏血酸—H2O2体系，Fe2+—EDTA—H2O2体系，抗坏血酸—Cu2+—H2O2体系和黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶—H2O2体系及紫外光照H2O2光解产生•OH等[18~23]。
测定•OH的方式要紧有电子自旋共振法，高效液相色谱法，化学发光法，荧光分析法和分光光度法[33]。
电子自旋共振法和高效液相色谱法测定•OH，尽管灵敏度较高，可是所需仪器昂贵，操作也比较复杂，一样实验室难以应用。
化学发光法操作简便，不需要昂贵的仪器，测定快速。
曾有人[24]用化学发光法测定抗坏血酸—Cu2+—H2O2体系产生的•OH。
荧光分析法灵敏度一样很高而且仪器也较化学发光法普及，徐向荣等[25]采纳Ce3+荧光分析法测定Fenton反映产生的•OH，该法简便有效，测定快速。
与以上方式相较应用最普遍最普及的仍是分光光度法，李平等[26]利用分光光度法检测各类自由基清除剂对Fe2+—EDTA—H2O2体系产生的•OH的清除作用。
其原理是Fenton反映是经典的产生•OH的体系，能够为能模拟人体内产生•OH的进程，该反映是以双氧水为氧化剂，在亚铁盐作用下的氧化反映：
Fe2+
+
H2O2
→Fe3+
•OH
OH—
反映产生的羟基能够氧化番红使其褪色，利用分光光度法检测吸光度转变间接测定所产生的羟自由基。
在加入H2O2前加入羟基自由基清除剂，Fenton反映产生的羟自由基被清除或部份清除，体系在520nm波优势的吸光度降低程度相应减少，采纳固定反映时刻法，在520nm波优势测量被测物反映液的吸光度并与空白液比较，从而测定被测物对•OH的清除作用。
用番红与羟自由基反映的光度测定法，李平等利用分光光度法测定过山茱萸多糖清除羟自由基的能力，可是由于反映体系中H2O2含量太高，使实验结果误差专门大，为此咱们通过实验对该方式进行了改良，确信了最正确反映条件。
1.2.3清除超氧阴离子自由基活性分析方式
关于超氧阴离子自由基（O2•—）分析测定方式与•OH的分析方式相似，一样也是通过产生超氧阴离子自由基（O2•—）的体系产生O2•—，然后再通过各类方式测定O2•—，产生超氧阴离子自由基（O2•—）的体系有黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶—碱性DMSO，甲硫酸非那宗—NADPH[27，28]和邻苯三酚自氧化法[29，30]。
测定•OH的方式一样适用于测定O2•—，另外还有脉冲辐射法、比色法、单扫描极谱法[31]、氧电极法[32]等一些间接测定方式。
由于实验方式需要仪器设备或条件特殊，一样难以知足，因此测定O2•—最经常使用的方式仍是分光光度法。
一样是利用分光光度法检测邻苯三酚自氧化产物从而间接测定反映产生的O2•—，进而研究O2•—清除剂的清除O2•—能力。
其反映原理是：
利用邻苯三酚自氧化反映，测定加入自由基清除剂对产生的O2•—清除作用。
邻苯三酚在弱碱性（Tris-HCl-EDTA缓冲液PH=⒏2）环境中自氧化分解产生O2•—的反映
邻苯三酚O2•—
其他产物
随着反映的进行，O2•—在体系中不断积存，致使反映液在320nm，325nm，440nm波长的吸光度在反映开始一段时刻内随时刻转变而线性增加，通过测定邻苯三酚自氧化系统的吸收光谱，确信自氧化速度最大值及最大吸收波长为325nm[29]，在此条件下，测定加入自由基清除剂反映的吸收光谱确信自氧化速度，各系统的自氧化速度为S，清除率为E。
另外人们模拟人体黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶产生O2•—的原理研制出了抗超氧阴离子自由基试剂盒，应用起来更方便。
2
实验部份
香菇（新鲜市售），东北黑木耳（干，市售），裙带菜（干，市售），真姬菇（市售），真姬菇纯化多糖（ZJ-2），番红为生化试剂，乙醇，丙酮，邻苯三酚，L—抗坏血酸（Vc），双氧水，三羟甲基胺基甲烷，磷酸盐，EDTA-Na-Fe（Ⅱ）等试剂均为国产分析纯。
UV—4802型紫外可见分光光度计，尤尼柯（上海）仪器）；
SK3200H超声波清洗器，上海科导超声仪器；
ZHT型自动恒温电热套，山东鄄城永兴仪器厂；
WC/09-05超级恒温箱；
恒温水浴锅；
FC204电子天平等
实验方式
称取干燥的真姬菇10g粉碎，研磨，置于烧杯中加40倍的蒸馏水，混匀，超声波15min后于90℃恒温水浴锅中搅拌浸提3h，减压抽滤，提取液置于烧杯中，残渣以一样的方式提取，归并两次提取液，浓缩至原先体积的三分之一，将浓缩液加到三倍体积的无水乙醇中醇沉24小时，减压抽滤，沉淀物依次用95%乙醇，丙酮洗涤，60℃烘箱干燥，即取得真姬菇粗多糖。
将新鲜香菇撕碎烘干，称取9g，粉碎，置于烧杯中加入20倍体积的蒸馏水混匀，在80℃恒温水浴锅中搅拌浸取5h，减压抽滤，提取液置于烧杯中，浓缩至原先体积的三分之一，将浓缩液加入三倍体积的无水乙醇醇沉24h，减压抽滤，用无水乙醇洗涤，将沉淀于60℃烘箱中干燥称重，得香菇粗多糖。
称取干木耳10g，粉碎，置于烧杯中加60倍体积的蒸馏水，混匀在80℃水浴锅中搅拌浸取4h，减压抽滤，提取液置于烧杯中，浓缩至原体积的三分之一，将浓缩液加入三倍体积的无水乙醇醇沉24h，减压抽滤，用无水乙醇洗涤，将沉淀于60℃烘箱中干燥称重，得木耳粗多糖。
称取裙带菜10g，粉碎，置于烧杯中加20倍体积的蒸馏水煎煮1h，共煎煮三次，归并滤液，置于烧杯中，提取液置于烧杯中，浓缩至原体积的三分之一，将浓缩液加入三倍体积的无水乙醇醇沉24h，减压抽滤，用无水乙醇洗涤，将沉淀于60℃烘箱中干燥称重，得裙带菜粗多糖。
2.3.2清除羟基自由基（•OH）活性分析方式
Fenton反映是经典的产生•OH的体系，能够为能模拟人体内产生•OH的进程，该反映是以双氧水
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