兽医临床诊疗技术学第九章 血液检验.docx

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兽医临床诊疗技术学第九章血液检验

第九章　血液检验

　　血液由血细胞与血浆组成，血浆除去纤维蛋白原后即为血清。

血液具有输送营养、氧气、抗体、激素和排泄废料以及调节水分、体温、渗透压、酸碱平衡等重要功能。

在心脏舒缩活动和神经体液的调节下，血液不断循环于机体每个部分，与各组织器官发生密切联系。

因此，除了机体造血与血循系统本身患病可以直接引起血液固有成分的变化外，机体其他部分的疾病也可影响血液各种成分。

所以，血液检验不仅是诊断各种血液病的主要依据，而且对其他系统疾病的诊断以及在判断机体状态，观察疗效、预后等方面也有很大帮助。

　　临床血液检验的项目较多，经常要并做且较有意义的是血常规检验（bloodroutineexamination），包括红细胞沉降速度、红细胞压积、血红蛋白含量测定，红细胞计数、白细胞计数及其分类计数等。

在临床实践中可根据诊疗需要，有目的地选择某些项目。

　　对于血检结果，应注意将其与临床症状及其它有关资料联系起来综合分析，同时还应根据病程的发展与变化，进行血液复检，以便作出正确的诊断和预后。

第一节　血样的采集、抗凝与处理

　　一、血样的采集

　　根据检验项目及采血量的多少，可以选用末梢采血或静脉采血。

　　㈠末梢采血

　　适用于采血量少、血液不加抗凝剂并且直接在现场检验的项目。

如血液涂片、血红蛋白测定、血细胞计数等。

采血部位可在耳尖或尾尖，先保定好被检动物，用酒精棉消毒局部，待干燥后用消毒针头刺破该部小静脉，让血液自然流出。

擦去第1滴血（因其混有组织液而会影响计数），吸取第2滴血作检验。

穿剌后，如血流停止，应重新穿剌而不可用力挤压。

体外血液易于凝固，吸血时操作要快速敏捷。

　　㈡静脉采血

　　适用于采血量较多或在现场不便检查的项目。

如血沉测定、红细胞压积测定及全面的血常规检查等。

除制备血清外，静脉血均应置于盛有抗凝剂的容器中，即刻混匀，待混匀后以备检查。

　　采血部位可在四肢的静脉如股内静脉或隐静脉。

先局部剪毛，消毒后用小针头剌入静脉，让血液自然流入含有抗凝剂的容器中，或接上注射器缓慢抽吸。

　　采血时应注意：

　　1.所用的针头、注射器、盛血器皿一定要清洁干燥；若局部用酒精消毒，需待其挥发干后方可进针，以防发生溶血。

　　2.离体血液极易凝固，故采血动作要快捷，勿让血液在注射器内滞留过久。

　　3.将血液注入容器时，应拔去针头、沿容器壁缓慢注入，避免产生气泡。

　　二、血样的抗凝及处理

　　㈠血样的抗凝

　　除需分离血清外，所采的血液均应加入抗凝剂抗凝。

常用的抗凝剂有下列几种。

　　1.草酸盐合剂：

草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，蒸镏水100ml。

取此液0.5ml分装于小瓶中，在60℃以下的烘箱中烘干,可令5ml血液不致凝固。

由于草酸钾会使红细胞皱缩，草酸铵则使红细胞膨胀，二者按比例混合，可使红细胞大小不致改变，适用于血液检验尤其是PCV测定。

但因其具有一定毒性并可使血小板聚集，故不宜作输血及血小板计数。

　　2.乙二胺四乙酸二钠（简称EDTA二钠）：

常用其10％水溶液，按每5ml血液加入1～2滴使用，亦可将其水溶液2滴置于小瓶中，在60℃以下烘干备用。

此剂抗凝作用强，能保持血细胞的形态，可防止血小板聚集，最适于血液细胞形态的检验。

但输血时不能用。

　　3.柠檬酸钠：

常配成3.8％的溶液，每0.5ml可抗凝5ml血液，主要用于输血和血沉测定。

不适用于血液化学检验。

　　4.肝素：

配成1％的水溶液置冰箱内保存，用0.1ml可抗凝5ml血液，用此液湿润注射器筒，可抗凝5ml血液。

此剂抗凝作用强，适于血液有机和无机成分的分析，但抗凝时间短，其抗凝血作白细胞分类计数时，血细胞着色欠佳。

　　㈡血样的处理

　　血涂片一般应先作固定。

若要分离血浆，可把抗凝血以2000～3000转／分（r／min）离心5～10min，或在室温下静置沉淀，上层液体即为血浆；需分离血清时，将装有非抗凝血的试管或离心管放室温2h或30℃水浴0.5h，促使血清析出，再经离心后，尽快将血清分离转移至另外的容器中，以减少细胞内、外成分的变动。

　　血样最好立即进行检查，否则，必须密封后置冰箱中保存。

第二节　血常规检查

　　一、红细胞沉降速度测定

　　将抗凝血吸入特制的测定管中，观察在一定时间内红细胞下沉的毫米数，称为红细胞沉降速度（erythrocytesedimentationrate，ESR），简称血沉。

　　㈠原理

　　抗凝血中的红细胞沉降速度的快慢，是一个复杂的物理化学和胶体化学过程，其原理至今尚未完全阐明。

一般认为，与血中电荷的含量有关。

红细胞表面与血浆白蛋白带负电荷，而血浆球蛋白、纤维蛋白原和胆固醇却带正电荷，在正常时保持着正、负电荷相对的稳定性，红细胞不易形成串钱状，其沉降速度在一定范围内。

在疾病过程中，上述任何一方的数目或含量发生改变，会直接影响正负电荷相对的稳定性。

假如正电荷增多，则负电荷相对减少，红细胞互相吸附、彼此粘合重叠，容易形成串钱状而使血沉加快；反之，红细胞互相排斥，则血沉变慢。

　　另认为与红细胞的下沉力和血浆的阻逆力之间是否保持一定的平衡状态有关。

　　㈡测定方法

　　测定血沉的方法很多，在此介绍魏氏法（Westergren）。

魏氏血沉管全长为30cm，内径2.5mm，管壁有200个刻度,每一刻度距离为1mm，自上而下标有0～200，其容量为1ml，附有特制的血沉架。

操作时，先取3.8％柠檬酸钠溶液0.5ml，加入小试管内，然后静脉采血2ml，混匀。

用魏氏管吸此抗凝血至“0”刻度处，在室温下将血沉管垂直放于血沉架上，经15、30、45、60min各观察一次，分别记录管中红细胞柱高的刻度数值，即为各段时间的血沉值。

　　㈢注意事项

　　1.血沉管必须垂直静立，否则会使血沉加快。

　　2.温度可影响血沉速度：

温度越高，血沉越快，反之可使其减慢。

故血沉测定以室温20℃左右为宜。

冷藏的血液，应先将血温回升至室温后才测。

　　3.采血后应在3h内测完，如放置时间延长，可导致血沉减慢。

　　4.血液柱面上不应带有气泡，否则会使血沉变慢。

　　5.加入的抗凝剂要适量，加入过量会使血中盐分过多，血沉变慢。

　　㈣参考值（单位：

mm／h）

　　　马：

51.0～63.0；黄、奶牛：

0.7～1.7；猪：

2.5～8.1；犬：

0.1～4.7；猫：

0.8～5.2。

　　㈤临床意义

　　血沉测定是一项非特异性试验，仅能说明体内存在病理过程，并不能单独据此来确诊疾病。

如前所述，影响血沉的因素，主要是红细胞数和血浆蛋白质的含量与组成，因此，其临床意义主要涉及以下方面。

　　1.血沉加快：

常见于各种贫血及白血病（由于红细胞数减少）；亦见于急性全身性感染、各种炎症、组织损伤及坏死（由于血浆球蛋白或纤维蛋白原相对或绝对增多）；恶性肿瘤（由于上述二方面的原因）。

　　2.血沉减慢：

主要见于各种原因所致的脱水而血液浓缩时，以及某些引起纤维蛋白原含量严重减少的肝脏疾患。

　　二、血红蛋白含量测定

　　血红蛋白（hemoglobin，简称Hb）测定方法不少，最常用的是沙利（Sahli）氏目视比色法，虽然精度稍差，但方法简便快速，兽医临床仍广泛应用。

　　㈠原理

　　红细胞遇酸溶解，释出Hb，并被酸化成褐色的酸性血红素；稀释后与标准色柱比色，即可测定每100ml血液中Hb的克数或百分数。

　　㈡器械和试剂

　　1.器械：

沙利氏Hb计一套（内有测定管1支，装有标准褐色玻璃比色板的比色座1个，刻有10mm3和20mm3容积的吸血管1支），在测定管上有两种刻度，从下往上，一侧有2～24的刻度，另一侧有20～160的刻度，分别表示100ml血液中所含Hb克数和百分数。

国产的Hb计是以每100ml血液含14.5gHb为100％而设制。

　　2.试剂:

0.1mol/L盐酸（亦可用1％盐酸代替）。

　　㈢方法

　　于测定管内加入0.1mol/L盐酸至刻度“2”处。

　　用吸血管吸抗凝血至刻度20mm3处，擦净管外壁的血迹，将血液吹入测定管的盐酸液中，再吸取上清的盐酸液至刻度处反复洗涤数次，轻轻摇动测定管（或用玻璃搅拌），使血液与盐酸混合，静置10min。

　　慢慢沿测定管壁逐滴加入蒸馏水（或0.1mol/L盐酸），边加边混匀，直至液体颜色与标准色柱一致时为止。

读取测定管内液体凹面的刻度数即为结果。

　　㈣注意事项

　　要注意保持Hb计原套用具，切莫随意掉换；抗凝血要摇匀，吸血要准确；测定管内不可有气泡，万一产生了气泡，可用小玻棒沾少量95％酒精轻触气泡，即可消除。

静置时间以10min为准，否则结果可能偏高或偏低。

　　㈤参考值（单位：

g／L）

　　　马：

128±20；黄牛100±10；奶牛：

129±23；猪：

116±10；犬：

120～180；猫：

85～144。

　　㈥临床意义

　　与红细胞计数（见后）的意义相一致。

　　〔附〕　氰化高铁Hb测定法

　　1.原理：

Hb被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白（Hi），再与氰结合成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（Hi－CN），在规定的波长和液层厚度的条件下，具有一定的吸光系数。

因此，根据其吸光度即可求得Hb浓度。

　　2.仪器：

分光光度计；微量吸管

　　3.试剂：

Hb转化液:

氰化钾0.05g，高铁氰化钾0.20g，无水磷酸二氢钾0.15g，表面活化剂（聚二乙醇辛基苯基醚）0.5～1.0ml，蒸馏水加至1000ml。

　　4.操作：

取末梢血或抗凝血20μl，加到5.0mlHb转化液中，混匀并静置5min；用分光光度计比色，波长540nm，光径1cm，以空白转化液调零，测定光密度（OD）值。

　　5.计算：

Hb＝（OD／44）×（64458／1000）×251

＝OD×367.7（g／l）

　　式中251为血液稀释倍数；44为1mmolHiCN的消光系数；64458为Hb分子量。

　　三、红细胞计数

　　计算单位容积（μl或L）血液内所含红细胞数目，称为红细胞计数（redbloodcellcount，简称RBC）。

其计数方法有显微镜计数法、光电比浊法、自动计数仪计数法等，目前临床多采用在试管内稀释血液后的显微镜计数法。

　　㈠原理

　　用适当的稀释液将血液作200倍稀释，滴入计算室后，在显微镜下计数，经过换算即可求得每μl（或L）血液内的红细胞数。

经稀释液作用虽仍保留白细胞，但对红细胞计数影响不大，因为一般情况下红细胞与白细胞之比约为1000:

1。

　　㈡器械和稀释液

　　1.器械：

包括以下几种。

　　⑴血细胞计中的计数板　常用的是改良牛氏（Neubauer）计数板，它是由一块特制的厚玻璃板制成。

中央刻有两个相同的计算室,每个计算室划分为9个大方格，每个大方格的面积为1mm2。

四角的每个大方格又划分为16个中方格，供计数白细胞用；中间的一个大方格用双线划分为25个中方格，每个中方格又再划分为16个小方格,共计400个小方格供计数红细胞用。

如将盖片置于计算室两侧的凹面（或支柱）上，盖片与计算室之间的深度为0.1mm，故每个大方格的容积为0.1mm3。

（见图1、图2）。

　　⑵血细胞计中的红细胞吸管。

　　⑶血盖片　为血细胞计数专用玻片，厚度0.4mm，平整且质地较硬。

　　⑷沙利氏吸血管、2ml刻度吸管、小试管、显微镜。

　　2.稀释液：

主要有以下两种。

　　⑴0.85％氯化钠溶液（即生理盐水）。

　　⑵郝姆（Hayem）氏液　由氯化钠1.0g，结晶硫酸钠5.0g，氯化高汞0.5g，蒸馏水加至200ml，溶解后过滤备用。

　　㈢方法

　　1.试管稀释法：

用2ml刻度吸管吸取红细胞稀释液2ml，置于小试管中。

　　用沙利氏吸血管吸血10μl，擦去管外余血，轻轻吹入试管内稀释液底部,再吸上清液冲洗吸管3次，摇匀。

　　先把血盖片覆盖于计算室上，后用小玻棒沾取已混匀的红细胞悬液一滴