恶性肿瘤背景整理Word格式.docx

恶性肿瘤背景整理Word格式.docx

《恶性肿瘤背景整理Word格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《恶性肿瘤背景整理Word格式.docx（12页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

【A.Thisstudywillbeabletopnnndcthepotentialimmunologicparametersf（）rdifferentiatingMAfromabdominaleffusionswiththeotheretiologies,andtoidentifytargetingmoleculesfortrearingpatientswithadvance：

malignancies・

研究背景和意义

多种恶性肿瘤，如肝癌、卵巢癌、胃癌等进展至晚期时，肿瘤细胞侵袭和转移到腹腔可致使恶性胸腔枳液，即恶性腹水。

发生恶性腹水的想者预后较差，平均生存期约20周。

恶性腹水中除含有肿瘤细胞外，还有大量的免疫细胞如淋巴细胞（主如果CD4+淋巴细胞）、巨噬细胞、粒细胞等。

以CD4+为代表T细胞亚群能抑制T细胞对外源和自体抗原的反映，在维持对自身成份免疫耐受的同时也可能阻止机体对自体同源肿瘤的免疫。

这些细胞通过分泌多种可溶性炎症和免疫因子，参与肿瘤的生长、转移、扩散等进程。

与肝硬化腹水相较，恶性腹水中的CD3+、CD4+、CD8+水平和CD4+/CD8毗值均较高［］,与结核性行腹水相较，恶性腹水中Th细胞水平、Th/Ts细胞比值明显下降［］。

在卵巢癌患者中的研究发觉，在肿瘤晚期阶段，体内的CD4+CD25+Trcg细胞主要积聚于肿瘤部位和腹水中，很少停留于肿瘤引流淋巴结［］。

同时，与外周血相较，腹水中IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、TNF-a和VEGF明显升高，而IL-2、IL-5、IL-7和IL-17水平显著降低，CD47CD8*比值升髙提示预后不良，而降低IL-2表达和提高IL-6和IL-10有助于Th2抑制机体免疫反映［］。

大量的免疫细胞，如NK纽I胞、CTL和CD4+CD25+调节T细胞有选择性的被召募到腹腔［,］。

迄今为I匕人们对恶性腹水形成进程中炎症和免疫学机制知之甚少，譬如说炎症反映中所涉及的细胞及其调节因子，和局部的免疫活性细胞是不是参与炎症进程等等都有待研究。

Th细胞是的取得性免疫系统的重要组成部份。

其中Th九、Thl7和Th22细胞为最近几年才被发觉和确认的新的CD4+细胞，每种细胞在特定转录调控下产生特定的效应细胞因子。

如Th17细胞产生的效应细胞因子IL-17、IL-21和IL-22。

Th22细胞表达CCR六、CCR4和CCR10,产生IL-22和IL-130IL-6和TNF-a能够诱导初始CIMT细胞向Th22细胞分化。

TGF-P抑制Th22的分化，加入IL-1P后,诱导同时产生IL-17和IL-22的Thl7细胞［］。

研究已发觉,Th17和Th22细胞因为能够调肖抗肿瘤免疫反映从而参与在人类恶性肿瘤的发生和进展［,］。

咱们前期在肝硬化想者和大鼠模型的研究也表明了Th17^11Th22细胞在肝硬化患者和大鼠的表达髙于正常患者或老鼠外周血的表达，咱们进一步在肝癌患者的研究表明，肝癌患者外周血的Thl7和Th22细胞表达水平也高于正常人外周血水平。

上述前期研究提示Th17和Th22细胞有可能参与了肝纤维化、肝硬化和肝癌的发生和进展，这为进一步阐释上述两种免疫细胞的作用提供新的临床和实验依抵o（加入肝硬化、肝癌和正常人外周血Thl7和Th22细胞的结果）

Th9细胞亚群是T细胞谱系中的新成员，与Th17和T1122细胞不同，Th9细胞由IL-4和TGF-B—路诱导，既不参与Th2型细胞反映，亦不具有免疫下调功能，而且专一地产生两种有着相反免疫效应的细胞因子，即IL-9和IL-10［］o现有的研究指出，Th9细胞能够激发炎症反映［］，参与变应性疾病［］和自身免疫性疾病［］等疾病的发生机制。

IL-9既是T细胞生长因子，又可直接作用于B细胞，在Ig介成的调控中发挥重要的作用。

IL-9通过英受体启动JAK/STAT信号转导通路诱导细胞的活化。

体外IL-9表达失调会使JAK/STAT通路活化从而致使某些自主细胞增殖和淋巴细胞恶性转化［］。

目前有关Th9/IL-9与肿瘤关系的资料十分有限。

一项在小鼠肺黑色素瘤模型的研究发觉，IL-9缺乏可致使肿瘤生长，采用IL-9处置后可产生明显抗肿瘤反映。

Th9细胞还能够通过Ccl20/Ccr6依赖的方式召募树突细胞到肿瘤组织，从而发挥强烈的CD8+CTL抗肿瘤反映［］。

最近的在肺癌胸水的研究表明，Th9细胞的表达水平高于外周血。

通过激活STAT3信号，IL-9能够显著增进肺癌细胞的增生和迁移，还能增进癌细胞与胸腔间皮细胞粘合［］。

Th九、Thl7和Th22细胞均存在可塑性，在必然条件下可彼此影响和彼此转化［J从而使机体的各类免疫应答处于精细的平衡状态。

Th9细胞分泌的IL-9能增进Th17细胞数量的增加，在TGF-B存在的条件下，IL-9能使幼稚CIMT细胞分化成Thl7细胞，Th17分泌的IL-23对IL-9起着负调i'

j的作用［］。

咱们前期的预实验表明，肝癌腹水患者中的Th17和Th22细胞显著高于外周血水平，（放入Th17和Th22的流式图片）提示恶性腹水微环境中存在某些细胞因子，可刺激腹水中Th17和Th22细胞的产生和分化，和腹腔局部产生的趋化因子动员外周血Thl7和Th22细胞浸润到腹腔。

另外，研究已发觉，Th9细胞所产生的IL-9能够增强Treg的免疫学抑制活性并诱导Th17细胞的分化［］,而且IL-9还能通过趋化因子CCL20介导的信号通路增进Th17细胞浸润到炎症部位［］。

基于上述这些发觉，咱们以为有必要阐明Th9细胞及其免疫微环境（尤其是Th9与Th17及Th22细胞之间的彼此影响）在恶性腹水发生机制中的确切作用。

在本研究前期预备工作中，咱们探索了Th9细胞在肝癌腹水患者的表达情形和与其他一些免疫细胞和细胞因子的关系。

结果发觉，与Th17和Th22细胞相似，Th9细胞在肝癌腹水中的表达高于外周血的表达，而且在癌性腹水的表达比单纯肝硬化腹水和正常人的表达高（放入图片）。

咱们进一步研究了Th9细胞在新鲜肝癌组织的表达情形，发觉其表达显著高于外周血和腹水的表达水平。

（放入图片）提示恶性腹水和肿瘤组织微环境中存在增进Th9细胞分化或从外周血趋化进入腹腔的因子。

在Th9细胞与一些免疫因子的相关性研究中，咱们前期研究结果还表明，（补充预实验结果，放入白介素的结果）。

但是，迄今为止国内外尚无任何关于腹水中的Th9细胞免疫学特征的研究报告，而且恶性腹水中的Th9细胞与肿瘤免疫微环境中的其他免疫细胞之间的彼此作用及英对恶性腹水发生、进展和转归的影响机制等诸多相关问题均有待研究证明。

本项目将在以前工作的基础上揭壺恶性腹水环境中Th9细胞的表型、功能特征，并阐明Th9细胞与其他免疫细胞之间的彼此作用及其作用机制，揭銅Th9细胞对恶性腹水转归的影响。

本项目的完成一方而能够加深人们对Th9纽【胞免疫学特征的熟悉，深切了解恶性肿瘤微环境中炎症对免疫应答反映的影响。

另一方而也有助于揭露恶性腹水的发生机制，既为临床上挑选出更高效的恶性腹水诊断标记物和探索更有效的恶性腹水干与办法奠左理论基础。

参考文献

[1|HaoC.ShiYYuJ.WeiX.LiS.Tong乙ThetherapeuticfunctionofthechemokineRANTESontheH22hepatomaascitesmodel.MolCellBiochem.2012;

367:

93-102.

[2]莫扬，许小东.流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用.国际査验医学杂志.2010;

32:

50-2.

[3]CurielTJ.CoukosGZouL.AlvarezX,ChengP,MottramP,etal.SpecificrecruitmentofregulatoryTcellsinovariancarcinomafostersimmuneprivilegeandpredictsreducedsurvival.NatMed.2004:

10:

942-9.

[4]GiuntoliRL,2nd,WebbTJ,ZosoA,RogersO.Diaz-MontesTRBristowRE.etal.Ovariancancer-associatedascitesdemonstratesalteredimmuneenvironment:

implicationsforantitumorimmunity.AnticancerRes.2009:

29:

2875-84.

[5]BamiasA.TsiatasML,KafantariE,LiakouC、RodolakisA,VbulgarisZ,etal.Significantdifferencesoflymphocytesisolatedfromascitesofpatientswithovariancancercomparedtobloodandtumorlymphocytes・AssociationofCD3+CD56+cellswithplatinumresistance・GynecolOncol.2007;

106:

75-81.

[6jDuhenT、GeigerR.JarrossayD.LanzavecchiaA.SallustoF.Productionofinterleukin22butnotinterleukin17byasubsetofhumanskin-homingmemoryTcells・NatImmunol.2009;

857-63・

|7JLiuT,PengL,YuP,ZhaoY.ShiY,MaoX,etal.IncreasedCirculatingTh22andTh17CellsareAssociatedwithTumorProgressionandPatientSurvivalinHumanGastricCancer.JClinImmunol.2012;

1332-9・

[8|ZhuangY.PengLS,ZhaoYL.ShiY.MaoXH,GuoG,etal.IncreasedintratumoralIL-22-producingCD4（+）TcellsandTh22cellscorrelatewithgastriccancerprogressionandpredictpoorpatientsurvival.CancerImmunolImmunother.2012:

61:

1965・75.

[9]VeldhoenM.UyttenhoveC,vanSnickJ.HelmbyH,WestendorfA,BuerJ,etal.Transforminggrowthfactor-betaYeprograms*thedifferentiationofThelper2cellsandpromotesaninterleukin9-producingsubset.NatImmunol.2008:

9:

1341・6・

[10]DardalhonV,AwasthiA,KwonH.GalileosGGaoW.SobelRA.etal.IL-4inhibitsTGF-beta-inducedFoxp3+Tcellsand.togetherwithTGF-beta,generatesIL-9+IL-10+Foxp3（-）effectorTcells.NatImmunol.2008;

1347-55.

[11]ChangHC,SehraS,GoswamiR,YaoW.YuQ.StriteskyGL.etal.ThetranscriptionfactorisrequiredforthedevelopmentofIL-9-producingTcellsandallergicinflammation.NatImmunol.2010:

11:

527-34.

[12]JagerA.DardalhonV,SobelRA,BettelliE,KuchrooVK.ThLTh17,andTh9effectorcellsinduceexperimentalautoimmuneencephalomyelitiswithdifferentpathologicalphenotypes.JImmunol.2009;

183:

7169-77.

[13]AdamsonAS,CollinsK,LaurenceA,O'

SheaJJ.TheCurrentSTATusoflymphocytesignaling:

newrolesforoldplayers.CurrOpinImmunol.2009:

21:

161-6・

[14]LuY,HongS,LiH,ParkJ9HongB,WangL.etal.Th9cellspromoteantitumorimmuneresponsesinvivo.JClinInvest.2012:

122:

4160-71・

[15]YeZJ,ZhouQ,YinW,YuanML,YangWB,XiongX乙etal.DifferentiationandimmuneregulationofIL-9-producingCD4+Tcellsinmalignantpleuraleffusion.AmJRespirCritCareMed.2012;

186:

1168-79.

[16]PerumalNB.KaplanMH.Regulating119transcriptioninThelpercells.TrendsImmunol.2011;

146-50.

[17]NowakEC,WeaverCT,TurnerH.Begum-HaqueS.BecherB,SchreinerB,etal.IL-9asamediatorofThl7-driveninflammatorydisease.JExpMed.2009;

206:

1653-60.

[18]WuB,HuangC,Kato-MaedaM,HopewellPC,DaleyCL,KrenskyAM.etal.IL-9isassociatedwithanimpairedThlimmuneresponseinpatientswithtuberculosis.ClinImmunol.2008:

126:

202・10.

[19]ElyamanW.BradshawEM.UyttenhoveC,DardalhonV.AwasthiA,ImitolaJ.etal.IL-9inducesdifferentiationofTH17cellsandenhancesfunctionofFoxP3+naturalregulatorTcells・ProcNatlAcadSciUSA.2009;

12885-90.

[20]ZhouY,SonobeY.AkahoriT,JinS,KavvanokuchiJ,NodaM,etal.IL-9promotesThl7cellmigrationintothecentralnervoussystemviaCCchemokineligand-20producedbyastrocytes・JImmunol.2011:

4415-21.

项目的研究内容.研究目标.和拟解决的关键科学问题（此部份

为重点论述内容）

（1）.研究内容

1为了阐明恶性腹水环境中Th9细胞的表型和功能特征，搜集肝癌患者恶

性腹水和外周血标本分离淋巴细胞，应用流式细胞仪分析Th9细胞的表型特征和胞内细胞因子的表达水平，同时分析Th9细胞与Th17细胞及Th22数量之间的相关关系。

2肯定恶性腹水中是不是存在作为Th9细胞发生、分化和扩增所需要的各类细胞因子，如TGF-队IL-4、IL-6、IL-10、IL-21、IL-25、TNF-a、IFN-丫等；

揭露合成和释放上述细胞因子的细胞来源，和影响这些细胞产生细胞因子的调节机制；

在体外实验中揭露相关细胞因子对Th9细胞发生、分化和增殖的确切影响。

3肯定恶性腹水中是不是存在能召募外周血Th9的趋化因子，如CCL20和CCL22等；

揭露合成和释放上述趋化因子的细胞来源及其调节机制；

在体外实验中揭露恶性腹水对Th22细胞的趋化活性，和此种趋化作用是不是经由CCL22/CCR4、CCL20/CCR6和CCL27/CCR10趋化轴介导。

4应用流式细胞仪检测IL-9R、IL-17R.IL-4R等细胞因子受体、黏附分子及其相应的配体（如ICAM-1/LFA-1.VCAM-1/integrin-pl等）、和协同刺激分子及相应配体（如PD-1、PD丄1、PD-L2、CD80、CD86.CD28、CTLA-4、GITRL和ICOSL）等在各类腹腔细胞的表达。

以重组人IL-9、IL-17或IL-4,或加有抗IL-9、抗IL-17、或抗IL-4单抗的恶性腹水刺激肝癌细胞，观察STAT分子家族的磷酸化、SOCS分子家族的表达等，以揭銘恶性腹水中Th9、Th17和Th22细胞对肿瘤细胞的增殖、凋亡的影响及其信号转导的分子机制。

⑤为了揭露Th9、Thl7和Th22对肿瘤生长、浸润、转移、转归等影响及其机制，应用C57BL/6N小鼠构建恶性腹水模型，以荧光报告蛋白GFP标记和活体荧光成像技术，动态观察恶性腹水发生进展，并探讨恶性腹水模型中的腹水、外周血、脾脏、引流淋巴结屮Th9、Thl7和Th2对肿瘤生物学的影响及其机制。

（2）•研究目标

1以肝癌归并恶性腹水为模型阐明人类恶性肿瘤环中的Th9细胞的表型特征和产生何种可溶性介质。

在此基础上阐明Th9细胞发生、分化和增殖的进程和机制,和外周血Th9细胞浸润至腹膜腔的机制。

2阐明Th9细胞对恶性肿瘤细胞的增殖、凋仁迁移、黏附、浸润和转移进程的影响及其机制。

3应用C57BL/6N小鼠对恶性腹水的发生进展进行动态观察，阐明Th9细胞对恶性腹水发生、进展、预后转归的影响及其机制。

4在整个项目的研究进程中挑选出辨别诊断恶性腹水的靠得住指标；

同时挑选出恶性腹水新的生物医治靶点，为干与晚期癌症的靶向医治奠定理论基础。

（3）.拟解决的关键科学问题

1揭露Th9细胞在恶性腹水中发生、分化和增殖的条件和调节机制，揭露Th9细胞对恶性腹水发生、进展和预后转归的影响及其机制。

2通过对Th9细胞在对恶性肿瘤细胞增殖、凋仁浸润、黏附、转移的影响，及其对T细胞亚群之间的彼此调节作用等所涉及的信号通路研究中找出对于恶性腹水具有辨别诊断价值的免疫学指标。

3通过上述对Th9细胞对于恶性腹水中的恶性肿瘤细胞增姑、凋亡、迁移浸润和黏附、转移、转归影响及其机制，为医治晚期恶性肿瘤提出重要的靶标分子

1.拟采取的研究方案及可行性分析（包括有关方式、技术线路、实

验手腕、关