EMA系列5欧盟药品质量管理局HPLC仪器确认指南中英文Word文档下载推荐.docx
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HPLCSOLVENTDELIVERYSYSTEM高压液相溶剂传输系统
ThefollowingtestsareproposedfortheperiodicandmotivatedcheckoftheHPLCsolventdeliverysystem:
flowrateandgradienttest.
以下测试作为HPLC溶剂传输系统周期性主动检查：
流速和梯度检查
FLOWRATE
流速
Materials:
材料
Volumetricflaskof5or10ml
5ml或10ml的容量瓶
Calibratedchronometer
校正过的气压计
Settings:
设置
Mobilephase:
degassedwater
流动相：
脱过气的水
Nocolumn（openend）*
无柱（开放式）*
Flowrate:
adjustedbetween0.5and3.0ml/min
流速：
调节在0.5到3.0ml/min
Ifhigh-pressuremixingsystemsareinstalled,thistesthastobedoneoneachsolventchannel.
如果有安装高压混合系统，本测试应在每一溶剂通道进行。
*Forcertainequipment,e.g.inthecaseoflowflowrates,thecheckwouldbeperformedbyusingacolumnorabackpressureregulator.
*对于一定的仪器，例如，流速较低时，采用一根柱子或背压调整器进行检查
Method方法:
Settheflowrateatanappropriatelevelandmeasurethetimeneededtofillthevolumetricflaskuptothemark.Recordthetimeneeded.
将流速设定在一个合适的水平，测量将容量瓶装满至刻度的时间。
记录所用的时间。
f＝V/tf＝（V×
60）/t
f.................measuredflowrate[ml/min]
测量的流速
t.................elapsedtimetofilluptomark[s]
充满至刻度所花的时间
V...............volumeofthevolumetricflask[ml]
容量瓶的体积
D＝100×
（f－F）/F
D...............deviation[%]
偏差
F...............adjustedflowrate[ml/min]调节后的流速
Limit限度s:
±
5%
GRADIENTCOMPOSITIONANDRIPPLE梯度组成和波动
设置
Stainlesssteelcapillarye.g.2000x0.12mminstalledinsteadofacolumn
不锈钢毛细管，例如2000X0.12mm，代替色谱柱安装于仪器
Detection:
UV-Detectoradjustedto265nm
检测器：
紫外检测器调节至265nm
MobilephaseA:
流动相A：
脱气水
MobilephaseB:
degassedwatercontaining0.5%acetone
流动相B：
含0.5%的脱气水
1.0ml/min
1.0ml/分钟
Thetestiscarriedoutinthefollowingwaybyusingagradientprogramdependingonthenumberofsolventchannelsandtheconfigurationofthesystem:
按下列方法进行测试，根据通道数量不同使用下列不同系统参数和梯度进行洗脱
A-B
A-BandA-C
A-C,A-BandB-D
Startthetestbypumpingwaterforatleast10mintoequilibratethesystem.
开始测试前，先用水平衡系统至少10分钟。
Thezero%valueatthestartofthetestisthebaseline.Allstepsaremeasuredatthebeginningofthehorizontalpartofthelineeitherbysoftwareormanuallyonthepaperprintusingaliner.Theheightofthe100%water/acetonemixtureisusedasthe100%valueinthefollowingcalculation.
开始时的0%值是基线值。
所有步骤均在开始时测量基线的水平部分，由软件或手动在纸上用衬垫打印。
100%水/丙酮混合物的高度在以下计算中作为100%值。
%H＝100*h/H
%H............calculatedcomposition
计算组成
h................heightofthemeasuredline
测量线的高度
H...............heightofthe100%water/acetonemixtureline（mobilephaseB）
100%水/丙酮混合物线的高度（流动相B）
d＝%H－G
d................deviation
G...............gradientcompositionadjusted[%acetone/watersolutionmixture=mobilephaseB]
梯度组成调节【%丙酮/水溶液混合物=流动相B】
Absolutedeviation:
2oftheadjustedvalue
绝对偏差：
调整值的±
2
Therippleofthegradientcompositionisthepercentageofnoiseofthe50%linefromthegradientprogram.
梯度组分的波动为梯度程序噪声基线的50%
%R＝100*N/h50
%R............ripple
波纹
h50.............heightofthe50%line
50%的线高度
N...............heightofthenoiseline,measuredduring1minuteinthelinearregion
噪声线高度，在线性区域1分钟测量的结果
≤0.2%
HPLCINJECTOR进样器
Volumeprecisionandcarry-overarethetestsproposedfortheperiodicandmotivatedcheckoftheHPLCinjector.
建议在HPLC进样器周期性主动检查中进行体积精密度和残留检查
VOLUMEPRECISIONANDCARRY-OVER
体积精密度和残留
Solutions:
溶液
SolventA:
methanol:
waterR,60:
40.
溶液A：
乙醇：
水（试剂）=60：
40
Referencesolution（a）:
dissolve15.0mgmethyl-,ethyl-,andpropylparabenein100.0mlofsolventA.
对照液（a）：
取15.0mg乙基、甲基和尼泊金丙酯溶于100.0ml溶剂A中
Referencesolution（b）:
Dilute1.0mlofreferencesolution（a）to10.0mlofsolventA.
对照液（b）：
取1.0ml对照液（a）用溶于10.0ml溶剂A中
Referencesolution（c）:
Dilute1.0mlofreferencesolution（b）to100.0mlofsolventA.
对照液（c）：
取1.0ml对照液（b）用溶于100.0ml溶剂A中
Column:
Lichrospher100RP8,5um,125x4mm,withoutprecolumn
色谱柱：
Lichrospher100RP8,5um,125x4mm,无衬管
methanol:
water=60:
40
水=60：
流动速度：
254nm
254nm
Injectionvolume:
20μl
进样体积：
20ul
Injectionscheme:
进样序列
—
6xreferencesolution（b）
对照液（b）6针
1xreferencesolution（a）
对照液（a）1针
1xsolventA（blankinjection1）
溶剂A（空白）1针
1xreferencesolution（b）
对照液（b）1针
1xsolventA（blankinjection2）
溶剂A（空白2）1针
1xreferencesolution（c）
对照液（c）1针
Repeatabilityofpeakareas:
Therelativestandarddeviationofthepeakareasofallpeaksinthechromatogramobtainedwiththereferencesolution（b）shouldbe≤1.0%.
峰面积重复性：
对照液（b）色谱图中所有峰的峰面积相对标准偏差应≤1.0%
Carry-over:
Thepercentageofthepeakareacorrespondingtopropylparabeneintheblankinjection1doesnotexceed0.5%of10timesthepeakareaofthepropylparabenepeakinthechromatogramobtainedwiththereferencesolution（b）injectedaftertheblankinjection.
残留：
尼泊金丙酯在空白图谱中的峰面积不超过在空白后进样的对照液（b）中尼泊金丙酯的对应峰面积的10倍的0.5%
Thepercentageofthepeakareacorrespondingtopropylparabeneinthereferencesolution（c）is0.9–1.1%ofthepeakareaofthepropylparabenepeakinthechromatogramobtainedwiththereferencesolution（b）injectedaftertheblankinjection.
在对照液（c）中尼泊金丙酯对应的峰面积为空白后进样的对照液（b）中尼泊金丙酯峰面积的0.9-1.1%。
HPLCAUTOSAMPLER液相色谱仪自动进样器
ThermostattingaccuracyandprecisioncanbetestedintheframeoftheperiodicandmotivatedcheckoftheHPLCAutosampler.
HPLC自动进样器的周期主动检查可以进行温度准确度和精密度检查
THERMOSTATTINGACCURACY
温度准确性
Calibratedtemperatureprobe.
校正过的温度探头
Selectatemperaturealongtheoperationalorrequiredtemperaturerangeoftheequipment.Waituntilthesystemisequilibrated.
在可操作范围或要求的温度范围内选择并设定一个温度，等待系统平衡
Bymeansofthecalibratedprobe,measuretheactualtemperatureintheautosamplerandcompareittotheselectedtemperature.
采用校正过的温度探头，测量自动进样器的实际温度，与设定的温度进行比较
Repeatthesameprocedureatdifferentpre-selectedpointscoveringthetemperaturerange.
在选定的温度范围内不同温度点重复相同的步骤
Theactualtemperaturemaynotdiffermorethan±
3°
Cwithrespecttotheselectedtemperature.
实际温度与设定的温度相比差值不超过±
C
THERMOSTATTINGPRECISION
Calibratedtemperatureprobe.
校正过的温度探头。
选择一个操作温度或要求的仪器温度范围，等待系统平衡。
Bymeansofthecalibratedprobe,make“n”measurementsoverapre-establishedperiodoftime.Comparethemeanofthe“n”measurementstotheselectedtemperature.
采用校正过的温度探头，在预设的时间内进行n次测量，比较n次测量值的平均值与设定的温度。
Limits限度:
实际温度与设定的温度之间差值不超过±
HPLCOVEN/COOLINGDEVICE
色谱仪柱温箱/降温设施
ThermostattingaccuracyistheparametertestedinthisexampleofperiodicandmotivatedcheckoftheHPLCoven/coolingdevice.
热力学准确性是在本例对HPLC柱温箱/降温设施周期主动检查的参数
Calibratedthermometer.
校正过的温度计
Setthecolumnoventemperatureto40°
C,waitabout30minutestoequilibratethesystem,putacalibratedthermometerintotheovenandreadthetemperatureafter10minutes.
设定柱温箱温度为40°
C，等待约30分钟平衡系统，将校正过的温度计放入柱温箱中，在10分钟后读取温度。
38-42°
C.
HPLCUV/DADDETECTOR
紫外/DAD检测器
TheperiodicandmotivatedcheckoftheHPLCUV/DADdetectorcanbeperformedbytestingthelinearityandthewavelengthaccuracy.
对于HPLC紫外/DAD检测器的周期主动检查，可以对线性和波长准确性进行检查
LINEARITY线性
溶剂配制
Std.1:
0.5μgcaffeine/1mlmethanolHPLCGrade
标准2：
0.5μg咖啡因/1ml色谱级甲醇
Std.2:
1.0μgcaffeine/1mlmethanolHPLCGrade
1.0μg咖啡因/1ml色谱级甲醇
Std.3:
5.0μgcaffeine/1mlmethanolHPLCGrade
标准3：
5.0μg咖啡因/1ml色谱级甲醇
Std.4:
25.0μgcaffeine/1mlmethanolHPLCGrade
标准4：
25.0μg咖啡因/1ml色谱级甲醇
Std.5:
50.0μgcaffeine/1mlmet
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