常用培养基.docx
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常用培养基
常用培养基配方
（微生物学与微生物检验学部分）
渤海大学生物与食品科学学院
2006年3月
目录
01糖发酵管
02ONPG培养基
03西蒙氏柠檬酸盐培养基
04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）
05克氏柠檬酸盐培养基
06丙二酸钠培养基
07葡葡糖铵培养基
08 Hugh－Leifson培养基（O/F试验用）
09马尿酸钠培养基
10营养明胶
11苯丙氨酸培养基
12氨基酸脱羧酶试验培养基
13蛋白胨水（靛基质试验用）
14硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）
15尿素琼脂
16氰化钾（KCN）培养基
17氧化酶试验
18硝酸盐培养基
19细胞色素氧化酶试验
20过氧化氢酶试验
21过氧化物酶试验
22磷酸盐缓冲液
23明胶磷酸盐缓冲液
24乳酸－苯酚溶液
25肉浸液肉汤
26肉浸液琼脂
27牛肉（或牛心）消化汤
28血消化汤
29豆粉琼脂
30血琼脂
31营养琼脂
32营养肉汤
33乳糖胆盐发酵管
34乳糖发酵管
35EC肉汤
36缓冲蛋白胨水（BP）
37氯化镁孔雀绿增菌液（MM）
38四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）
39四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法）
40亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）
41GN增菌液
42肠道菌增菌肉汤
43亚硫酸铋琼脂（BS）
44DHL琼脂
45HE琼脂
46SS琼脂
47WS琼脂
48麦康凯琼脂
49伊红美蓝琼脂（EMB）
50三糖铁琼脂（TSI）
51三糖铁琼脂（换用方法）
52克氏双糖铁琼脂（KI）
53克氏双糖铁琼脂（换用方法）
54葡萄糖半固体发酵管
555%乳糖发酵管
56CAYE培养基
57Honda氏产毒肉汤
58Elek氏培养基（毒素测定用）
59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基
60胰蛋白胨水
61Rustigian氏尿素培养液
62氯化钠结晶紫增菌液
63氯化钠蔗糖琼脂
64嗜盐菌选择性琼脂
653.5%氯化钠三糖铁琼脂
66氯化钠血琼脂
673.5%氯化钠生化试验培养基
68改良磷酸盐缓冲液（小肠结肠炎耶尔森氏菌专用）
69CIN－1培养基
70嗜盐性试验培养基
71改良Y培养基
72改良克氏双糖
73快速硫化氢（H2S）试验琼脂
74DNA酶甲基绿琼脂（DTA）
75Cary－Blair氏运送培养基
76Skirrow氏培养基
77TTC琼脂
78甘氨酸培养基
79改良磷酸盐缓冲液
80氯化镁孔雀绿肉汤
81胰酪胨大豆肉汤
82Baird－Parker氏培养基
837.5%氯化钠肉汤
84匹克氏肉汤
85甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
863.8%柠檬酸钠溶液
87酪蛋白琼脂
88木糖－明胶培养基
89庖肉培养基
90卵黄琼脂培养基
91亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶琼脂（SPS）
92液体硫乙醇酸盐培养基（FT）
93含铁牛奶培养基
94动力-硝酸盐培养基（A法）
95动力－硝酸盐培养基（B法）
96血清肉汤
97马丁氏肉汤
98明胶培养基
99察氏培养基
100高盐察氏培养基
101马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）
102马铃薯琼脂
103孟加拉红培养基
104玉米粉琼脂
105大米粉培养基
106亚硒酸盐煌绿增菌液
107煌绿肉汤增菌液
108肠毒素产毒培养基
1090.1%蛋白胨水稀释剂
110半固体琼脂
01糖发酵管
成分：
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
氯化钠 3g
磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O） 2g
0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH7.4
制法：
1葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。
2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。
另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。
将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。
注：
蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。
试验方法：
从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。
迟缓反应需观察14～30d。
02ONPG培养基
成分：
邻硝基酚β－D-半乳糖昔（ONPG） 60mg
（O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside）
0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.5） 10mL
1%蛋白胨水（PH7.5） 30mL
制法：
将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。
试验方法：
自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于36±1℃培养1～3h和24h观察结果。
如果β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。
03西蒙氏柠檬酸盐培养基
成分：
氯化钠 5g
硫酸镁（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
柠檬酸钠 5g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL
pH6.8
制法：
先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。
然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min。
放成斜面。
试验方法：
挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。
阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。
04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）
成分：
磷酸氢二钾 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸馏水 1000mL
pH7.0
制法：
溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。
甲基红（MR）试验：
自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。
滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。
鲜红色为阳性，黄色为阴性。
甲基红试剂配法：
10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。
V－P试验：
用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。
哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。
加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。
阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。
05克氏柠檬酸盐培养基
成分：
柠檬酸钠 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
单盐酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氢钾 1g
氯化钠 5g
0.2%酚红溶液 6mL
琼脂 15g
蒸馏水 1000mL
制法：
加热溶解，分装试管，121℃高压灭菌15min。
放成斜面。
试验方法：
用琼脂培养物接种整个斜面，在36±1℃培养7d，每天观察结果。
阳性者培养基变为红色。
06丙二酸钠培养基
成分：
酵母浸膏 1g
硫酸铵 2g
磷酸氢二钾 0.6g
磷酸二氢钾 0.4g
氯化钠 2g
丙二酸钠 3g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH6.8
制法：
先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。
试验方法：
用新鲜的琼脂培养物接种，于36±1℃培养48h，观察结果。
阳性者由绿色变为蓝色。
07葡葡糖铵培养基
成分：
氯化钠 5g
硫酸镁（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氢铵 1g
磷酸氢二钾 1g
葡萄糖 2g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mL
pH6.8
制法：
先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。
试验方法：
用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。
将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。
于36±1℃培养24h。
阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。
如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。
注：
容器使用前应用清洁液浸泡。
再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。
如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。
08Hugh－Leifson培养基（O/F试验用）
成分：
蛋白胨 2g
氯化钠 5g
磷酸氢二钾 0.3g
琼脂 4g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL
蒸馏水 1000mL
pH7.2
制法：
将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2。
加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。
混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。
试验方法：
从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于36±1℃培养。
09马尿酸钠培养基
成分：
马尿酸钠 1g
肉浸液 100mL
制法：
将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。
以标志管内液面高度，高压灭菌121℃20min。
试剂：
三氯化铁（FeCl3·6H2O）12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。
试验方法：
用纯培养物接种，于42℃培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。
经离心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经10～15min，观察结果。
结果：
出现恒久之沉淀物为阳性。
10营养明胶
成分：
蛋白胨 5g
牛肉膏 3g
明胶 120g
蒸馏水 1000mL
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