丹参的多种鉴别方法Word文档下载推荐.docx
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根本质部束常较小，导管也少。
2.2根粉末的显微结构鉴别
丹参粉末呈红棕色。
木栓细胞黄棕色，表面观呈类方形或多角形，壁稍厚，胞腔内常含红棕色色素，色素溶解后，断面观细胞类长方形，排列较整齐。
木纤维多成束，长梭形，纹孔斜裂缝状或十字状，孔沟稀。
导管主要为网纹和具斜纹孔导管。
石细胞呈类圆形、类三角形、类梭形、类长方形或不规则形，也有延长呈纤维状，有的胞腔
内含棕色。
2.3花粉形态学特征对丹参及同属药用植物的鉴别一定的植物具有一定形态
的花粉，因此花粉形态研究也是植物分类鉴别的依据之一。
丹参的花粉以外壁较薄、纹饰网眼较浅、网脊较粗、沟较宽、沟底具颗粒而区别于其他种。
3理化学方法鉴别
3.1根据丹参所含的化学成分进行鉴别经过大量分析研究说明丹参所含化学
成分中二萜醌成分与系统发育有密切关系，二萜醌类化合物组成的不同可以作为种类鉴别的依据，根据二萜醌成分含量的多少对丹参组作丹参的药用植物的亲缘关系进行划分。
3.2薄层色谱鉴别林佳等［采用薄层色谱定性鉴别的方法比较后指出在同一展开系统的条件下，无论是野生还是栽培品种，丹参的一些主要成分相同，以此可以作为识别丹参药材真伪的参考依据。
落笊蕭沿
原處位■
严H期：
2004年12月29H）
样品名称S.丹酚酸B1,2.丹参（产于河北）3.丹参（产于陕西）4-6.丹参（产于山东）7,8.丹参
（产于安徽）
相关条件供试品溶液：
取丹参粉末0.2g，加75%甲醇25ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液
浓缩至1ml
对照品溶液：
取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每1ml含2mg的溶液。
薄层板：
高效硅胶GF254,预制薄层板（HPTLC-plateNano-DLRASIL-20，UV254,MN>
点样：
2卩l;
条带状点样，条带宽度为1Omm条带间距为5mm原点距底边10mm
展开剂：
甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:
340.5:
2），20ml。
展开缸：
双槽展开缸，20cmX10crm
展开：
展开缸一侧槽中加入展开剂，预平衡15分钟，上行展开，展距为8cm。
检视：
置紫外光灯（254nm）下检视。
3.3紫外吸收光谱鉴别
丹参在253,277nm两处有吸收特征峰，而甘西鼠尾在264,248,218,203nm4处有吸收特征峰。
作丹参使用的药材紫外吸收光谱的范围不同，据此可以对两者进行
鉴别。
丹参粉末处理后置紫外灯（365nm）下现察显亮蓝灰色荧光
3.4紫外导数光谱：
李海鹰等研究认为丹参与番薯根的石油醚、甲醇及氯仿提取物的零阶和二阶导数光谱均可用于二者的鉴别。
3.5丹参药材的近红外漫反射光谱模式识别法鉴别刘沐华等近红外漫反射光
谱（NIRTDRS模式识别法可以有效地应用于中药材自动鉴别、递归支持向量机等方法可以有效地完成自动分类和特征谱段选择。
不同种丹参药材的NIRTDRS丹参
及属内植物为根茎类药材，其根茎中除含有大量的纤维素、淀粉等外，其他化学成分主要分脂溶性的其结果与化学成分测定一致。
NIRTDRS用于不同种丹参药材的
鉴别，方法简便、结果可靠。
3.6指纹图谱鉴别（HPLC法）
高效液相色谱（HPLC具有色谱稳定性好、柱效高、应用范围广等特点，是中药指纹图谱研究中常用的手段。
对丹参等几种中药指纹图谱与代谢指纹图谱研究的
结果,指出不同产地的药材在指纹图谱上存在较大差异
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4分子生物学鉴别方法
RAPD鉴别法：
随机扩增的多态性DNA（RAPC技术已经被广泛应用于物种鉴别4.1丹参主要居群DNA指纹图谱的建立
4.1.1基因组DNA的提取
表1实验所用材料
编号
帝称
来源
花颓色
Ai
大叶丹養
四川中江
紫色
a3
丽蒂丹参
陕西商港
蕭色
Aj
花丹券
山东苜县
At
四借体孙参
中国药科丈学
As
苣且白花丹参
山东莒县
白色
A4
北京丹摻
中国中医药研究院
*fe
至州丹鑒
安置奎州
饕色
A*
芮城丹摻
山西芮城
Aq
江苏丹参
江苏肘阳
A）o
小叶丹秦
Alb
安国丹拿
河北安国
Au
廿西囂足草
甘甫
An
一串红
陕西宵杂交油菜研究中心
红色
Ah
油菜
陕匹肯樂左油菜研究中心
黄邑
小麦
陕西省杂交淋菜SJ究中心
注:
ArA（J为各博群绸号'
详见溝打以下同“4.1.2RAPD—PCR扩增反应体系及扩增程序的优化
分别设计M扩+、Taq酶、模板DNA的浓度及退火温度等单因子试验，同时
保持扩增体系的其它成分浓度及扩增程序其它环节不变，以优化、确证适宜的M
扩+、Taq酶、模板DNA的浓度及退火温度。
结果如下：
*fr.1_4JR41r14托17-2D21-?
4谏币肝心*怙席汁帯IftI5?
D?
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1.3鉴别丹参与其近缘和远缘植物的特征引物及其DNA指纹图谱
引物S2035、S222扩增结果不仅稳定、条带明亮，而且采用引物S2035、
s232建立的指纹图谱丹参主产区的n个居群丹参的PCR扩增带型几乎相同（1一n泳道），其中有200一1100bp的七条共同的特异条带，即图6的条带Cl、CZC3C4图7的CSC6C7,各丹参居群完全相同。
彖取远墩殖珂旳和社引初
鉴别丹參与其近缘忌远嫌槽物的指纹图谱I’别物S2O35
JWbp事*4ih护=|>
1峠严刚■划IMNAvii
ZM.flhpi
ffi7鉴别丹参与其近缘及远维橋曲的指紅囲潛I!
"
引输內222
结果验证：
结果验证显示，PCR扩增重复性较好，取样合理，能够代表各居群。
4.2丹参EST序列中SSR信息的分析及建立
4.2.1丹参EST序列中SSR信息的分析
微卫星（Microsatellite）又称简单重复序列（Simplesequeneerepeat），指的是基因组中由1〜6个核苷酸组成的基本单位重复多次构成的一段DNA,广泛分
布于基因组的不同位置，长度一般在200bp以下SsR分子标记具有数量丰富，
多性高，多等位基因，共显性，重复性高等优点。
根据建立SSR标记的序列性
质不同可分为基因组SSR（GenomicSSR,gSSR和表达序列标签SSFRExpressedsequeneetagSSREST-SSREST及表达序列标签是通过从cDNA文库中随机挑选的克隆进行大规模测序所获得的5'
或3'
端序列，长度一般在150~500bp。
422丹参EST序列中SSR信息的分析及建立
表2丹参EST-SSF引物情况表
弓闍骗号
IjeueBankEhV虬6Ja
（yfiieltankESTccnlr
「bp
Fifprrlril
|Hiwinlit*sii/r
引像序列
JU火詁度TmW
CFACA}5
＜；
V1724l£
241
GAGGC1AtITCt；
ICXJAGG
52.3
GAAACTAAAGCAACAAACCC
52.1
（CAJ16
t：
V172134
176
CCGHGGTG1ICCCTCII1
55
TGCCGATTCTAACCTGTATG
苗
K.
CVI7IH77
）37
AGAGGCTGCTGCIICAI1
52.7
ICAAG1＜：
ATAGGCXiIG＜X：
543
-H4
（AAC：
K＞
＜：
V371649
TIT
AGGC：
AGACAGACC1CAIA
4（k7
（II「dmwrr
SSR（H）5
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153
CTGAGCA＜X：
TA匚TACCACAT
49.6
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54.9
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CAGTCCAACAGCCCGACCAG
©
4
ATC：
Al＜Altt；
＜CAG＜A]（：
（
M.4
从NCBI数据库下载鼠尾草属EST序列11747条，其中包括丹参EST序列10228条和Salviafruti—cosa1519条，应用ActivePerl5.6.1.628对含有SSF的序列进行搜索。
搜索参数设置为：
单核苷酸、二核苷酸、三核苷酸、
四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸最少重复次数分别为18次、6次、
5次、4次、4次、3次
423丹参的EST-SSF分布频率与特点
丹参EST-SSF中共包含77种重复基元。
单核苷酸重复有1种A/T。
二核苷
酸重复也为3种，以AG/CT为主，占64.21%。
三核苷酸重复为10种
表3丹参EST-SSF言息情况表
Keprat片卩广丹
基冗种数Numberofmutdl\]irs
SSK数
SSRNumber
占全部SSR比例
Proparriotiin胡SSRjM%）
出现频率
Frequency'
%■）
单核昔酸童复
1（Xj9
53.0b
1（X45
Mononucleotide
二檢甘酸讥奴
3S0
18.87
3.72
Dinncleotide
J
10
450
22.34
Jrinilcleoddc
四梭仔醸重复
rccranucleotidtf
fl
15
1）.74
（1.15
五孩甘酸取IX
□
13
（L65
0.13
Pcntanuclcotidc六核昔酸遼复
432
（L帖
hexriniuleordr
总计
TL>
tl]
77
2014
HKi.Od
19.69
表4丹参二、三核苷酸重复基元情况表
Repeattype^
基元rrprulumlit
Number
占该类型比例
LJtLn|>
orLii»
Hinthistypr（%）
Frequency!
%）
巾•核背隈就复
Moncmuclcntidc
A/f
IhOJl.i
1（>
+45
-核井酸币.貝
AC/GT
wl
15,79
0.59
1JillLldtOlldc
AG/CT
244
64.21
23
A17AT
76
OJA
:
核昔酸质复
AAC/CTT
S
178
0.08
[rinuc-lrotidr
^AG/Cl1
79
17.56
0.77
AAI7A11
9
2.dll
U.Q2
ACC/CJGT
14
311
（>
+（}3
ACG/CTG
123
27.33
1.20
\CV//\TC,
41
9.11
0.40
AGC/CG1
36
8.（1（»
0.35
AGG/CC1
25
5.56
0.24
AGT/ATC
95
21.11
0.93
CCX；
/C（；
G
21）
4.44
1）.20
423讨论：
丹参EST-SSR勺出现频率高，重复基元的类型也比较丰富。
17.5%
的EST序列中含有SSRSSR出现频率为19.69%。
丹参EST-SSR言息比较丰富，覆盖了从单核苷酸重复到六核苷酸重复。
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