岛津液相色谱仪教材Word文档格式.docx
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HighPerformanceLiquidChromatography（HPLC气相色谱
GasChromatography（GC
薄层色谱
Thin-LayerChromatography（TLC
毛细管电泳
CapillaryElectrophoresis（CE
液相色谱:
以液体作为流动相的色谱分离方法
适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分析
流动相具有运载样品分子和选择性分离的
双重作用
HPLCvsGC
气相色谱:
以气体作为流动相的色谱分离方法
适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化合物的分析
流动相只起运载样品分子的能力
HPLC特点
分离性能好
灵敏度高（10-9~10-12g
选择性高（同分异构,旋光异构分析速度快
进样量小（1-100μL
HPLC分类
反相色谱（reversedphasechromatography离子对色谱（ion-pairchromatography正相色谱（normalphasechromatography离子交换色谱（ionexchangechromatography尺寸排阻色谱（GPC/GFC
反相色谱流动相的选择
优化水相（缓冲液和有机相的比例非常重要
甲醇、乙腈和THF是常用的有机溶剂。
在有缓冲液的情况下,缓冲液的浓度和pH值非常重要。
流动相极性变化对分离的影响
20%水30%水40%水
1:
对羟基苯甲酸甲酯
2:
对羟基苯甲酸乙酯
3:
对羟基苯甲酸丙酯
4:
对羟基苯甲酸丁酯
有机相:
甲醇
分析条件
柱:
Shim-packCLC-ODS流动相:
MeOH:
H2O=7:
3流速:
1.0mL/min温度:
40℃
进样体积:
10μL检测器:
UV-254nm色谱峰
1.苯甲酸甲酯2.苯甲酸乙酯3.n-苯甲酸丙酯4.n-苯甲酸丁酯
ODSC8
TMS
固定相极性变化对分离的影响
反相离子对色谱
原理样品离子与流动相中离子对试剂的反离子生成疏水性离子对,而为反相色谱固定相保留。
固定相疏水性的苯乙烯/二乙烯基苯树脂或键合的硅胶
流动相水（缓冲液+离子对试剂+有机溶剂
离子对试剂所带电荷与待测离子相反
阴离子化合物
–氢氧化四丁基铵
–溴化四丁基铵
阳离子化合物
–丁烷基磺酸钠（C4–戊烷基磺酸钠（C5–己烷基磺酸钠（C6–庚烷基磺酸钠（C7–辛烷基磺酸钠（C8–癸烷基磺酸钠（C10–十二烷基磺酸钠（SDS常用离子对试剂
反相离子对色谱流动相的选择
离子对试剂的类型
所带电荷与待测物质相反
离子对试剂的浓度
10-4~10-2mol/L
在一定范围内,浓度越大,被分离物的保留值越大。
流动相的pH
反相离子对色谱应用
—阴阳离子表面活性剂—大分子脂肪酸
—烷基磺酸盐和芳香硫酸盐—含氮化合物—生物碱
—水溶性维生素—
酚类
有机酸、碱、盐的分离包括
氢键力
如果样品有
–COOH羧基
–NH2氨基
–OH羟基
氢键力强
如果样品没有任何官能团,如碳水化合物如果样品有大的基团,由于空间位阻氢键力弱
正相模式下流动相的选择
主要试剂
烷烃（戊烷、己烷、庚烷、辛烷
芳香烃（苯、甲苯、二甲苯
二氯甲烷
氯仿
四氯化碳
辅助试剂
甲基-t-丁基醚（MTBE,乙醚,四氢呋喃（THF,二氧杂环乙烷,嘧啶,乙酸乙酯,乙腈,丙酮,异丙醇,乙醇,甲醇
为了调整保留时间,可以选择主要试剂然后再加入辅助试剂。
0%甲醇2%甲醇5%甲醇
邻苯二甲酸二辛酯
邻苯二甲酸二丁酯
邻苯二甲酸二乙酯
邻苯二甲酸二甲酯
主要试剂:
己烷
反相色谱
流动相极性大于固定相极性
适用于能溶于水/有机混合物的中性或非离子化合物分离
正相色谱
流动相极性小于固定相极性
适用于不溶于水/有机混合液的亲脂样品、异构体混合物的分离和制备HPLC
反相色谱与正相色谱的对比
反相
–保留时间重现性好
–固定相耐用
正相
–对立体异构体有很好的分离（VitaminE等–保留时间重现性稍差
离子交换色谱
原理:
利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离
固定相:
离子交换树脂
流动相:
水缓冲溶液（常用或有机溶剂与水缓冲溶液的混合液离子交换色谱所用的缓冲液:
阴离子分离:
氢氧化物、硼酸盐、碳酸盐、酚盐和两性离子等
阳离子分离:
矿物酸,如硝酸、盐酸、硫酸和甲基磺酸等
离子交换色谱应用
生物领域（蛋白质、农药、氨基酸分析离子分
阳离子交换剂
强阳离子交换剂（SCX（R-SO3-弱阳离子交换剂（WCX（R-COO-阴离子交换剂
强阴离子交换剂（SAX（R4N+弱阴离子交换剂（WAX（DEAE
利用多孔凝胶固定相的独特特性,而产生的一种主要依据分子尺寸大小的差异来分离的液相色谱方法。
一种表面惰性、具有一定孔径的多孔凝胶
应用:
聚合物及生命科学领域
尺寸排阻色谱法（SEC
SEC分类
凝胶渗透色谱（GPC
主要用于聚合物领域
以有机溶剂为流动相（氯仿,THF,DMF
常用固定相填料:
苯乙烯-二乙烯基苯共聚物
凝胶过滤色谱（GFC
主要用于生命科学领域
以水溶液为流动相
亲水性有机凝胶（葡聚糖,琼脂糖,聚丙烯酰胺等
第二部分硬件基础知识
储液瓶
由机械性能和化学稳定性好的不锈钢、玻璃或聚四氟乙烯材料制成
使用过程中储液瓶应适当密闭
所有溶剂应先过滤,再装入储液瓶
滤膜类型:
聚四氟乙烯滤膜:
适用于所有溶剂,酸和盐。
醋酸纤维滤膜:
不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶剂。
尼龙66滤膜:
适用于绝大多数有机溶剂和水溶
液,可以用于强酸,不适用于
DMF,THF,CHCl3等溶剂。
再生纤维素滤膜:
蛋白吸收低,同样适用于水溶性样品和有机溶剂。
溶剂前处理-过滤
过滤:
0.45μm或更小孔径滤膜
目的:
除去溶剂中的微小颗粒,避免堵塞色谱柱,尤其是使用无机盐配制的缓冲液
脱气:
除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡
气泡对测定的影响:
1泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积
2柱中气泡使流动相绕流,峰变形
3检测器中的气泡产生基线波动
溶剂前处理-脱气
常用脱气方法超声脱气
减压脱气
在线脱气
输液泵
性能要求
–能在高压下连续工作
–输出流量范围宽
–输出流量稳定、精确度、重复性高
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