岛津SPD高效液相色谱仪确认方案Word下载.docx
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工作站：
工作站
N2000色谱工作站
生产厂家
大学智达自动化信息工程
1.2.仪器用途
该仪器用于样品含量、有关物质、聚合物等的检测。
2.目的
对该仪器进行安装确认、运行确认及性能确认，以确定仪器是否仍具有良好的检测性能，是否仍能满足日常分析测试工作的需要。
3.围
适用于岛津高效液相色谱仪SPD-15C的确认。
4.验证小组成员及职责
人员
部门
职责
项目负责人
负责确认方案的起草
负责按确认方案的要求参与并组织实施确认
负责收集确认记录，对确认结果进行分析，起草确认报告
负责对参与确认的检验人员进行确认方案及操作规程培训
组员
按确认方案，参与确认实验的操作
质量保证部
负责监督确认实施的进展情况
5.方案执行
所有的空白记录都要被填写，如果项目不适用，用单线划掉，签名并注明日期。
所有的测试项目都应完成，若未完成应记录，按偏差处理，并说明相关原因和解决的措施。
所有的偏差均要求记录，并用适当的方法评估其影响，并证明采取的纠正措施是可以被接受的。
偏差记录见确认记录中“6．偏差处理记录”。
6.容
6.1.文件检查
6.1.1.目的
确保与本次确认的相关文件都齐全。
6.1.2.程序
6.1.2.1.确定仪器使用说明书等相关原始资料和技术文件齐全。
6.1.2.2.相关人员接受了确认方案及相关操作规程的培训。
6.1.2.3.确认方案中涉及的所有仪器均经过校准，并在有效期，且有必需的相关证书。
6.1.3.可接受标准
根据确认记录中“1.文件检查记录”的要求，核对相关文件，确保文件完整。
相关人员接受了确认方案及相关操作规程的培训。
确保岛津SPD-15C高效液相色谱仪及其他仪器经过校准，在有效期，且有相应的证书。
6.1.4.原始记录
检查记录见确认记录“1.文件检查记录”及“2.仪器与试剂”。
6.2.具体确认步骤
6.2.1.仪器与试剂
6.2.1.1.要求
秒表：
分度值不大于0.1s；
分析天平：
最大称量不小于100g，最小分度不大于1mg；
温度计：
温度围0～100℃、最小分度值不大于0.1℃；
甲醇：
HPLC用；
丙酮：
分折纯；
紫外吸收标准溶液:
取120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/l硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得重铬酸钾的硫酸溶液；
1×
10-7g/mL的萘/甲醇标准溶液；
10-4g/mL的萘/甲醇标准溶液。
6.2.1.2.具体见确认记录“2.仪器与试剂”。
6.2.2.安装确认
6.2.2.1.目的
由于在初始安装岛津SPD-15C高效液相色谱仪时，未进行系统的安装确认，故在本次确认中，重新对零配件和仪器的安装条件进行确认，保证各项检查项目结果合格，仪器的安装正确，且能正常运行。
6.2.2.2.程序
对照使用说明书，确认环境、电源等是否符合要求，具体确认步骤按“3.安装确认记录”进行。
6.2.2.3.可接受标准
实验室电源设计安装合理，环境良好，符合仪器安装要求。
环境、电源等符合仪器要求。
6.2.2.4.原始记录
运行确认结果见确认记录中“3.安装确认记录”。
6.2.3.运行确认
6.2.3.1.目的
确认岛津SPD-15C高效液相色谱仪的各项功能是否达到设计要求，并能顺利运行。
6.2.3.2.程序
6.2.3.2.1.运行确认开始前状态的确认
安装确认成功完成；
设备与电源连接正常。
6.2.3.2.2.操作功能键确认
按“4.1操作功能键确认”，确认仪器的主要操作功能键及其功能是否正常。
6.2.3.2.3.基本运行功能确认
按“4.2基本运行功能确认”，确认仪器的基本运行功能是否正常。
6.2.3.2.4.输液系统的确认
6.2.3.2.4.1.泵耐压的确认
将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为1mL/min，按说明书启动仪器，压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。
卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值39.2MPa的90%，保持5min无泄漏。
6.2.3.2.4.2.泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的确认。
按表1的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表1规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式
（1）、式
（2）计算SS和SR。
SS=（
m-
S）/
S×
100%
（1）
SR=（
max-
min）/
m×
100%
（2）
式中：
m——
m=（W2-W1）/（ρt.t），流量实测值，mL/min；
W2——容量瓶+流动相的质量，g；
W1——容量瓶的质量，g；
ρt——试验温度下流动相的密度，g/mL；
t——收集流动相的时间，min；
m——同一组测量的算术平均值，mL/min；
S——流量设定值，mL/min；
max——同一组测量中流量最大值，mL/min；
min——同一组测量中流量最小值，mL/min。
表1
流量设定值/（mL/min）
0.5
1.0
2.0
测量次数
3
流动相收集时间/min
10
5
6.2.3.2.4.3.梯度误差
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A溶剂为纯水，B溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B经由5个阶梯从0变到100%，如图1所示。
将输液泵和检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。
求出A，B溶剂不同比例时的输出信号值，重复测量2次，计算平均值。
从B溶剂的含量及对应的输出信号值，按式（3）计算梯度误差Gci，取Gci最大者作为仪器梯度误差。
Gci=（
i-
m）/
100%（3）
Gci——第i阶段梯度误差（%）；
i——第i阶段输出信号值增量的平均值；
i=
（i-1）（i=0,1,2,3,4,5）；
m——各段输出信号值增量平均值的平均值；
m=
。
图1
6.2.3.2.5.柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的确认
将数字温度计探头固定在柱温箱，选择35℃和45℃进行确认。
按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。
平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。
6.2.3.2.6.紫外-可见光检测器的确认
6.2.3.2.6.1.波长示值误差和重复性
用一节空管代替色谱柱将液路连通，以水为流动相流量为1.0mL/min，采用步进进样方法，在235nm、257nm、313nm和350nm波长处检定仪器的波长示值误差。
从检测器波长较规定波长低5nm处开始到较规定波长高5nm处（例如确认257nm时，从252nm开始到262nm），从低于5nm开始，注入紫外吸收标准溶液10μL，待色谱峰出来完毕后再将检测器波长调高1nm，再注入紫外吸收标准溶液10μL，这样将得到一组不同波长的色谱峰，最高（或最低）色谱峰对应的波长与标准溶液波长之差，即为波长示值误差，示意图如图2；
每个波长重复测量三次，其中最大值与最小值之差为波长重复性误差。
图2
6.2.3.2.6.2.基线噪声和基线漂移的确认
）hd选用C18色谱柱，以100%甲醇为流动相，流速为1mL/min，紫外检测器的波长选在254nm检测器灵敏度调到最灵敏档，开机预热，待仪器稳定后（约60min）记录基线60min，从30min基线上读出噪音值（峰对峰的最大宽度），用工作站色谱图显示的物理量（mv）作单位表示；
从60min基线上读出基线漂移值（坐标轴放大后读取），基线漂移用1h基线偏离原点的值（mv/h）表示。
6.2.3.2.6.3.最小检测浓度的确认
在6.2.3.2.6.2.的色谱条件下，注入10μL或20μL1×
10-7g/mL的萘/甲醇标准溶液，记录色谱图，按式（4）计算最小检测浓度cL。
cL=
（4）
cL——最小检测浓度，g/mL；
Nd——检测器基线噪声峰高，mv；
c——标准溶液浓度，g/mL；
H——标准溶液的色谱峰高，mv；
V——进样体积，μL。
6.2.3.2.7.自动进样器进样量准确度误差的确认
取1.5ml进样瓶装入1ml水，用天平精密称定其重量，然后置于自动进样器上让其进样10次，每次10μl。
进样完成后再精密称定其重量，按式（5）由重量差计算进样量准确度。
进样准确度=
×
100%（5）
Ma——进样前进样瓶重（mg）；
Mb——进样后进样瓶重（mg）；
V——进样体积，μL；
ρt——试验温度下（自动进样器设置温度）流动相的密度，mg/μL。
.—0
6.2.3.3.原始记录
运行确认结果见确认记录中“4.运行确认记录”。
6.2.3.4.可接受标准
6.2.3.4.1.仪器的主要功能键及其功能正常，仪器的基本运行功能正常。
6.2.3.4.2.泵耐压的确认：
输液管路接口紧密牢固，在5min无泄漏。
6.2.3.4.3.泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR：
流量为0.5mL/min时SS≤5%，SR≤3%；
流量为1.0mL/min时SS≤3%，SR≤2%；
流量为2.0mL/min时SS≤2%，SR≤2%。
6.2.3.4.4.梯度误差GC：
GC不超过±
3%。
6.2.3.4.5.柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC：
ΔTS不超过±
2℃；
TC不超过1℃。
6.2.3.4.6.波长示值误差和重复性：
波长示值误差不超过±
2nm；
波长重复性优于2nm。
6.2.3.4.7.基线噪声和基线漂移：
基线噪声不超过5×
10-4mv；
基线漂移不超过5×
10-3mv/h。
6.2.3.4.8.最小检测浓度：
最小检测浓度不超过1×
10-7g/mL的萘/甲醇溶液。
6.2.3.4.9.自动进样器进样量准确度误差：
进样误差不得过2%。
6.2.4.性能确认
6.2.4.1.目的
确认岛津SPD-15C高效液相色谱仪的整机性能是否符合规定，达到定性、定量重复性的要求。
6.2.4.2.程序
6.2.4.2.1.性能确认开始前状态的确认
运行确认成功完成；
仪器与电源连接正常。
6.2.4.2.2.性能确认（定性、定量重复性的确认）
将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，检测波长为254nm，柱温设定为40℃,待基线稳定后注入10μL的1×
10-4g/mL萘/甲醇标准溶液；
连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，以保留时间计算其定性测量重复性误差，以峰面积计算其定量测定重复性误差。
按式（6）计算相对标准偏差RSD。
RSD6定性（定量）=
（6）
RSD6定性（定量）——定性（定量）测量重复性相对标准偏差；
——第i次测得的保留时间或峰面积；
——6次测量结果的算术平均值；
i——测量序号。
6.2.4.3.原始记录
性能确认结果见确认记录中“5.性能确认记录”。
6.2.4.4.可接受标准
定性测量重复性（6次测量）RSD不超过1.5%；
定量测量重复性（6次测量）RSD不超过2.0%。
6.3.再确认
6.3.1.在一般正常情况下，每年再确认一次。
6.3.2.如遇任何重大变更：
如更换重要零件或重大维修项目，完成后均需要再次确认，以证明各种重大变更不会对现有使用效果产生影响。
6.4.确认结论
确认结论见确认记录中“7.确认结论”。
6.5.确认报告
确认报告见《岛津SPD-15C高效液相色谱仪确认报告》。
7.参考文件
本方案依据下面列出规或资料的有关条款，结合本公司需求制定。
7.1.《药品生产质量管理规（2010年修订）》
7.2.《中华人民国药典（2010版二部）》
7.3.《药品GMP指南·
质量控制实验室与物料系统》
7.4.《岛津SPD-15C紫外-可见检测器说明书》
7.5．《岛津LC-15C溶剂输送泵说明书》
7.6.《岛津SIL-20AC自动进样器说明书》
7.7.《液相色谱仪检定规程JJG705-2002》
岛津SPD-15C高效液相色谱仪确认记录
1.文件检查记录
1.1.仪器原始资料及操作规程检查
文件名称
文件编号/档案号
文件保存地点
岛津SPD-15C高效液相色谱仪使用说明书
岛津系列高效液相色谱仪操作规程
岛津系列高效液相色谱仪维护保养操作规程
岛津系列高效液相色谱仪清洁操作规程
检查人
检查日期
复核人
复核日期
结论：
评价人：
日期：
年月日
1.2.文件培训检查
培训容
培训讲师
参加人员
日期
是否有培训记录
岛津SPD-15C高效液相色谱仪确认方案
高效液相色谱法操作规程
2.仪器与试剂
2.1.仪器
仪器
型号
级别/
规格
编号
生产
厂家
校准
有效期
是否有
校准报告
是否符合要求
秒表
分析天平
温度数据采集仪
温湿度计
2.2.试剂
品名
批号
级别
（纯度）
供应商/来源
是否
符合要求
甲醇
丙酮
基准重铬酸钾
硫酸
10-7g/mL的萘/甲醇标准溶液
10-4g/mL的萘/甲醇标准溶液
评价人：
3.安装确认记录
项目
可接受标准
结果
室环境
室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，无直射，排风良好。
环境温度
室温在15～30℃，温度变化不超过3℃，室湿度在20%～85%围。
安装位置
仪器应平稳地放置在工作台上周围无强烈的机械震动和电磁干扰源。
电源
电源电压为（220±
22）V，频率为（50±
0.5）HZ，以稳压器输出。
接地
仪器接地良好。
4．运行确认记录
4.1.操作功能键确认
输液泵【POWER】
按下输液泵【POWER】输液泵通电，输液泵显示屏亮，等待约3秒输液泵显示屏显示主界面。
输液泵排气阀【DRAIN】
可逆时针打开输液泵排气阀【DRAIN】1/2圈。
输液泵【purge】
逆时针打开输液泵排气阀【DRAIN】1/2圈，按下【purge】输液泵开始排气。
5分钟后自动停止。
输液泵【pump】
按下输液泵【pump】键，输液泵开始输液。
输液泵【sleep】
按下输液泵【sleep】键，输液泵控制面板灯灭，进入睡眠状态。
输液泵【edit】
按下输液泵【edit】进入梯度编辑界面。
输液泵【Enter】
按下输液泵【edit】进入梯度编辑界面，输入时间5min，再按下【Enter】键，即设置初始梯度执行时间为5min。
输液泵【del】
按下输液泵【edit】进入梯度编辑界面，输入时间5min，再按下【Enter】键，即设置初始梯度执行时间为5min，再按下【del】键删除设置的时间。
输液泵【CE】
在梯度编辑界面按下【CE】键，返回上级菜单。
输液泵【func】
按下输液泵【func】键，进入输液泵菜单，再次按下【func】键，进入下一菜单。
输液泵【conc】
按下输液泵【conc】键，进入梯度初始比例设置界面。
输液泵【run】
按下输液泵【run】键，输液泵run指示灯亮，输液泵开始执行梯度输液。
检测器【POWER】
按下检测器【POWER】键，检测器通电，显示屏亮，进入自检界面，等待约3分钟，检测器显示屏显示主界面。
检测器【func】
按下检测器【func】键，进入检测器菜单界面，再按下检测器【func】键，进入下一菜单。
检测器【enter】
按下检测器【func】键一次，显示波长设置菜单，按下【enter】键，进入波长设置界面，输入254nm再按下【enter】键即设置254nm为检测波长。
检测器【del】
按下检测器【func】键一次，显示波长设置菜单，按下【enter】键，进入波长设置界面，输入254nm，再按下【del】键即删除254nm。
检测器【CE】
再按下【CE】键返回上级菜单。
检测器【zero】
在检测器工作状态下，按下【zero】键，检测器显示屏上显示0.00AU。
检测器【sleep】
按下检测器【sleep】键，检测器控制面板灯灭，进入睡眠状态。
自动进样器【POWER】
按下自动进样器【POWER】键，自动进样器通电，显示屏进入主界面。
自动进样器【purge】
按下【purge】键，自动进样器进入自动清洗进样口，25min后停止。
自动进样器【edit】
按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单。
自动进样器【enter】
按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单，再按下【enter】键进入进样程序编辑。
自动进样器
【del】
按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单，按下【del】克对编辑好的程序删除。
【CE】
按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单，按下【del】克对编辑好的程序删除，再按下【CE】键返回上级菜单。
【start/stop】
按下【start/stop】键，自动进样器开始按程序设定进样。
自动进样器【sleep】
按下自动进样器【sleep】键，检测器控制面板灯灭，进入睡眠状态。
柱温箱电源键
按下电源开关键，电源键指示灯亮，温度显示屏亮。
柱温箱【◣】
连续按下柱温箱【◣】键温度设置显示屏SV光标在不同的温度位数间闪烁。
柱温箱【▲】
按下柱温箱【▲】温度设定值增加
柱温箱【▼】
按下柱温箱【▼】温度设定值降低
4.2.基本运行功能确认
项目
输液泵基本运行功能确认
按下输液泵【POWER】输液泵通电，输液泵显示屏亮，等待约3秒输液泵显示屏显示主界面，逆时针打开输液泵排气阀【DRAIN】1/2圈，按下【purge】输液泵开始排气，5分钟后自动停止，顺时针拧紧输液泵排气阀再按下【func】键，进入菜单界面，流速光标闪烁，输入1.0，按下【enter】即设置流速为1.0mL/min，按下【CE】键返回，按下【pump】键，输液泵开始以1.0mL/min流速运行。
检测器基本运行功能确认
按下检测器【POWER】键，检测器通电，显示屏亮，进入自检界面，等待约3分钟，检测器显示屏显示主界面，按下检测器【func】键一次，显示波长设置菜单，按下【enter】键，进入波长设置界面，输入254nm再按下【enter】键即设置254nm为检测波长，在检测器工作状态下，按下【zero】键，检测器显示屏上显示0.000AU。
自动进样器基本运行功能确认
按下自动进样器【POWER】键，自动进样器通电，显示屏进入主界面，按下【purge】键，自动进样器进入自动清洗进样口，25min后停止，按下【edit】键，进入自动进样程序编辑菜单，依次输入进样盘号、初始进样瓶号、结束进样瓶号、重复进样次数、进样量、进样时间，按下【enter】键，再按下【CE】键返回，待仪器显示屏显示READY后，按下【start/stop】键，自动进样器开始按程序设定进样。
柱温箱基本运行功能确认
按下电源开关键，再按下柱温箱【◣】键，再【▲】【▼】键设定目标温度35℃，等待一段时间后，柱温箱温度显示屏PV显示温度35℃。
4.3.输液系统确认记录
4.3.1.泵耐压的确认
泵耐压测试
堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值39.2MPa的90%，保持5min无泄漏。
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