纯化水微生物方法学验证方案09年Word文件下载.docx

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目录

1.引言………………………………………………………………………………………..01

2.验证小组及各部门职责…………………………………………………………………..01

3.检验依据…………………………………………………………………………………..01

4.验证准备…………………………………………………………………………………..01

5.操作方法…………………………………………………………………………………..02

6.结果判断…………………………………………………………………………………..04

7.结果统计…………………………………………………………………………………..04

8.结果评定与结论………….……………………………………………………………….04

附表1：

设备确认记录………………………………………………………………………05

附表2：

试验器材确认记录…………………………………………………………………05

附表3：

试验用菌种确认记录……………………………………………………................06

附表4：

培养基确认记录…………………………………………………………………....06

附表5：

试剂确认记录……………………………………………………………....……....07

附表6：

器皿确认记录……………………………………………………………....………07

附表7：

细菌数、霉菌数、酵母菌数计数验证结果原始记录…………………………...…08

1.1概述

不同检品、不同的仪器或材料等均可能对检验结果产生影响，当检品有抑菌性时，会掩盖检品已受污染的事实或造成低于实际污染水平的检测结果；

选用不适当的培养基，其促生长能力不符合要求，也会造成类似的后果。

为了使微生物限度检验方法的结果准确可靠，需要对检品的具体检验方法进行验证，以证明其对检品的适用性。

1.1Overview

Differentsamples,equipmentsanddifferentmaterials，aswellasinappropriatemediathattheGrowth-promotingcapacitydoesnotmeettherequirementsmayhaveanimpactonthetestresults,whenthesampleshaveantimicrobialactivity,itwillcoverupthefactthatinspectedproductshavebeencontaminatedorcausethepollutionlevelslowerthantheactual;

Tomaketheresultsofbioburdentestingaccurateandreliable，themethodsneedtobevalidated，ensuringitsapplicability

1.2目的

建立纯化水微生物限度检查方法。

1.2Objecive

Establishthebioburdentestingmethodforpurifiedwater.

2.验证小组及各部门职责

2.Verificationteam&

Responsibilitiesofvariousdepartments

2.1验证小组

1.负责验证方案的审核；

2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。

2.1ResponsibilitiesofVerificationteam

1.Reviewtheverificationprogram.

2.Coordinationofthevalidationwork,toensurethesmoothimplementationofprojects

2.2质检部

1.负责验证所需的标准品、样品、试剂、试液等的准备；

2.负责取样及对样品的验证；

3.负责验证方案的起草；

4.参与验证过程中OOS的调查。

2.2QC

1.Preparethesamples,reagents,testsolution,Standardsetc.requiredfortheverificationword,

2.3设备动力部

1.对仪器、仪表、量具等进行校正。

2.4质保部

1.负责验证过程监控管理工作；

2.参与验证过程中OOS的调查。

2.5受权人

1.批准验证方案；

2.负责批准放行验证过程中出现的OOS。

2.6验证小组成员

组长：

曹成龙

组员：

郑定、马立如、周超、彭中华、彭艳妃、张淑珍、郭清

2.7验证时间安排

时间

工作内容

2009.03.01～2009.03.03

方案起草、审批

2009.03.04～2009.03.09

标准确认、检验方法确认

2009.03.14

完成报告

3、检验依据

《中国药典》2005年版“微生物限度检查法”

4、验证准备

4.1样品名称：

纯化水

4.2实验用培养基：

营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基（均由中国药品生物制品检定所提供）。

4.3稀释液、冲洗液：

0.9%无菌氯化钠溶液；

pH7.0氯化钠-蛋白胨溶液。

4.4检查所涉及的设备是否符合实验要求，确认结果填写在附表1《仪器确认记录》中。

设备应经验证,在校准有效期内。

4.5检查所涉用试验器材，确认结果填写在附表2《试验器材确认记录》中，试验器材应完整，洁净，无破损，配件齐全。

4.6检查所涉及的试验用菌种是否符合实验要求，确认结果填写在附表3《试验用菌种确认记录》中。

菌种形态特征应良好、菌种代数不得超过第五代。

4.7检查所涉及的培养基是否符合实验要求，确认结果填写在附表4《培养基确认记录》。

培养基应在有效期内。

4.8检查所涉用试剂是否符合实验要求，确认结果填写在附表5《试剂确认记录》中。

试剂级别为AR级，并应在有效期内。

4.9检查所涉用器皿是否符合实验要求。

确认结果填写在附表6《器皿确认记录》中。

一般玻璃器皿要求洁净，无破损，量器要进行校正。

4.10验证用培养基、缓冲液、过滤器、剪刀、镊子应至121℃湿热灭菌30分钟，验证用平皿、刻度吸管应至200℃干热2小时。

5、操作方法

5.1菌液制备：

取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌经32.5±

2.5℃培养18～24小时的新鲜营养琼脂培养基培养物、白色念珠菌经25.5±

2.5℃培养24～48小时新鲜改良马丁琼脂培养基培养物，分别加入0.9%无菌氯化钠溶液10ml洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，与细菌浊度标准管进行比较，得原液估计浓度，再按比浊结果，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至浓度小于100cfu/ml。

取黑曲霉菌经25.5±

2.5℃培养5～7天新鲜改良马丁琼脂培养基斜面培养物，加入0.9%无菌氯化钠溶液10ml洗下孢子吸出，转移至空试管中作为菌悬液原液，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至浓度小于100cfu/ml。

5.2菌液计数：

分别取上述3种细菌菌液1ml加入培养皿，每种菌液作平行2皿。

注入约45℃营养琼脂培养基约18ml，于30～35℃培养。

分别取上述2种真菌菌液1ml加入培养皿，每种菌液做平行2皿。

注入约45oC玫瑰红钠琼脂培养基约18ml，于23～28℃培养。

5.3取样方法：

按取水标准取原料厂区纯化水站、制剂厂区纯化水站、107车间纯化各一个纯化水点为代表做方法学验证，连续做三天，具体取水方法如下表：

取样位置

原料厂区纯化水站

制剂厂区纯化水站

107车间纯化水

取样点

PWA-02

总回水

PWB-02

PWA-14

取样时间

2009年03月04日～2009年03月06日

取样量

每个点每天取1瓶，100ml/瓶。

5.4薄膜过滤：

5.4.1试验组：

取2ml供试液和1ml验证用菌液（含50~100CFU试验菌）置50mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，用封闭式薄膜过滤器滤干，平行制备2张膜，将滤膜菌面朝上贴于营养琼脂培养基或玫瑰红琼脂培养基平板上培养，置规定温度培养24~72小时，测定菌数。

5.4.2供试品组：

取2ml供试液置50mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，用封闭式薄膜过滤器滤干，平行制备2张膜，将滤膜菌面朝上分别贴于营养琼脂培养基和玫瑰红琼脂培养基平板上培养，置规定温度培养24~72小时，测定菌数。

5.4.3菌液组：

测定所加的试验菌数。

5.4.4稀释剂对照组：

用相应的稀释液替代供试品，按试验组的制备方法和菌落计数法测定菌数。

6、结果判断：

稀释剂对照组的菌回收率均应不低于70%。

若试验组的菌回收率均不低于70%，则可按该菌落计数法测定供试品的细菌、霉菌或酵母菌数；

若任一次试验中试验组的菌回收率低于70%，应建立新的方法，消除供试品的抑菌活性，并重新验证。

注：

试验组回收率（%）=（试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数）÷

菌液组平均菌落数×

100%

稀释剂对照组回收率（%）=稀释剂对照组平均菌落数÷

7、结果统计

实验结果填写在附表7《细菌数、霉菌数、酵母菌数计数验证结果原始记录》。

8、结果评定与结论

综合评定内容包括以下方面：

确认试验是否有遗漏；

是否需要进一步补充试验；

确认记录是否完整；

样品预处理方式、检验用器具、材料和培养条件等是否合理；

验证过程是否准确、有效、可靠并具有较好的重现性，验证过程中是否有OOS，OOS的处理是否按要求处理，试验结果是否符合要求。

附表1设备确认结果

仪器名称

型号

校准有

效期至

生产厂家及出厂编号

验证编号

霉菌培养箱

MJ-250-I

上海圣欣科学仪器有限公司（040342）

生化培养箱

LRH-250

上海圣欣科学仪器有限公司（ZB1007）

上海圣欣科学仪器有限公司

（040873）

电热恒温培养箱

DHP-9162

上海一恒科技有限公司

（035184）

脉动真空灭菌柜

GX1.D

山东新华医疗器械股份有限公司（0807002）

非标干热灭菌箱

GM100-I

常州市震华干燥设备有限公司（0807001）

立式压力蒸汽消毒器

628D

铁岭市医疗器械总厂（297）

电子天平

PB602-N

梅特勒-托利多仪器有限公司（1201130089）

检查人/日期：

复核人/日期：

附表2试验器材

名称

来源

检查项目及标准

检查结果

封闭式无菌检查薄膜过滤器

STV2、STV3型

浙江宁海白石药检仪器厂

完整，洁净，无破损

微孔滤膜

孔径0.45μm，

直径50mm

上海亚东核级树脂有限公司

完整，无破损

光学显微镜

YS100

Nikon

各配件应齐全，无损坏

附表3试验用菌种确认结果

菌种名称

菌种代数（不得超过第五代）

形态特征

金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]

中国药品生物制品检定所

枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]

大肠埃希菌[CMCC（B）44102]

白色念珠菌[CMCC（F）98001]

黑曲霉[CMCC（F）98003]

附表4培养基确认结果

培养基名称

批号

有效期至

营养琼脂

培养基

应在有效期内

玫瑰红钠琼脂培养基

附表5试剂确认结果

试剂名称

规格

批号

来源

氯化钠

500g/瓶

广州化学试剂厂

1.应为AR级试剂

2.应在有效期内

磷酸二氢钾

磷酸氢二钠

蛋白胨

250g/瓶

氢氧化钠

新洁尔

灭溶液

500ml/瓶

江门市恒健药业有限公司

附表6

器皿确认结果

容器名称

规格型号

检查项目

及标准

培养皿

Φ9cm

洁净，无破损

锥形瓶

500ml、250ml、100ml

烧杯

5000ml、1000ml、100ml

试管

18mm×

180mm、30mm×

200mm

刻度吸管

10ml、5ml、2ml

量杯、量筒

1000ml、100ml、50ml

洁净，无破损，应校正

附表7

细菌数、霉菌数、酵母菌数计数验证结果原始记录

检品名称：

验证日期：

试验菌种

试验组

（检品+验证加数）

菌液组

（验证加菌数）

供试品组

（检品本底菌数）

稀释剂对照组（稀释剂+验证加菌数）

试验组菌回收率%

稀释剂对照组菌回收率%

皿1

皿2

平均

金黄色葡萄球菌

原料厂区纯化水站总回水（PWA-02）

制剂厂区纯化水站总回水（PWB-02）

107车间纯化水站总回水（PWA-14）

大肠埃希菌

/

枯草芽孢杆菌

白色念珠菌

黑曲霉菌

备注：

试验组的回收率（%）=（试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数）÷

菌液组的平均菌落数×

稀释剂对照组的回收率（%）=稀释剂对照组的平均菌落数÷

回收率应不低于70%

检验人/日期：