大学生创新创业训练项目申请书羊肚菌菌种制备与栽培技术的研究Word文档下载推荐.docx
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如果获得资助，我与本项目组成员将严格遵守学校的有关规定，并按计划认真开展研究工作，在项目研究过程中或结束时，接受学校对本项目的中期检查和结题验收，并按时提交工作总结和结题报告。
申请者（签名）：
成员（签名）：
年月日
一、基本情况
项目
名称
羊肚菌菌种制备与栽培技术的研究
所属
学科
生物学
起止年月
XX年XX月至XX年XX月
主持人
姓名
性别
男
民族
汉
出生年月
XX年X月
学号
XXXX
联系
电话
XXXXX
指导
教师
XXXX
主持人曾经参与科研的情况
无
指导教师承担科研课题情况
XXXX。
指导教师对本项目的支持情况
为学生项目实施提供技术指导、实验场所和实验器材。
组
主要
成
员
姓名
所在学院
专业班级
联系电话
邮箱
XXX
二、项目研究的目的和主要研究内容
1、研究目的
由于羊肚菌营养价值高，在食品和医药领域具有广阔的市场需求，其主要来源于野生资源，远不能满足市场需求，而目前羊肚菌人工栽培技术没有一个有效的突破，成为羊肚菌人工种植的一个技术瓶颈。
本研究将以野生羊肚菌为原料，对其进行菌种的制备，筛选出优良的菌种，并进一步进行栽培技术的研究，以期在温室中完成从菌种制备到栽培技术的这个难题。
2、研究内容
本课题的研究内容主要包括羊肚菌菌种的分离、羊肚菌人工栽培技术的研究以和如何提高栽培的成功率。
2.1羊肚菌的菌种分离
菌种的分离方法主要是通过对子实体的组织分离，可以对菌柄或者菌盖进行分离；
然后在进行一系列的消毒措施，可以用0.2%的升汞溶液或者75%的乙醇溶液进行浸泡消毒，之后再用无菌水漂洗数次，其中在升汞或乙醇溶液中的浸泡时间要控制，不能对子实体的活性造成影响；
最后接种于PDA培养基中，在25℃下恒温培养，并定期观察菌丝生长情况。
为了探索上述科学问题，申请者将对野生的羊肚菌进行不同部位的分离，经消毒、漂洗等一系列的措施后，进行恒温培养，并定期观察，对出现的问题进行分析，进一步研究菌种分离的新技术。
2.2羊肚菌的栽培
羊肚菌是一种低温型菌类，适宜温度较低的地区栽培，气温在22℃以下15℃以上即可栽培，多数在10月份是栽培的好时间，适宜菌丝生长发育，遇低温季节有利羊肚菌的生理变化。
翌年3份气温逐渐回升，子实体开始大量形成。
为了探索上述科学问题，申请者将选取合适的母种，采用袋装栽培技术，将母种进行培养至原种，然后在适宜的环境条件下培养至栽培种，进行袋装栽培，并定期的观察研究生长过程中的出现的一些现象和问题，并对这些问题进行分析，研究出更加合理的栽培方案。
二、国、内外研究现状和发展动态
1、羊肚菌的种类和生态环境
1.1、羊肚菌的种类
EmikJacouetant教授在《LesMorilles》（1984）一书中记载，羊肚菌属共有28个种。
，分布于亚州、欧州、北美州和大洋州等国家。
《中国真菌总汇》记入8种羊肚菌。
但根据目前报道资料统计，我国现有羊肚菌12个种:
小顶羊肚菌（黑脉羊肚菌、黑羊肚菌）MorchellaangusticepsPeck、尖顶羊肚菌（圆锥羊肚菌、羊肚子、阳雀菌、蘑菇菌、鸡足磨菇）M.conicaPers.、粗柄羊肚菌（粗腿羊肚菌、皱柄羊肚菌）M.crassipes（Vent）Pers.exFr.、小羊肚菌（美味羊肚菌、鲜羊肚菌、阳雀菌、狼肚菌）M.deliciosaFr.、羊肚菌（圆顶羊肚菌、羊肚子、编笠菌、可食羊肚菌）M.esculenta（L.）Pers.、普通羊肚菌M.vulgaris（Pers.）Boud、高羊肚菌M.elataFr.、硬羊肚菌M.rigidaKrombh.、开裂羊肚菌M.distansFr.、褐赫羊肚菌M.umbrina、白羊肚菌M.Morchellasp、紫变羊肚菌M.purpurascens。
分布于我国的西北、西南、华中、华北、华东、华南等地。
其中M.esculenta、M.deliciosa、M.conica、M.angusticeps、M.crassipes是比较常见的食用菌[1]。
1.2、羊肚菌的生态环境
1.2.1、土壤和植被
羊肚菌多生长在阔叶林或针阔混交林的腐殖质层上。
发生的土壤类型有黑壤土、山地灰褐森林土、沙壤土、黄壤土等[2]。
羊肚菌也常发生在火烧地上。
1.2.2、气候
羊肚菌子实体的生长季节在每年的3～5月和8～9月，当时气温达10～20℃，地表温度达12～24℃，月降水量一般35～60mm[3，4]。
所以，羊肚菌是在低温、高湿条件下萌发子实体的。
有研究表明，羊肚菌的野外发生条件主要取决于上年度11月的降雨量，而当年羊肚菌发生的迟早取决于当年春季5cm表层土壤温度是否稳定通过11.5℃。
[2]
1.2.3、形态特征
羊肚菌的菌丝体呈白色，有分隔，分隔处有缢缩，隔膜上有孔洞，多核，无锁状联合，异宗接合，常产生菌核（一种坚硬的、无性细胞团，是羊肚菌的营养贮藏器官，在休眠阶段可使其渡过不良的气候条件），尚未发现有分生孢子或其他无性孢子出现。
菌丝有短茸毛和颗粒状2种类型。
颗粒状菌丝可能是营养衰竭或不良外界条件的应变形态。
羊肚菌子实体的菌盖近球形或圆锥形，边缘全部与柄相连，表面起伏成蜂窝状网棱纹，因其形状像羊肚而被称为羊肚菌。
菌柄内部空心，外面平整或有凹槽，颜色从灰白到深褐色，子实体沿菌盖下陷部分生长。
子囊呈圆柱形，每个子囊含8个子囊孢子，单行排列，子囊之间有长的侧丝，子囊孢子呈卵圆形。
2、羊肚菌的菌种分离
菌种分离是在无菌条件下将所需要的食用菌与其他微生物分开，在适宜的条件下培养以获得纯培养的过程。
分离纯化得到的纯培养即是母种，母种的培育制种的关键，也是食用菌生产的关键。
母种可由孢子萌发而成，也可从子实体组织分离或用斜面菌的菌丝体一节扩增而得。
2.1、孢子分离法
孢子分离法是用食用菌成熟的有性孢子（担孢子或子囊孢子）在适宜的培养基上萌发成菌丝体而获得的纯培养的方法，孢子分离法的程序:
选择种菇→种菇消毒→采收孢子→接种→培养→挑菌落→钝化菌种→母种。
2.2、组织分离法
切去子实体、菌核、菌索内部组织获得纯培养的方法都属于组织分离法。
2.3、菇木分离法
食用菌繁殖盛期已经长过子实体的菇木上，选择出菇良好，无病虫害的菇木晾干，截取2cm长的小段，放在0.1%氯化汞中浸1min，再用无菌水冲洗2～3次，吸干水分，或通过酒精灯火焰重复镣铐几次，用75%酒精表面消毒。
然后用解剖刀把木段四周切去，再把木段切成火柴枝大小的木枝，每木枝去两头，接入PDA培养基上在适当条件下3～5d长出菌丝体，即得母种，以上必须无菌操作。
2.4、培养料分离法
选择子实体发生早、产量高、无病虫害的移栽袋，待子实体长到成熟度80%时去掉子实体，然后用75%酒精消毒整个栽培袋，同时将接种工具和接种培养料一起放入接种袋，用甲醛熏蒸消毒。
分离时去掉袋料表面老菌丝，用接种针挑取小块长有菌丝的培养料，接入试管内，适宜温度下培养。
选取菌丝良好的试管转管纯化。
[5]
3、羊肚菌的栽培
羊肚菌为野生真菌，其产量受季节、气侯等因素的制约。
所以，一百多年来，羊肚菌的人工栽培研究，一直是真菌学家和业余爱好者最感兴趣的课题之一。
虽有人工栽培成功的报道，但试验的重复性仍较差，大面积栽培还有待进一步研究之[1]。
3.1、室外栽培
Barondyvoire（1898）在5、6月把羊肚菌子实体（组织块）接种到菊芋畦中，秋天在菊芋茎基四周施放苹果渣，1～2周后，再盖上枯枝落叶。
翌年春天，除去枯枝落叶，在比较潮湿的条件下，羊肚菌菌丝体在这种基质中蔓延生长。
其后年年产生子实体。
刘波（1953～1954）4月中旬在山西羊肚菌产区的自然条件下，进行了新鲜菌丝体人工栽培实验，并获得完全正常的第二代子实体。
他的实验结论之一是子实体组织块分离到的菌丝体移到自然条件下可以产生子实体。
陈惠群（1995）采用层播、从1991年冬季开始播种、野外栽培尖顶羊肚菌，连续三年均获成功。
试验面积由10m2大到40m2，单位产量最高达212朵/m2[6]。
罗凡（1995）报道，四川省青川县菇农从1990年起开始探索羊肚菌的人工栽培技术，通过摸拟野生羊肚菌的生境，已成功地培养出了子实体，有的单产达40朵/m2。
在清溪菌种场曾发现一特大型丛生羊肚菌，其由64朵组成，鲜重达1.825kg，是采用山上熬过香樟油后的经自然堆制的樟木渣作栽培原料人工栽培而成的[7]。
董淑凤（1995）野外栽培美味羊肚菌仅获8株硕大的子实体。
她认为菌核是转化为子实体的重要时期，也是营养阶段处于恶劣条件的标志。
菌核在外界适宜的条件下就转变为子实体。
当外界条件不适宜时，菌核就会老化，致使羊肚菌的人工栽培不易成功。
3.2、室内栽培
早在1889年，Baron即在用苹果渣和菊芋堆制而成的菌床上，用羊肚菌子实体的碎块作菌种栽培过羊肚菌。
其后，Molliard（1904，1905）用苹果渣，Matruchat（1909，1910）用废纸浆和腐木混合物以类似方法栽培羊肚菌，都获得了羊肚菌的子实体。
RonOwer（1982）首次报道栽培M.esculenta获得成功。
并与G.Mills和J.MalaChowski于1986和1988申请并获得M.esculenta的栽培专利[8]。
朱斗锡（1993）人工栽培羊肚菌成功，并获国家专利[9]。
综上所述，羊肚菌已可以进行人工栽培，只是栽培的要点、关键技术尚未完全掌握，导致人工栽培的时成时败。
4、发展动态
我国羊肚菌资源丰富，目前在20多个省、市、自治区都发现了羊肚菌的踪迹。
由于羊肚菌具有较高的食用药用价值，其子实体栽培技术尚不成熟，而天然资源有限，导致供需不平衡，市场价格居高不下[10]。
所以人工栽培是解决羊肚菌紧俏的出路，实现羊肚菌商业化、工厂化生产无疑是真菌学家急需攻克的难题。
为解决这一问题，除了要合理保护、利用、开发天然资源，如调查新的羊肚菌资源，对国内羊肚菌进行资源调查、分类方面的研究，开展羊肚菌的分子分类学研究和分子地理学的研究等，还需要深入研究羊肚菌的人工栽培技术，实现其工业化和商业化的生产。
羊肚菌菌丝是一种易获得的可利用资源，因此，应加强菌丝的应用开发。
改进发酵条件，促使发酵过程朝提高目的产物的方向进行，提高产物品质，降低发酵成本，是液体发酵研究的方向。
目前，对羊肚菌多糖的纯化研究尚不够深入。
提取、开发和利用其有效成分，特别是抑癌物质，具有广阔的前景[11]。
参考文献
[1]任桂梅,张少刚.羊肚菌的研究进展[N].延安大学学报:
自然科学版,1999-3（18）.
[2]谈峰,胡加如,汪凯华.羊肚菌野生生态条件调查研究[J].食用菌,1999（6）:
2.
[3]任桂梅,张少刚.羊肚菌的研究进展[N].延安大学学报:
自然科学版,1999,18
（1）:
57-64.
[4]谢占玲,谢占青.羊肚菌研究综述[N].青海大学学报:
自然科学版,2007,25
（2）:
36-40.
[5]江微,杨江华,李川.食用菌菌种分离研究进展[J].农技服务,2009,26（7）:
161-162.
[6]陈惠群等,羊肚菌子实体生理特性研究,
（二）,食用菌,1997,
（2）6-7.
[7]罗凡,青川羊肚菌资源和其生态环境,食用菌,1995,（增）:
7-8.
[8]Ower.R.（1982）NotesonthedevelopmentoftheMoredascocarp.Morchellaesculenta,1974
（1）:
142-143.
[9]朱斗锡,羊肚菌的生态研究,中国食用菌,1992,11（5）:
22.
[10]朱林,程显好,田吉腾.羊肚菌的研究进展[J].安徽农业科学.2008,36（10）:
4054-4057.
[11]陈向东,朱戎,兰进.羊肚菌研究进展[J].食用菌学报.2002.9
（2）:
56～61.
四、项目的创新点和特色
1、在实验室中完成野生羊肚菌菌种分离和纯化工作。
2、探讨实验室栽培羊肚菌的适宜条件。
3、在实验室中开展更经济可行的羊肚菌的栽培方式。
五、技术路线、拟解决的问题和预期成果、提交方式
1、羊肚菌的菌种分离
1.1羊肚菌的选取：
选择几株长势良好，无损坏的羊肚菌。
1.2羊肚菌的消毒：
将准备好的羊肚菌在清水中微微的清洗一下，去除表面的脏东西和泥土，然后进行消毒：
将羊肚菌用消过毒的剪刀从中间竖直剪开，取其中一半浸泡在0.1%的升汞溶液中20秒（事先配制好），溶液浸没过羊肚菌即可，然后立即用消过毒的镊子夹取放入无菌水中，漂洗两次；
在用镊子夹取放入75%的乙醇溶液中，浸泡30秒，然后在用无菌水漂洗三次，即可成功消毒。
1.3羊肚菌不同部位的组织培养：
在超净工作台上用消毒后的剪刀将消毒后的羊肚菌剪取菌柄、菌伞、菌根三个部位，在分别对三个部分剪成四份，在酒精灯火焰上方用灭菌后的镊子分别夹取放入编号为1、2、3的培养基上（分成四个区域），1、2、3分别代表菌柄、菌伞、菌根。
然后放入28℃恒温培养箱中培养3~4天，并每天观察培养的情况。
2、羊肚菌的栽培
羊肚菌的袋装栽培工艺流程为：
栽培场地的准备→培养料的调配→装袋灭菌→接种→菌丝培养→脱袋转色→出菇管理→采收。
3、需要解决的问题
由于羊肚菌的生长对周围的环境要求非常苛刻，土壤的湿度、温度、pH、光照等都是栽培中所需要解决的问题。
六、项目研究进度安排
2015年5月~2015年10月：
采集野生健康羊肚菌完整个体；
对所采集的羊肚菌进行消毒，菌种分离，得到羊肚菌母种。
2015年11月~2016年4月：
用得到的母种培养至原种；
将原种接种到培养种；
将栽培种放入实验室进行培养。
2016年5月~2017年4月：
观察培养过程中出现的现象和问题，探索出羊肚菌栽培的适宜条件；
完成结项报告撰写、结题。
七、已有基础
1、与本项目有关的研究积累和已取得的成绩
本课题组所有成员在高中的学习时就已经对生物学科有很强的兴趣，现在就读于大学二年级食品质量与安全专业，对一些食用菌和药用菌很感兴趣，总想探究一些新的研究项目，提高自己的实验基础技能和专业知识，同时也想得到一个践行严谨的科学态度的精神，探索科学现象。
2、已具备的条件，尚缺少的条件和解决方法
无
八、经费预算
开支科目
预算金费（元）
主要用途
预算经费总额
10000
试剂与实验耗材
8000
购买化学试剂和制作培养基各种原材料
打印费、信息费
1000
资料文献打印和信息查询
交通费
采集样品
学校批准经费
九、指导教师意见
楚治康同学在校学习成绩良好，在保证完成专业学习的基础上，结合专业实践进行文献资料查询选题工作，选定《羊肚菌菌种制备与栽培技术的研究》。
该课题选题新颖，具有一定的应用价值。
本人愿为该项目组提供技术指导和实验场所。
签字：
日期：
十、学院意见
负责人签字：
（盖章）日期：
十一、学校意见
主管部门盖章：
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