常用pH缓冲液配置方法及注意事项之欧阳美创编Word格式.docx
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6.8
8
硼酸-氯化钾-氢氧化钠
把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与4.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
8.0
9
氯化铵-氨水
把0.1mol/L氯化铵与0.1mol/L氨水以2：
1比例混合均匀
9.1
10
把25.0ml0.2mol/L的硼酸-氯化钾与43.9ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
10.0
11
氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠
把49.0ml0.1mol/L氨基乙酸-氯化钠与51.0ml0.1mol/LNaOH混合均匀
11.6
12
磷酸氢二钠-氢氧化钠
把50.0ml0.05mol/LNa2HPO4与26.9ml0.1mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
12.0
13
氯化钾-氢氧化钠
把25.0ml0.2mol/LKCl与66.0ml0.2mol/LNaOH混合均匀，加水稀释至100ml
13.0
一、常用溶液的配制
（一）溶液配制注意事项
1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteedreagent，G．R．）、分析试剂（Antalyticalreagent，A．R．）化学纯（Chemicalpure，C．P．）和实验试剂（Laboratoryreagent，L．R．）等等。
工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。
2．药品称量要精确。
3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在5.5~7.0之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。
４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。
（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸缓冲液
1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：
称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。
2．1/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：
称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，A.R.）9.47g（或者Na2HPO4·
2H2O11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。
3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。
附表1磷酸盐缓冲液配制法（单位：
毫升）
pH
1/15Mol/LNa2HPO4
1/15Mol/LKH2PO4
5.8
92.0
7.1
66.6
23.4
5.9
9.9
90.1
7.2
72.0
28.0
6.0
12.2
87.8
7.3
76.8
23.2
6.1
15.3
84.7
80.8
19.2
6.2
18.6
81.4
7.5
84.1
15.9
6.3
22.4
77.6
7.6
87.0
6.4
26.7
73.3
7.7
89.4
10.6
6.5
31.8
68.2
7.8
91.5
8.5
6.6
37.5
62.5
7.9
93.2
6.7
43.5
56.5
8.8
94.7
5.3
49.6
50.4
8.1
95.8
4.2
6.9
55.4
44.6
8.2
97.0
3.0
7.0
61.1
38.9
8.4
98.0
2.0
（三）0.15Mol/LPB液
附表20.15Mol/LPB液配制法
0.15Mol/LNa2HPO4（ml）
0.15Mol/LNaH2PO4（ml）
26.5
73.5
49.0
51.0
61.0
39.0
7.4
81.0
19.0
Na2HPO4·
2H2O分子量=175.050.15Mol/L溶液含26.7g/L。
12H2O分子量=358.220.15Mol/L溶液含53.7g/L。
NaH2PO4·
H2O分子量=138.000.15Mol/L溶液含20.7g/L。
2H2O分子量=156.030.15Mol/L溶液含23.4g/L。
（四）0.2Mol/LPB缓冲液
附表30.2mol/LPB缓冲液配制法
0.2Mol/LNa2HPO4（ml）
0.2Mol/LNaH2PO4（ml）
12.3
87.7
18.5
81.5
0.2Mol/LNa2HPO4·
2H2O溶液35.61g/L
12H2O溶液含71.64g/L
0.2Mol/LNaH2PO4·
H2O溶液含27.60g/L
2H2O溶液含31.21g/L
欲配0.1Mol/LPB缓冲液则在0.2Mol/LPB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。
欲配制PBS液时，则在溶液中加0.85％的NaCl溶液即可。
（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）
（0.15Mol/LPH7.2）
NaCl8.0g
KCl0.2g
Na2HPO41.15g
（如为Na2HPO4·
12H2O，则为2.89g）
KH2PO40.2g
将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。
此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
（六）硼酸盐缓冲液（Boratesalinebuffer）
1．硼酸（Ｈ3BO3）
0.2Mol/L硼酸：
硼酸12.37g加水至1000ml。
2．硼砂（Na2B4O7）
0.05Mol/L硼砂：
硼砂19.07g加水至1000ml。
附表4不同pH的0.2Mol/L硼酸缓冲液配制法
0.05Mol/L硼砂（ml）
0.2Mol/L硼酸（ml）
1.0
9.0
3.5
1.5
4.5
5.5
8.7
4.0
（七）巴比妥缓冲液
1．pH8.2离子强度0.05Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥钠47.6g
蒸馏水3000ml
1.17NHCl55.0ml
（1.17NHCl=193ml浓HCl加1807ml蒸馏水）
⑴将4.76g巴比妥钠溶于3000ml蒸馏水。
⑵加1.17NHCl55ml。
⑶用HCl调节pH到8.2，并加蒸馏水至4265ml。
2．pH8.40.06Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥1.84g
巴比妥钠10.30g
加蒸馏水至1000.00ml
3．pH8.60.06Mol/L巴比妥缓冲液
巴比妥1.66g
巴比妥钠12.76g
加蒸馏水1000.00ml
（八）0.2Mol/L醋酸盐缓冲液见表附表5
附表50.2Mol/L醋酸盐缓冲液配制法
0.2Mol/L
Tris（ml）
0.1Mol/L
HCl（ml）
23℃
37℃
9.10
8.95
25
8.06
7.90
27.5
8.92
8.76
7.96
7.82
30.0
8.75
8.60
10.5
7.87
7.73
32.5
8.62
8.48
12.5
7.77
7.63
35.0
8.50
8.37
15.5
7.66
7.52
8.40
8.27
17.5
7.54
7.40
40.0
8.32
8.18
20.0
7.36
7.22
42.5
（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）
不同pH，0.05Mol/L
25ml0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷加хml0.1NHCl，加水稀释至100ml（见下表）
附表6Tris—HCl缓冲液配制法
0.1NHCl
（ml）
8.96
8.05
8.78
8.74
15.0
8.23
8.10
22.5
7.20
7.05
45.0
8.14
8.00
25.0
三羟甲基氨基甲烷（Tris）
分子量=121.14
0.2Mol/L三羟甲基氨基甲烷：
Tris24.23g，加水至1000ml。
0.1NHCl：
取HCl8.6ml，加水至1000ml。
（十）0.5Mol/LpH9.5碳酸盐缓冲液
NaHCO33.70g
Na2CO30.60g
溶于600.00ml蒸馏水中即得。
不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。
最好小量配制。
（十一）甘油磷酸缓冲液
1．配制pH8.0磷酸缓冲液
0.1Mol/LNa2HPO494.50ml
0.1NNaH2PO45.50ml
混合即可
2．9份甘油与1份pH8.0磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。
用途：
用于免疫荧光试验。
（十二）Hank’s液
1．贮存液
NaCl80.00g
KCl4.00g
12H2O1.52g
KH2PO40.60g
葡萄糖4.00g
0.4％酚红液50.00ml
双馏水加至100.00ml
115℃高压灭菌15min，冰冻保存。
2．工作液
贮存液1份
双馏水9份
115℃高压灭菌15min。
临用时用灭菌的5.6％NaHCO3液调pH值至7.2左右（溶液呈橙红色）。
（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’sreagent）
配方1：
氯化汞6.0g
碘化钾12.4g
20％NaOH30ml
加蒸馏水至100ml
配方2：
碘化汞11.5g
碘化钾8g
蒸馏水50ml
（完全溶解后）过滤，加20％NaOH50ml。
检测溶液中氨离子。
（十四）阿氏（Alsever’s）液
葡萄糖2.05g
柠檬酸钠0.80g
氯化钠0.42g
蒸馏水100ml
溶解后，以10%柠檬酸调节pH至6.1，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。
（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）
青霉素（40万U）5支
链霉素（200万μg）1支
分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。
临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。
（十六）洗液（清洁液）
重铬酸钾150g
蒸馏水300ml
浓硫酸3000ml
将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。
此为强洗液。
盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。
洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。
如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。
浓硫酸50%
蒸馏水50%
重铬酸钾5%
此为中等强度洗液。
配方3：
重铬酸钾100g
蒸馏水1000ml
加热溶解，冷却后缓慢加入
工业硫酸100ml
此液为弱洗液，为棕红色。
使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效。
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