最佳呼吸机设置的生理和病理学基础.ppt

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1为pBIND，2为pEGFP-N1，M为DNA100bpladderMarker67bp34bp第四军医大学西京医院心血管外科研究内容研究内容M1234图5.纳米微囊及质粒DNA电泳图。

M为marker，1、3分别为pEGFP-N1，pBIND质粒DNA，2、4分别为含pEGFP-N1/pBIND的纳米微囊第四军医大学西京医院心血管外科壳聚糖壳聚糖DNADNA在在77217721肝癌细胞中的表达肝癌细胞中的表达研究内容研究内容第二部分第二部分第四军医大学西京医院心血管外科实实验验方方法法研究内容研究内容细胞培养与细胞爬片制作SMMC-7721细胞0.25胰酶消化，加1-2滴至12孔板中的盖玻片上，37孵箱放置1h，使细胞贴壁第四军医大学西京医院心血管外科研究内容研究内容用壳聚糖质粒（pEGFP-N1）纳米微囊转染，以脂质体LipofectamineTM2000包裹相同的质粒作为阳性对照转染第四军医大学西京医院心血管外科检测报告基因表达情况DAPI溶液染色荧光显微镜下观察在同一视野下，分别计数绿色荧光蛋白表达的细胞数和DAPI染色的细胞数，计算转染率研究内容研究内容第四军医大学西京医院心血管外科统计学分析：

所得数据处理用SPSS11.5统计软件进行统计学处理，用两样本均数比较的t检验p0.05为差异有统计学意义研究内容研究内容第四军医大学西京医院心血管外科实实验验结结果果图6.7721细胞中GFP的表达200图7.7721细胞DAPI染色200研究内容研究内容第四军医大学西京医院心血管外科表表1壳聚糖组和脂质体组的转染率（）壳聚糖组和脂质体组的转染率（）壳聚糖组脂质体组58.354.760.42.2*55.61.6分组视野2转染率值*p0.05vs脂质体组SS研究内容研究内容视野3视野162.860.257.554.6第四军医大学西京医院心血管外科讨讨论论本实验结果提示壳聚糖体外转染的效率略高于转染试剂脂质体，说明壳聚糖是一种有效的体外转染材料,为下一步体内实验打下良好的基础研究内容研究内容第四军医大学西京医院心血管外科壳聚糖肝靶向性基因转导体内实验研究内容研究内容第三部分第三部分第四军医大学西京医院心血管外科实实验验方方法法实验动物与分组研究内容研究内容杂种犬6只，第四军医大学实验动物中心随机分为2组实验组注射壳聚糖质粒纳米微囊对照组仅注射裸质粒第四军医大学西京医院心血管外科术前准备研究内容研究内容手术前1d静脉注射氯化钆，清除Kupffer细胞第四军医大学西京医院心血管外科研究内容研究内容图8.动物手术示意图第四军医大学西京医院心血管外科图9.动物手术图示，A为解剖肝门部，B为注射壳聚糖-DNA复合物研究内容研究内容AB第四军医大学西京医院心血管外科研究内容研究内容48h后处死动物，取肝、心、脾、肺、肾组织，作冰冻切片滴少许甘油碳酸盐缓冲液，放置盖玻片。

置于荧光显微镜下，观察绿色荧光蛋白的表达情况第四军医大学西京医院心血管外科研究内容研究内容实实验验结结果果图10.肝组织中GFP的表达，可观察到黄绿色荧光200第四军医大学西京医院心血管外科A.心B.肺D.脾C.肾图11.其他组织无阳性荧光表达200第四军医大学西京医院心血管外科壳聚糖（chitosan）的优点资源丰富生物可降解性无免疫原性靶向性保护DNA免受DNase的降解研究内容研究内容讨讨论论第四军医大学西京医院心血管外科图12.壳聚糖具有肝靶向性的原理示意图研究内容研究内容第四军医大学西京医院心血管外科关于壳聚糖在大型动物体内的基因转导，国内外尚无文献报道壳聚糖通过纳米微囊表面携带的正电荷与细胞膜上携带负电荷的糖蛋白及磷脂的相互作用引发细胞胞吞作用而进入细胞。

而且，壳聚糖能包裹、浓缩DNA，使DNA免受DNase的降解研究内容研究内容第四军医大学西京医院心血管外科经肝动脉和门静脉注射的给药途径，临床上有可行性如果用适当的功能基因替换报告基因,预期相应的基因也可以表达,并可能达到一定的治疗效果研究内容研究内容第四军医大学西京医院心血管外科小小结结本实验以壳聚糖与质粒制备成纳米微囊复合体，体外转染7721细胞，结果表明壳聚糖有较高的体外转染效率体内实验通过肝动脉、门静脉联合给药，在肝检测到较高的绿色荧光蛋白表达水平首次在大型动物体内完成壳聚糖介导的外源性基因表达小小结结第四军医大学西京医院心血管外科致致谢谢衷心感谢我的导师窦科峰教授在学习生活过程中的照顾和教导感谢陈勇教授在实验过程中的指导和帮助感谢肝胆外科各位专家教授和老师们在临床工作中的指导和帮助感谢新加坡约翰霍普金斯大学毛海泉教授及其学生对实验的帮助衷心感谢病理实验室、动物实验中心、肝胆外科实验室的老师、同学们对实验的帮助致致谢谢第四军医大学西京医院心血管外科