万花木的化学成分研究文档格式.docx

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截止目前，有关万花木中化学成分研究的报道很少，陈梦菁[2]从该植物中分离得到了二十九烷，蒲公英萜醇乙酸酯，β-香树指醇，β-香树指醇乙酸酯，β-谷甾醇；

田晋，徐芳[3-4]从该植物的乙酸乙酯部位中分离得到了20个化合物，主要为倍半萜类、二萜类、三萜类以及黄酮类化合物。

在对万花木中化学成分的进一步研究中，作者从该植物中分离得到了8个倍半萜类化合物（1～8）和4个黄酮类化合物（9～12），除化合物8外，其他化合物均为首次从该属植物中分离得到。

对化合物8的降血糖活性进行了研究，发现化合物8可较好地降低四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖升高的水平。

　　1材料

　　Nicoletimpact400型傅立叶变换红外光谱仪；

VarianInova-400/500核磁共振仪（以溶剂峰信号作为参照）；

Agilent1100SeriesLC/MSDTrap-SP型质谱仪；

柱色谱硅胶（200～300目）及薄层色谱硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；

MCICHP20/P120（日本三菱公司），葡聚糖凝胶SephadexLH-20（瑞典AmershamPharmacia公司）；

高效液相色谱仪ShimazuLC-16（日本岛津公司），分析柱YMCC18柱（4.6mm×

250mm，5μm），半制备柱YMCC18柱（10mm×

250mm，5μm）。

　　万花木于2009年5月采自河北兴隆县南天门乡，由中国医学科学院药物研究所马林副研究员鉴定为万花木M.dioica，标本存放于沈阳医学院基础医学院化学教研室（No.201301）。

　　2提取与分离

　　将20kg干燥的万花木地上部分剪碎后，用95%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液，浓缩得浸膏1.2kg。

取1.0kg浸膏用2.0kg硅胶拌样，干燥后过20目筛，装入索式提取器，依次用不同溶剂回流提取，分别得到石油醚（66.8g）、氯仿（252.2g）、乙酸乙酯（60.0g）和甲醇（420.0g）4个提取部位。

　　取甲醇提取部位380.0g分散于4L水中，经D101大孔吸附树脂柱色谱，分别用水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇和95%乙醇梯度洗脱，得到5个组分Fr.1～Fr.5。

组分Fr.4经MCI柱色谱除去色素后，采用中压C18反相柱色谱进行分离，甲醇-水梯度洗脱（50%～100%甲醇，流速10mL?

min-1），得到6个组分Fr.4.1～Fr.4.6。

其中组分Fr.4.4经半制备HPLC纯化得到化合物11（6.9mg）和12（5.7mg）；

组分Fr.4.5经半制备HPLC纯化得到化合物4（5.3mg），5（5.8mg），6（3.9mg），7（4.8mg），8（22mg）；

组分Fr.5采用中压C18反相柱色谱进行分离，甲醇-水梯度洗脱（70%～100%甲醇，流速10mL?

min-1），得到4个组分Fr5.1～Fr.5.4。

其中组分Fr5.3经半制备HPLC纯化得到化合物9（4.1mg）和10（3.4mg），组分Fr5.4经半制备HPLC纯化得到化合物1（5.5mg），2（6.3mg），3（4.6mg）。

　　3结构鉴定

　　化合物1白色粉末，EI-MSm/z262[M]+?

，分子式为C15H18O4；

IR（KBr）cm-1：

3460，1758，1680；

1H-NMR（CDCl3，400MHz）δ：

6.55（1H，brt，J=8.4Hz，H-1），5.15（1H，d，J=10.0Hz，H-5），4.82（1H，d，J=10.0Hz，H-6），5.48（1H，d，J=3.6Hz，H-13a），6.15（1H，d，J=3.6Hz，H-13b），9.42（1H，brs，H-14），4.10（1H，d，J=12.8Hz，H-15a），4.45（1H，d，J=12.8Hz，H-15b）；

13C-NMR（CDCl3，100MHz）δ：

153.6（C-1），27.3（C-2），33.2（C-3），142.0（C-4），127.7（C-5），79.6（C-6），46.0（C-7），22.0（C-8），24.3（C-9），144.8（C-10），140.8（C-11），170.3（C-12），118.2（C-13），196.0（C-14），60.4（C-15）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[5]进行对照，鉴定化合物1为8-desoxyurospermalA。

　　化合物2淡黄色粉末，ESI-MSm/z269[M+Na]+，分子式为C15H18O3；

4.53（1H，m，H-3），4.06（1H，t，J=9.2Hz，H-6），6.16（1H，d，J=3.2Hz，H-13a），5.46（1H，d，J=3.2Hz，H-13b），4.95（1H，brs，H-14a），4.90（1H，brs，H-14b），5.42（1H，brs，H-15a），5.29（1H，brs，H-15b）；

43.9（C-1），38.7（C-2），73.2（C-3），152.7（C-4），45.4（C-5），83.7（C-6），49.6（C-7），28.8（C-8），32.6（C-9），147.8（C-10），139.6（C-11），170.3（C-12），120.2（C-13），115.2（C-14），110.9（C-15）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[6]进行对照，鉴定化合物2为zaluzaninC。

　　化合物3白色粉末，ESI-MSm/z267[M+Na]+，分子式为C15H16O3；

4.03（1H，t，J=9.6Hz，H-6），6.30（1H，d，J=3.2Hz，H-13a），5.59（1H，d，J=3.2Hz，H-13b），4.95（1H，brs，H-14a），4.60（1H，brs，H-14b），6.25（1H，d，J=3.2Hz，H-15a），5.87（1H，d，J=3.2Hz，H-15b）；

39.6（C-1），44.5（C-2），204.4（C-3），144.5（C-4），48.4（C-5），86.7（C-6），44.0（C-7），31.5（C-8），38.1（C-9），148.2（C-10），138.6（C-11），169.6（C-12），121.9（C-13），113.5（C-14），121.3（C-15）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[7]进行对照，鉴定化合物3为dehydrozaluzaninC。

　　化合物4淡黄色粉末，ESI-MSm/z447[M+K]+，分子式为C21H28O8；

1H-NMR（DMSO-d6，400MHz）δ：

4.48（1H，m，H-3），4.11（1H，t，J=9.6Hz，H-6），6.00（1H，d，J=3.2Hz，H-13a），5.57（1H，d，J=3.2Hz，H-13b），5.02（1H，brs，H-14a），4.94（1H，brs，H-14b），5.38（1H，brs，H-15a），5.18（1H，brs，H-15b），4.88（1H，d，J=7.6Hz，H-1′）；

13C-NMR（DMSO-d6，100MHz）δ：

43.4（C-1），37.0（C-2），79.3（C-3），150.0（C-4），48.9（C-5），83.2（C-6），44.1（C-7），30.1（C-8），33.7（C-9），148.7（C-10），140.1（C-11），169.6（C-12），119.8（C-13），113.5（C-14），110.7（C-15），102.5（C-1′），73.5（C-2′），76.9（C-3′），70.2（C-4′），77.0（C-5′），61.2（C-6′）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[8]进行对照，鉴定化合物4为glucozaluzaninC。

　　化合物5淡黄色粉末，ESI-MSm/z593[M+Na]+，分子式为C27H38O13；

1H-NMR（CD3OD，400MHz）δ：

4.64（1H，m，H-3），4.27（1H，t，J=9.6Hz，H-6），6.10（1H，d，J=3.6Hz，H-13a），5.57（1H，d，J=3.6Hz，H-13b），5.02（1H，brs，H-14a），4.93（1H，brs，H-14b），5.40（1H，brs，H-15a），5.35（1H，brs，H-15b），4.54（1H，d，J=8.0Hz，H-1′），4.51（1H，d，J=8.0Hz，H-1″）；

13C-NMR（CD3OD，100MHz）δ：

46.2（C-1），38.5（C-2），81.4（C-3），150.6（C-4），51.7（C-5），85.2（C-6），46.5（C-7），31.6（C-8），34.4（C-9），150.0（C-10），142.1（C-11），172.2（C-12），120.4（C-13），114.7（C-14），113.8（C-15），102.3（C-1′），74.6（C-2′），88.3（C-3′），70.2（C-4′），77.5（C-5′），62.6（C-6′），105.3（C-1″），75.6（C-2″），78.3（C-3″），71.5（C-4″），77.8（C-5″），62.7（C-6″）.根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[9]进行对照，鉴定化合物5为macroclinisideB。

　　化合物6淡黄色粉末，ESI-MSm/z755[M+Na]+，分子式为C33H48O18；

4.64（1H，m，H-3），4.11（1H，t，J=9.6Hz，H-6），6.01（1H，d，J=3.6Hz，H-13a），5.59（1H，d，J=3.6Hz，H-13b），5.19（1H，brs，H-14a），5.08（1H，brs，H-14b），5.36（2H，brs，H-15），5.01（1H，d，J=8.0Hz，H-1′），4.98（1H，d，J=7.6Hz，H-1″），4.88（1H，d，J=7.6Hz，H-1’’’）；

43.4（C-1），36.9（C-2），83.2（C-3），150.0（C-4），48.8（C-5），86.6（C-6），44.3（C-7），30.1（C-8），33.7（C-9），148.8（C-10），140.1（C-11），169.5（C-12），119.9（C-13），113.6（C-14），110.8（C-15），101.7（C-1′），70.1（C-2′），88.0（C-3′），68.4（C-4′），76.3（C-5′），60.9（C-6′），103.9（C-1″），72.4（C-2″），73.8（C-3″），79.4（C-4″），76.1（C-5″），61.1（C-6″），103.4（C-1’’’），72.7（C-2’’’），76.9（C-3’’’），68.5（C-4’’’），76.1（C-5’’’），61.0（C-6’’’）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[10]进行对照，鉴定化合物6为macroclinisideI。

　　化合物7白色粉末，ESI-MSm/z447[M+Na]+，分子式为C21H28O9；

5.83（1H，dd，J=8.8，3.6Hz，H-1），4.95（1H，d，J=10.0Hz，H-5），4.72（1H，d，J=10.0Hz，H-6），2.55（1H，m，H-7），5.62（1H，d，J=3.6Hz，H-13a），6.15（1H，d，J=3.6Hz，H-13b），5.54（1H，d，J=7.2Hz，H-1′）；

149.7（C-1），27.7（C-2），40.0（C-3），142.0（C-4），127.2（C-5），83.9（C-6），51.2（C-7），31.3（C-8），37.3（C-9），131.8（C-10），144.8（C-11），172.8（C-12），120.2（C-13），168.0（C-14），17.3（C-15），95.4（C-1′），74.0（C-2′），78.8（C-3′），71.0（C-4′），78.3（C-5′），62.4（C-6′）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[11]进行对照，鉴定化合物7为taraxinicacid-14-O-β-D-glucopyranoside。

　　化合物8白色粉末，ESI-MSm/z447[M+Na]+，分子式为C21H28O9；

1H-NMR（CDCl3，500MHz）δ：

6.70（1H，t，J=7.0Hz，H-1），4.81（1H，d，J=10.0Hz，H-5），4.56（1H，dd，J=10.0，9.0Hz，H-6），5.44（1H，d，J=3.0Hz，H-13a），6.10（1H，d，J=3.0Hz，H-13b），1.70（3H，s，H-15），6.24（1H，d，J=8.0Hz，H-1′）；

13C-NMR（CDCl3，125MHz）δ：

143.0（C-1），26.0（C-2），38.2（C-3），141.1（C-4），127.3（C-5），82.7（C-6），46.7（C-7），24.0（C-8），26.5（C-9），135.3（C-10），139.4（C-11），172.3（C-12），119.2（C-13），167.4（C-14），17.0（C-15），95.4（C-1′），73.7（C-2′），78.5（C-3′），71.0（C-4′），77.7（C-5′），62.3（C-6′）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[12]进行对照，鉴定化合物8为ainsliasideB。

　　化合物9淡黄色粉末，ESI-MSm/z271[M+H]+，分子式为C15H10O5；

1H-NMR（DMSO-d6，500MHz）δ：

6.90（1H，s，H-3），7.92（2H，d，J=8.0Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J=8.0Hz，H-3′，5′），6.18（1H，d，J=2.5Hz，H-6），6.47（1H，d，J=2.5Hz，H-8）；

13C-NMR（DMSO-d6，125MHz）δ：

163.6（C-2），102.7（C-3），181.6（C-4），161.0（C-5），93.8（C-6），164.0（C-7），98.7（C-8），161.3（C-9），103.3（C-10），121.1（C-1′），128.3（C-2′），115.8（C-3′），157.2（C-4′），115.8（C-5′），128.3（C-6′）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[13]进行对照，鉴定化合物9为洋芹素。

　　化合物10淡黄色粉末，ESI-MSm/z287[M+H]+，分子式为C15H10O6；

6.85（1H，s，H-3），7.40（2H，dd，J=8.0，2.5Hz，H-2′，6′），6.89（1H，d，J=8.0Hz，H-5′），6.19（1H，d，J=2.5Hz，H-6），6.46（1H，d，J=2.5Hz，H-8）；

164.5（C-2），103.6（C-3），182.1（C-4），161.9（C-5），99.4（C-6），165.0（C-7），94.8（C-8），157.9（C-9），104.8（C-10），122.0（C-1′），113.8（C-2′），146.2（C-3′），150.2（C-4′），116.3（C-5′），119.3（C-6′）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[13]进行对照，鉴定化合物10为木犀草素。

　　化合物11黄色粉末，ESI-MSm/z433[M+H]+，分子式C21H20O10；

6.88（1H，s，H-3），7.94（2H，d，J=8.0Hz，H-2′，6′），6.94（2H，d，J=8.0Hz，H-3′，5′），6.42（1H，d，J=2.5Hz，H-6），6.81（1H，d，J=2.5Hz，H-8），5.05（1H，d，J=7.5Hz，H-1″），3.15～3.50（6H，m，H-2″～6″）；

164.2（C-2），103.0（C-3），181.7（C-4），161.5（C-5），99.4（C-6），162.8（C-7），94.9（C-8），156.8（C-9），105.4（C-10），120.9（C-1′），128.3（C-2′），115.9（C-3′），161.0（C-4′），115.9（C-5′），128.3（C-6′），100.1（C-1″），73.1（C-2″），76.5（C-3″），69.9（C-4″），77.2（C-5″），60.8（C-6″）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[13]进行对照，鉴定化合物11为洋芹素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

　　化合物12黄色粉末，ESI-MSm/z449[M+H]+，分子式C21H20O11；

6.88（1H，s，H-3），7.45（2H，dd，J=8.0，2.5Hz，H-2′，6′），6.94（1H，d，J=8.0Hz，H-5′），6.44（1H，d，J=2.5Hz，H-6），6.81（1H，d，J=2.5Hz，H-8），5.10（1H，d，J=7.5Hz，H-1″），3.30-3.80（6H，m，H-2″～6″）；

13CNMR（DMSO-d6，125MHz）δ：

164.5（C-2），103.5（C-3），181.8（C-4），161.1（C-5），99.8（C-6），163.1（C-7），95.0（C-8），157.0（C-9），105.6（C-10），121.7（C-1′），113.9（C-2′），145.8（C-3′），149.8（C-4′），116.2（C-5′），119.3（C-6′），100.3（C-1″），73.3（C-2″），76.6（C-3″），70.0（C-4″），77.5（C-5″），61.0（C-6″）。

根据化合物的上述波谱数据并通过与文献[13]进行对照，鉴定化合物12为木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

　　4降血糖活性[14]

　　本研究前期发现万花木的乙醇提取物具有良好的降血糖活性，并已从乙酸乙酯提取部位分离得到了大量的化合物8（约5g），而所分离得到的其他化合物的样品量均较少，故仅对化合物8进行了实验动物模型的活性评价。

　　取18～22g实验小鼠，雌雄各半，禁食不禁水，24h后，小鼠尾静脉注射四氧嘧啶（200mg?

kg-1）。

上述小鼠经72h的自由饮食后，禁食不禁水4h，小鼠眼眶静脉取血，制备血清，用血糖试纸及测试仪测血糖水平，选用血糖水平在11.1mmol?

L-1以上的小鼠30只，随机分成模型组（modelgroup，MG），每天灌胃0.9%生理盐水；

阳性对照组（controlgroup，CG），每天灌胃200mg?

kg-1二甲双胍；

样品组（samplegroup，SG）每天灌胃100mg?

kg-1化合物8。

小鼠分笼饲养，每天灌胃1次，连续灌胃10d。

自由进食、饮水，每天记录小鼠体重及饮水量。

末次给药后，所有小鼠禁食不禁水12h，眼眶取血，制备血清，用血糖试纸及测试仪测血糖水平。

血糖下降百分率计算方法：

血糖下降率=（实验前血糖值-试验后血糖值）/实验前血糖值×

100%。

　　模型组小鼠血糖值一直维持较高水平，对照组和样品组都可较好地降低小鼠血糖值（P