枳术丸中辛弗林的HPLC测定Word格式.docx

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【关键词】枳术丸；

辛弗林；

高效液相色谱法；

含量测定

Abstract：

ObjectiveToestablishthemethodfordeteminingthecontentofsynephrineinZhizhuWanbyHPLC.MethodsDiamonsilODS1C18columnwasusedwithmethanol-potassiumdihydrogenphosphate（per1000mLcontains0.6gpotassiumdihydrogenphosphote,1.0gSDSand1mLaceticacid,50∶50）asthemobilephase,detectionwavelengthas275nmandflowrateof1.0mL/min.ResultsThecalibrationcurvewaslinearattherangeof0.0656～0.656μgforsynephrineandlinearequationwasY＝478526.3X＋827.146,r＝0.9998.Theaveragerecoverywas99%andtherelatedstandarddeviation（RSD）was0.99%（n＝6）.ConclusionThemethodwassimple,accurateandproper,andthereduplicationoftheresultwasgood.ItprovidesscientificquantitativeanalysismethodofsynephrineinZhizhuWan.

Keywords：

ZhizhuWan；

synephrine；

HPLC；

contentdetermination

枳术丸收载于2010年版《中华人民共和国药典》（一部）中,功能健脾消食、行气化湿,用于脾胃虚弱,食少不化,脘腹痞满,处方由枳实（炒）、麸炒白术组成[1]。

原标准中只有简单的显微鉴别项,而对处方中的主药枳实没有含量测定,不能全面控制药品的质量。

为了更好地控制枳术丸的质量,本试验采用高效液相色谱（HPLC）法对枳实的主要成分辛弗林进行了含量测定,并进行了方法学研究。

现报道如下。

1仪器与试药

高效液相色谱仪：

SPD-10A日本岛津；

紫外分光光度仪：

上海康化生化仪器制造厂；

超声波清洗器：

SK3200H上海科导超声仪器有限公司。

辛弗林对照品（批号110727-200306,供含量测定用）,中国药品生物制品检定所提供；

枳术丸（批号20100201、20100202、20100203）,河南百年康鑫药业有限公司提供；

其他试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

以甲醇-磷酸二氢钾水溶液（取磷酸二氢钾0.6g、十二烷基磺酸钠1.0g、冰醋酸1mL,加水溶解并稀释至1000mL,50∶50）为流动相；

检测波长为275nm。

理论板数按辛弗林峰计算应不低于2000[1-2]。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备取辛弗林对照品适量,精密称定,加水制成每1mL含30μg的溶液,即得。

2.2.2供试品溶液的制备取装量差异项下的本品,研细,取约3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,称定重量,加热回流1.5h,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。

精密量取续滤液10mL,蒸干,残渣加水10mL使溶解,摇匀,通过聚酰胺柱（60～90目,2.5g,内径1.5cm,干法装柱）,用水25mL洗脱。

收集洗脱液,转移至25mL量瓶中,加水至刻度,摇匀,即得。

2.2.3阴性样品的测试取缺枳实的样品,按供试品制备法制备阴性样品后测定,在辛弗林相应位置无峰出现,说明阴性样品的其他成分无干扰。

见图1。

AB

C

注：

A.对照品；

B.供试品；

C.阴性样品

图1枳术丸HPLC图谱

2.3线性关系的考察

分别精密吸取同一对照品溶液（32.8μg/mL）2、4、8、10、20μL,注入液相色谱仪,测定峰面积。

以辛弗林对照品进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,其回归方程为：

Y＝478526.3X＋827.146,r＝0.9998。

结果表明,辛弗林对照品在0.0656～0.656μg范围内线性关系良好。

2.4精密度试验

取同一对照品溶液,重复进样6次,每次进样5μL,测定辛弗林峰面积,结果RSD＝1.14%,表明本法精密度良好。

2.5重复性试验

取同一批号（批号20100201）供试品,按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液,测定每份样品中辛弗林的含量,结果RSD＝0.48%（n＝6）,表明重复性良好。

2.6稳定性试验

取同一批号（批号20100201）的供试品,按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,分别在0、2、4、6、8h测定峰面积,结果RSD＝1.92%（n＝5）。

表明供试品溶液在8h内稳定。

2.7加样回收率试验

采用加样回收法。

称取已知含量的同一批号样品（批号20100201,含量为0.51mg/g）1.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,共6份。

分别精密加入辛弗林对照品溶液（0.0328mg/mL）各25mL,蒸干,按供试品溶液制备方法制备,并照上述色谱条件测定,分别进样10μL,测定辛弗林峰面积并计算辛弗林含量,结果平均回收率为99%,RSD＝0.99%（n＝6）。

见表1。

表1加样回收率试验结果

样品取样

量（g）样品中辛弗

林量（mg）加入辛弗林

量（mg）测得总量

（mg）回收率

（%）平均回收

率（%）RSD

（%）

1.52340.77690.821.5985100.2

1.54260.78670.821.596098.7

1.58210.80690.821.606497.5990.99

1.50420.76710.821.583899.6

1.51740.77390.821.580098.3

1.56930.80030.821.616299.5

2.8样品测定

按照供试品溶液制备方法对3批中试产品进行测定,结果见表2。

表2辛弗林含量测定结果

批号辛弗林含量（mg/g）

201002010.51

201002020.62

201002030.56

3讨论

根据3批样品测定结果,每1g含枳实以辛弗林（C9H13NO2）计均不少于0.5mg,考虑到药材因产地、加工、运输、贮藏等因素的影响,药材中辛弗林也会有较大的差别,故暂规定：

本品每1g含枳实以辛弗林（C9H13NO2）计,不得少于0.45mg。

取辛弗林对照品溶液,在200～400nm波长范围进行扫描,结果在275nm波长处有最大吸收,故采用275nm作为检测波长。

参考2010年版《中华人民共和国药典》（一部）收载的枳实原药材含量测定项下的供试品制备方法,分别考察了超声提取与加热回流提取方法,结果超声提取3h以上才能基本提取完全；

对加热回流提取时间分别考察了1、1.5、2h,结果加热回流提取1.5h基本提取完全,故采用加热回流提取。

本方法具有操作简便、结果准确、灵敏度高等特点,可以作为本品质量的控制方法。

【参考文献】

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：

一部[S].北京：

中国医药科技出版社,2010：

876,230－231.

[2]许妍,付辉政.RP-HPLC法测定枳实中辛弗林的含量[J].药品评价,2005,2（6）：

436－437.

DOI：

10.3969/j.issn.1005-5304.2011.02.025

中图分类号：

R284.1文献标识码：

A文章编号：

1005-5304（2011）02-0061-02

DeterminationofSynephrineinZhizhuWanbyHPLCCAIJun-an（HenanBainianKangxinPharmaceuticalCo.Ltd,Dancheng477150,China）