常用储存液的配制Word文档下载推荐.docx

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或转移100mg的二硫苏糖醇

至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。

8mol/L乙酸钾（potassiumacetate:

溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。

1mol/L氯化钾（KCl:

溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。

3mol/L乙酸钠（sodiumacetate:

溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA:

配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（0.5mol/L,混合后形成EDTA的三钠盐。

或称取186.1g的Na2EDTA·

2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。

1mol/LHEPES:

将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH（6.8-8.2,然后用水定容至100ml。

25mg/mlIPGT:

溶解250mg的IPGT（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。

1mol/LMgCl2:

溶解20.3gMgCl2·

6H2O于足量的水中,定容到100ml。

100mmol/LPMSF:

溶解174mg的PMSF（苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中,定容到10ml。

分成小份并用铝箔将装液管包裹

或贮存于-20℃。

20mg/ml蛋白酶K（proteinaseK:

将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。

10mg/mlRnase（无DNase（DNase-freeRNase:

溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH5.0。

溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。

用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。

（配制过程中要戴手套

5mol/L氯化钠（NaCl:

溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。

10N氢氧化钠（NaOH:

溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌,氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。

10%SDS（十二烷基硫酸钠:

称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

用水定容至1L。

2mol/L山梨（糖醇（Sorbitol:

溶解36.4g山梨（糖醇于足量水中使终体积为100ml。

100%三氯乙酸（TCA:

在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。

（稀释液应在临用前配制

2.5%X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷:

溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺（DMF,用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。

100×

Denhardt试剂（Denhardt'

sregent

依照上表称取各组分,溶于水中定容。

过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。

10×

标准DNA连接酶缓冲液（standardDNAligasebuffer（粘端、平端连接

将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。

100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions

可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。

10mmol/LdNTP混合液

20%PEG8000/2.5MNaCl

加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。

20×

SSC

溶解柠檬酸三钠（二水和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10NNaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。

DEPC（焦碳酸二乙酯处理水

加100ulDEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。

在37℃温浴至少12h,然后在15psi条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。

DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。

甲酰胺（deionizedformamide

直接购买或加DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。

经Whatman1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存（防止氧化。

磷酸缓冲液（phosphatebuffer

按照下表所给定的体积,混合1mol/L的磷酸二氢钠（单碱和1mol/L磷酸氢二钠（双碱贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。

配制1mol/L的磷酸二氢钠（NaH2PO4·

H2O贮液:

溶解138g于足量水中,使终体积为1L;

1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4贮液:

溶解142g于足量水中使终体积为1L。

TE（用于悬浮和贮存DNA

Tris缓冲液（Tris-HClbuffer

将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH（25℃下加一定量的浓盐酸（11.6N,用水调整终体积至1L。

二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液

电泳缓冲液

50×

Tris-乙酸（TAE缓冲液

5×

Tris-硼酸（TBE缓冲液

染料

1%溴酚蓝（bromophenolblue

加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。

1%二甲苯青FF（xylenecyanoleFF

溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。

10mg/ml的溴化乙锭（ethidiumbromide

小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。

用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。

凝胶上样液（gelloadingsolutions

6×

碱性凝胶上样液（室温贮存

聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存

溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存

甘油凝胶上样液（4℃贮存

蔗糖凝胶上样液（室温贮存

十二烷基硫酸钠/

甘油凝胶上样液（室温贮存

三.常用培养基

LB培养基

将下列组分溶解在0.9L水中:

如果需要用1NNaOH（~1ml调整pH至7.0,再补足水至1L。

注:

琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。

SOB培养基

用水补足体积到1L。

分成100ml的小份,高压灭菌。

培养基冷却到室温后,再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。

SOC培养基

成分、方法同SOB培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外,再加2ml灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中,再用水补足到100ml,用0.22um的滤膜过滤除菌。

TB培养基

各组分溶解后高压灭菌。

冷却到60℃,再加100ml灭菌的170mmol/L

2×

YT培养基

YPD培养基

用水补足体积为1L后,高压灭菌。

建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸,因为YPD培养基是色氨酸限制型培养基。

为了配制平板,需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。

四.常用抗生素

氨苄青霉素（ampicillin（100mg/ml

溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。

分装成小份于-20℃贮存。

常以25ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

羧苄青霉素（carbenicillin（50mg/ml

溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。

甲氧西林（methicillin（100mg/ml

溶解1g甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至10ml。

常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。

卡那霉素（kanamycin（10mg/ml

溶解100mg卡那霉素于足量的水中,最后定容至10ml。

常以10ug/ml~50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

氯霉素（chloramphenicol（25mg/ml

溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。

常以12.5ug/ml~25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

链霉素（streptomycin（50mg/ml

溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至10ml。

萘啶酮酸（nalidixicacid（5mg/ml

溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至10ml。

常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。

四环素（tetracyyline（10mg/ml

溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至10ml。

分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。