hbv基因与耐药检测临床版.ppt

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HBV分型和耐药突变基因检测,一、慢性乙肝患者抗病毒治疗的临床现状二、基因芯片原理、亚能HBV分型与耐药突变基因检测三、HBV分型与耐药突变基因检测的运用与临床意义,目录,一、乙肝患者抗病毒治疗的临床现状,耐药指南策略,干扰素：

普通干扰素（2a、2b、1b）、聚乙二醇干扰素（2a、2b）核苷（酸）类药物：

拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比夫定,药物种类有限,我国CHB治疗现状,2012年EASL、APASL乙肝防治指南建议:

ETV或TDF作为单药一线用药国内难以普及：

强调根据情况个体化选药，患者依从性差,国情差异,干扰素：

PegIFN1年病毒学应答率25%，HBeAg血清学转换率30%，血清HBVDNA阳性率高；耐药问题:

核苷（酸）类药物,疗效有限,慢性乙型肝炎联合抗病毒治疗专家共识，中国肝脏病杂志，2011，3

（2）：

38-45,耐药的危害,导致疾病进展（病毒学反弹、生化突破等）,肝硬化和肝癌发生率高,使已取得的疗效（如组织学改善）丧失,后续治疗更复杂、困难，增加医疗成本,耐药毒株的传播可能导致公共卫生问题,警惕耐药,HBV耐药,EASLClinicalPracticeGuidelines:

ManagementofchronichepatitisBvirusinfection.JournalofHepatology2012vol.57|167-185,核苷（酸）类药物耐药的预防和治疗,慢性乙型肝炎防治指南（2010年）,严格掌握治疗适应症,谨慎选择核苷（酸）类药物,高危患者及时联合治疗,治疗中密切监视，一旦耐药尽早救援治疗,尽量避免单药序贯治疗,生物化学检查：

血清ALT和AST、胆红素、白蛋白等,乙肝实验室检查,HBV血清学检查：

HBsAg、抗HBs、HBeAg等乙肝两对半,HBVDNA、基因型和变异检测,生物化学检查：

血清ALT和AST、胆红素、白蛋白等,HBV血清学检查：

HBsAg、抗HBs、HBeAg等乙肝两对半,HBVDNA、基因型和变异检测,生物化学检查：

血清ALT和AST、胆红素、白蛋白等,HBV分型与耐药突变检测方法,PCR产物直接测序法；PCR产物克隆测序法；限制性片段长度多态性技术（RFLP）；线性探针反向杂交法（INNO-LiPA）；基因芯片技术限制性片段质谱多肽性分析焦磷酸测序法深度测序法,二、基因芯片原理、亚能HBV分型与耐药突变基因检测,基因芯片（genechip）：

是多种特定的寡核苷酸序列为探针，固定于支持物表面上而成的二维DNA阵列。

基本原理：

利用碱基互补配对原则，通过目的DNA与探针特异结合来判断目的DNA的序列信息。

基因芯片原理,乙型肝炎病毒分型和耐药突变基因检测试剂盒（PCR-反向点杂交法）,注册号：

国食药监械（准）字2011第3401177号专利号：

ZL200710073933.3,国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂,PCR扩增：

在S基因和P基因重叠区段设计PCR引物，PCR扩增片段既包含耐药突变位点又能进行基因分型。

P基因：

耐药突变检测编码DNA合成酶（包含逆转录酶rt），抗病毒药物作用靶区，耐药基因突变热点区S基因：

分型检测,产品技术原理,亚能HBV产品应用,抗病毒治疗前、治疗中HBV的基因分型和耐药突变基因检测,区分我国常见的HBV-B、C、D基因型涵盖我国4种核苷（酸）抗病毒药物（拉米夫定、阿德福韦酯、替比夫定、恩替卡韦）7个耐药位点的16种突变：

rtL180M、rtM204V/I、rtA181V/T、rtN236T、rtM250I/L/V、rtS202G/I、rtT184I/S/A/F/L。

本产品检测的样本为血清或血浆；要求待检样本的HBVDNA载量1.0103copies/mL。

样本要求,样本保存,为了避免DNA降解，制备好的血清或血浆，避免长时间室温放置；28保存不超过48小时；-18以下保存不超过半年，避免反复冻融。

注意事项,HBV耐药检测产品比较,三、HBV分型与耐药突变基因检测的运用与临床意义,HBV基因型检测临床意义,HBeAg阳性患者中，B基因型对IFN-治疗的应答率高于C基因型，A基因型高于D基因型。

与C基因型感染者相比，B基因型感染者较早出现HBeAg血清学转换，较少进展为慢性肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌；,预测干扰素应答和疾病进展情况,慢性乙型肝炎防治指南（2010年）,HBV耐药检测临床意义,抗病毒治疗前，预存耐药检测协助临床选择合理抗病毒药物，实现个体化抗病毒治疗、提高抗病毒疗效、降低耐药发生率。

抗病毒治疗中，全程耐药监测全程监测耐药，利于早期挽救治疗，为调整治疗方案提供理论支持。

选择合理抗病毒药物，为调整治疗方案提供理论依据,抗病毒治疗前,抗病毒治疗期间,抗病毒治疗效果不佳时,HBV基因分型、耐药检测,何时选择HBV基因分型、耐药检测？

预存耐药检测，实现治疗个体化,LAM、ADV、ETV预存耐药率分别为7.81%、7.81%、1.56%,预存耐药慢性乙型肝炎患者在核苷（酸）类似物治疗前即存在耐药位点突变，即预存耐药变异。

盖洪鹏，孙伟翔，袁德胜，等，预存耐药对核苷（酸）类似物抗病毒治疗应答和耐药的影响，临床肝胆病杂志，2012，28（11）：

841-844,预存耐药检测显著提高CHB患者HBVDNA转阴率、HBeAg/抗HBe转换率,盖洪鹏，孙伟翔，袁德胜，等，预存耐药对核苷（酸）类似物抗病毒治疗应答和耐药的影响，临床肝胆病杂志，2012，28（11）：

841-844,48周HBeAg/抗-HBe转换率,P0.05,48周HBVDNA转阴率,P0.05,预存耐药检测，显著提高临床疗效,抗病毒治疗中的监测（线路图）,治疗第12周评估是否存在“原发性无应答”,病毒学应答：

HBVDNA较基线下降10IU或50拷贝/ml,原发性治疗失败：

HBVDNA较基线下降10IU或50拷贝/ml,患者依从性良好：

加用更强的抗病药物,患者依从性不佳：

督促劝说坚持治疗,治疗24周评估疗效的早期预测因子,完全病毒学应答：

PCR检测HBVDNA阴性,部分病毒学应答：

60IU/mlHBVDNA2000IU/ml,不充分病毒学应答：

HBVDNA2000IU/ml,以同一药物继续治疗，每6个月监测一次,基因屏障低的药物：

加用基因变异特点不同的第二种药物,基因屏障高的药物：

每3个月监测一次并在48周后继续监测,抗病毒能力相对低的药物：

每3个月监测一次并在48周后继续监测,加用更强的抗病毒药物：

每3个月监测一次,若第48周获得完全病毒学应答，则继续治疗,若第48周未获得病毒学应答，则加用一种更强且无交叉耐药的药物,Keeffe，etal.ClinicalGastroenterologyandHepatology，2007，5：

890897,耐药基因位点变异与临床挽救治疗方案,抗病毒治疗耐药检测节点,抗病毒治疗前,部分病毒学应答、不充分病毒学应答者,治疗24周,治疗12周,评估是否原发无应答,疗效早期预测,后每12周监测一次,抗病毒治疗过程中效果不佳时：

需及时进行HBV耐药突变检测，调整用药。

预存耐药,国内首个全面提示核苷（酸）类药物耐药的快速诊断试剂；6h全面呈现：

4种核苷（酸）相关的7个耐药位点16种突变，区分HBV-B、C、D三种基因型；全程监测耐药，实现治疗个体化：

预存耐药检测个体化用药、提高临床疗效；治疗第12周、24周耐药检测评估抗病毒早期疗效；治疗效果不佳时，耐药检测及时调整治疗方案、节约成本。

产品总结,Thankyou,