真菌毒素的检测PPT课件.ppt

资源描述

真菌毒素的检测PPT课件.ppt

《真菌毒素的检测PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《真菌毒素的检测PPT课件.ppt（34页珍藏版）》请在冰豆网上搜索。

真菌毒素的检测PPT课件.ppt

第六章第六章真菌毒素的检测真菌毒素的检测主要内容主要内容1.概述概述2.真菌毒素分类真菌毒素分类3.真菌毒素检测基本步骤真菌毒素检测基本步骤1.概述真菌毒素真菌毒素-由真菌生产的有毒代谢产物。

由真菌生产的有毒代谢产物。

具有毒性、致癌性、致突变型和致畸性等。

“毒蘑菇、迷神麦、醉谷病毒蘑菇、迷神麦、醉谷病”真菌毒素的危害：

真菌毒素的危害：

（1）引起粮食作物的病害和产品腐败变质；）引起粮食作物的病害和产品腐败变质；

（2）对人类和动物健康产生威胁。

）对人类和动物健康产生威胁。

2.真菌毒素分类真菌毒素分类按产生菌可分为按产生菌可分为：

曲霉毒素类、青霉毒素类、镰刀菌毒素类等。

水活度（Aw对真菌生长和产毒影响较大。

真菌毒素毒性真菌毒素毒性：

（1）致）致DNA损伤，有的致癌；损伤，有的致癌；

（2）细胞毒性，有的破坏质膜和细胞酶的）细胞毒性，有的破坏质膜和细胞酶的作用作用常见的真菌性食物中毒常见的真菌性食物中毒：

黄曲霉毒素中毒、黄变米或灰变米中毒，赤霉沼渣粉中毒等。

3.真菌毒素检测基本步骤真菌毒素检测基本步骤1.采样和样品的准备采样和样品的准备

（1）采样的地点）采样的地点根据分析目的的不同确定采样地点，如：

农田、根据分析目的的不同确定采样地点，如：

农田、仓库、加工厂、运输工具、零售商和医院等。

仓库、加工厂、运输工具、零售商和医院等。

（2）采样方法）采样方法1）静态样品的采集）静态样品的采集静态样品静态样品：

麻袋、箱柜和车厢等容器存放分样品：

麻袋、箱柜和车厢等容器存放分样品均属静态样品。

均属静态样品。

采样工具采样工具：

顶端尖锐的长柄采样钎子。

：

顶端尖锐的长柄采样钎子。

采样数量采样数量：

小批量时采：

小批量时采1/4；大批量时为整批麻袋；大批量时为整批麻袋数数2）动态样品的采集）动态样品的采集用商品化的十字交叉切分自动采样器用商品化的十字交叉切分自动采样器（3）采样量）采样量采大样，按四分法对角连续多次分样缩减至采大样，按四分法对角连续多次分样缩减至12kg，最后取代表，最后取代表样全部粉碎。

样全部粉碎。

美国农业部美国农业部USDA的方法：

成批样每批取的方法：

成批样每批取3份大样，每份份大样，每份22kg。

实验室分析用的样品为实验室分析用的样品为15kg。

2.提取提取1.提取溶剂提取溶剂溶剂的选择取决于待测毒素的种类、毒素性质、毒素在提取溶剂中的溶解溶剂的选择取决于待测毒素的种类、毒素性质、毒素在提取溶剂中的溶解度、提取溶剂的毒性价格、非测定成分在提取溶剂中的分配系数等。

度、提取溶剂的毒性价格、非测定成分在提取溶剂中的分配系数等。

选用：

毒性小、极性大、价格低廉的溶剂系统选用：

毒性小、极性大、价格低廉的溶剂系统常用溶剂：

常用溶剂：

甲醇、氯仿、丙酮、己烷、乙酸乙酯、乙睛和水中一种或多种甲醇、氯仿、丙酮、己烷、乙酸乙酯、乙睛和水中一种或多种不同配比的混合物。

不同配比的混合物。

2.提取温度提取温度温度影响毒素的回收率，适当升高温度可以增加毒素的回收率。

温度影响毒素的回收率，适当升高温度可以增加毒素的回收率。

3.食品基质食品基质固体食品：

选用浸剂、洗脱、索氏回流等方法。

固体食品：

选用浸剂、洗脱、索氏回流等方法。

液体食品：

液液分配方法。

液体食品：

液液分配方法。

提取酸性真菌毒素时，通常需提高提取溶剂系统中水相的提取酸性真菌毒素时，通常需提高提取溶剂系统中水相的pH值，使其有效地将被提取物碱化或形成水溶性碱混合物后，再值，使其有效地将被提取物碱化或形成水溶性碱混合物后，再进行提取。

进行提取。

3.纯化纯化纯化：

在确保不损失待测毒素的前提下除去干扰杂质的过程称纯化：

在确保不损失待测毒素的前提下除去干扰杂质的过程称为纯化。

为纯化。

常用净化方法：

液固萃取、液液分配、化学吸附、色谱法、透析法以及液固萃取、液液分配、化学吸附、色谱法、透析法以及SFE法等。

法等。

使用最广泛的是色谱法。

色谱法：

薄层色谱法（柱色谱法最常用）薄层色谱法（柱色谱法最常用）吸附色谱柱常用的吸附剂：

吸附色谱柱常用的吸附剂：

硅胶、矾土、氧化铝、活性炭、弗罗里硅土硅胶、矾土、氧化铝、活性炭、弗罗里硅土分配色谱柱常用的填充剂：

硅藻土、纤维素。

分配色谱柱常用的填充剂：

硅藻土、纤维素。

固相提取（广泛采用）固相提取（广泛采用）免疫亲和柱免疫亲和柱IAC（应用于农产品的新技术）（应用于农产品的新技术）4.检测检测

（1）薄层色谱法）薄层色谱法

（2）高效液相色谱法）高效液相色谱法（3）气相色谱法）气相色谱法（4）酶联免疫吸附试验）酶联免疫吸附试验第二节第二节主要真菌毒素及其检验主要真菌毒素及其检验1.黄曲霉毒素黄曲霉毒素

（1）特性

（2）食品中来源（3）毒性与危害（4）检测方法）检测方法霉菌霉菌霉菌均由分枝或不分枝的菌丝构成，许多菌丝交织在一起形成菌丝体，菌丝在光学显微镜下呈管状，210um比一般细菌放线菌细胞大几倍至几十倍，与酵母菌相似，而其菌丝又分为有隔菌丝有隔菌丝和无隔菌丝和无隔菌丝，再就是根据其功能不同又分为营养菌丝，气生菌丝营养菌丝，气生菌丝。

无隔菌丝：

菌丝为长管状，单细胞，细胞质内含多个核，其生长过程只表现为菌丝的延长和细胞核的裂殖增多，以及细胞质的增加，如毛霉，根霉，犁头霉。

有隔菌丝：

为大多数的。

菌丝由横隔膜分隔成成串的多细胞，每个细胞内含有一个或多个细胞核，有些菌丝外观看起来像多细胞，但横隔膜上有小孔，使细胞质或细胞核，可自由流通，每个细胞功能也相同，如青、曲、白地霉。

营养菌丝营养菌丝（基质菌丝）就是在生长过程中，伸入到培养的基质中，为真菌提供营养的菌丝。

气生菌丝气生菌丝图图（繁殖菌丝）它主要是伸入到菌周的空气环境中，它主要作用是产生孢子，产生孢子时的气生菌丝称繁殖菌丝。

霉菌的繁殖主要是由繁殖器官产生孢子，繁殖器管是由繁殖菌丝产生的可以是单细胞，也可是多细胞，有时产生无性孢子，有时产生有性孢子，如青霉，曲霉，在生长过程中，由于生长条件的改变，有时产生有性孢子，有时产生无性孢子，但主要还是以无性孢子为主。

有性孢子有性孢子：

子囊孢子，结合孢子，卵孢子，担孢子。

无性孢子无性孢子：

分生孢子，关节孢子，芽生孢子，孢子襄孢子，厚膜孢子。

霉菌培养特性的鉴定霉菌培养特性的鉴定青、曲-察氏培养基，镰刀菌、芽枝霉-马铃薯葡萄糖琼脂进行划线或点种于琼脂上，2528，定期观察。

生长速度生长速度：

培养一定天数（5、10、15天）测大小，描述常以极慢、慢、中等、快、说明。

菌的颜色菌的颜色：

包括子实体，气生菌丝、菌核，埋伏菌丝及其颜色。

菌落表面构造菌落表面构造：

蔬松，紧密、扁平、隆起，凹陷，或皱褶，有无同心环，放射沟，并观察菌全部，中心部，中间部分及边缘部分。

菌落质地菌落质地：

外观似毡状、绒毛状、棉絮状、羊毛状、襄状、粉粒状、明胶状或皮革状。

1.1.黄曲霉毒素（黄曲霉毒素（aflatoxinaflatoxin，AFT）AFT）的特性的特性AFT目前已分离鉴定出目前已分离鉴定出20余种异构体，其中最常见的包括余种异构体，其中最常见的包括B1、B2、G1、G2、M1、M2。

特性特性：

紫外线下发不同颜色的荧光，蓝色荧光（紫外线下发不同颜色的荧光，蓝色荧光（Bluefluorescence）为）为B族，黄绿色荧光（族，黄绿色荧光（yellow-Greenfluorescence）为）为G族；族；M1和和M2为为B1、B2的羟化衍生物，主要存在于奶（的羟化衍生物，主要存在于奶（milk）及奶制品、肉类）及奶制品、肉类（meat）中，故名）中，故名M族。

族。

呋喃环有双键者毒性强，具有致癌性；呋喃环有双键者毒性强，具有致癌性；溶于油、氯仿、甲醇等有机溶剂，不溶于水、乙醚、石油醚；溶于油、氯仿、甲醇等有机溶剂，不溶于水、乙醚、石油醚；耐热，加热到耐热，加热到280才裂解破坏；才裂解破坏；在中性和酸性溶液中稳定，在在中性和酸性溶液中稳定，在pH值值9-10的强碱性溶液中迅速分的强碱性溶液中迅速分解。

解。

2.2.黄曲霉毒素的毒性黄曲霉毒素的毒性急性毒性：

急性毒性：

剧毒物，毒性是氰化钾的剧毒物，毒性是氰化钾的10倍，砒霜的倍，砒霜的68倍。

倍。

慢性毒性：

动物生长迟缓，肝脏出现亚急性或慢性损伤。

三致作用：

致癌、致畸、致突变致癌、致畸、致突变。

3.黄曲霉毒素产生的影响因素黄曲霉毒素产生的影响因素培养基：

培养基：

花生、玉米等是黄曲霉的天然培养基。

温度和湿度：

最适生长温度在最适生长温度在37左右，产毒温度略低左右，产毒温度略低于最适生长温度，黄曲霉毒素产毒温度于最适生长温度，黄曲霉毒素产毒温度28-32，相对湿，相对湿度度85以上。

以上。

水分：

产毒的适宜水分活度为产毒的适宜水分活度为0.8-0.9。

pH值：

值：

最适最适pH值为值为3。

4.卫生标准卫生标准1995年，世界卫生组织制定的食品黄曲霉毒素最高允许浓度为年，世界卫生组织制定的食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15g/kg。

美国规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒含量美国规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒含量（指指B1+B2+G1+G2的总量的总量）不能超过不能超过15g/kg。

我国的标准我国的标准玉米、花生、花生油、坚果和干果玉米、花生、花生油、坚果和干果（核桃、杏仁核桃、杏仁）20g/kg。

大米、其他食用油大米、其他食用油（香油、菜籽油、大豆油、葵花油、胡麻油、香油、菜籽油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油）10g/kg。

其他粮食其他粮食（麦类、面粉、薯干麦类、面粉、薯干）、发酵食品、发酵食品（酱油、食用醋、豆豉、酱油、食用醋、豆豉、腐乳制品腐乳制品）、淀粉类制品、淀粉类制品（糕点、饼干、面包、裱花蛋糕糕点、饼干、面包、裱花蛋糕）5g/kg。

牛乳及其制品牛乳及其制品（消毒牛奶、新鲜生牛乳、全脂牛奶粉、淡炼乳、消毒牛奶、新鲜生牛乳、全脂牛奶粉、淡炼乳、甜炼乳、奶油甜炼乳、奶油）、黄油、新鲜猪组织、黄油、新鲜猪组织（肝、肾、血、瘦肉肝、肾、血、瘦肉）0.5g/kg。

5.黄曲霉毒素的检测方法黄曲霉毒素的检测方法-薄层层析法薄层层析法原理：

将样品经过提取、浓缩、薄层分离后，在波长原理：

将样品经过提取、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外紫外光下产生蓝紫色（光下产生蓝紫色（B1/B2）或黄绿色荧光（）或黄绿色荧光（G1/G2）提取提取检测检测薄层板的制备薄层板的制备点样点样展开与观察展开与观察定量试验定量试验高效液相色谱法高效液相色谱法提取提取净化净化衍生衍生测定测定酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法竞争抑制法见教材竞争抑制法见教材P179酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验ELISA（enzymelinkedimmunosorbentassay）是一类常用的免疫酶技术。

是将已知的抗是一类常用的免疫酶技术。

是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。

体反应在固相表面进行。

常用的酶常用的酶：

辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（AP）。

）。

ELISA方法的基本原理方法的基本原理

（1）使抗原或抗体结合到固相载体表面，并保持其免）使抗原或抗体结合到固相载体表面，并保持其免疫活性。

疫活性。

（2）使抗原或抗体与酶结合成酶标抗原或抗体，并保）使抗原或抗体与酶结合成酶标抗原或抗体，并保持抗原或抗体的免疫活性和酶的活性。

持抗原或抗体的免疫活性和酶的活性。

（3）酶标的抗原或抗体与相应的抗体或抗原反应后，）酶标的抗原或抗体与相应的抗体或抗原反应后，结合在免疫复合物上的酶催化底物形成水解、氧化或结合在免疫复合物上的酶催化底物形成水解、氧化或还原反应，形成有色物质，其颜色的深浅与标本中的还原反应，形成有色物质，其颜色的深浅与标本中的抗原或抗体抗原或抗体的量直接相关。

的量直接相关。

ELISA方法的基本类型方法的基本类型

（一）

（一）双抗体夹心法双抗体夹

展开阅读全文