药物安全性评价实验.doc

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安全性评价实验

实验材料及动物

受试物:

五味消毒饮分散片

实验动物:

清洁级昆明小鼠100只

急性毒性试验方法

取小鼠100只,随机分为10组,每组10只,雌雄各半,禁食12h后分别称重。

根据改进寇氏法设9个剂量组,由低到高的组间剂量比为0175:

1,第Ⅰ～Ⅸ组的给药剂量分别以28.88,38.51,51.34,68.46,91.28,121.70,162.27,216.36,和288.48g·kg-1,以0.75稀释等级系数,第Ⅰ～Ⅷ组用蒸馏水稀释成相等的容量2.4mL灌胃,Ⅸ组为五味解毒水煎剂原液2.4mL

灌胃,第Ⅰ～Ⅸ组的药物配制浓度分别0.24,0.32,0.43,0.57,0.76,1.01,1.35,1.80,2.40g·mL-10.每次灌胃体积均为20mL·kg-1,每次间隔4h;第Ⅹ为对照组,灌服等量蒸馏水。

每天观察记录动物的毒性反应及死亡情况,对死亡动物及时剖检、记录病理变化,连续观察7d。

根据各组小鼠死亡数,再计算LD50。

亚慢性毒性试验方法

动物分组处理　取小鼠80只,随机分为4组,每组20只,雌雄各半。

Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为药物的高、中、低剂量组,分别以LD50的四分之一，十分一，二十五分之一剂量灌胃,每次灌胃体积均为20mL·kg-1;Ⅳ组为对照组,每日定时灌胃等量蒸馏水。

各组连续灌胃14d,停药后再持续观察14d。

观察指标　临床表现　每天观察小鼠的一般状况,每周测定体重变化情况,死亡小鼠及时剖检。

　血常规变化于停药后第1天和第14天,各组随机抽取10只采血,

EDTA二钾盐抗凝,立即用AC·Tdiff2型全自动血细胞计数分析仪测定红细胞数、白细胞总数、血小板数和血红蛋白含量。

　血清生化值变化于停药后第1天和14天,每组随机抽取10只采血,分离血清,用VitalabSelecctraE自动生化分析仪测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐、总蛋白、白蛋白的含量。

　病理学变化于停药后第1天每组随机抽取3只,停药后第14天对剩余所有小鼠剖检,采集心、肝、脾、肺、肾、胃和肠,固定,石蜡切片,HE染色,显微镜下观察病理变化。

通过急性毒性实验，得出五味消毒饮分散片在相应的剂量中，未引起小鼠的死亡，可以认为五味消毒饮分散片在剂量范围内未引起毒性反应。

亚慢性毒性实验期间，观察各组小鼠生长发育是否良好，各种体征表现是否正常。

五味消毒饮分散片提取物对动物体重、脏器重量、血液谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌醉（Cr）、血清白蛋白（Alb）和血糖（Glu）均有无显著影响。

长期毒性试验

受试物

六个月喂养实验周期较长，采用灌胃的方式给予受试物会对动物造成较大损伤，因此考虑将五味解毒分散片加入饲料，由动物在摄食时摄入受试物。

低、中、高3个剂量组分别在基础饲料粉中添加4%、8%和16%的五味解毒分散片，做成含黄连解毒汤提取物的饲料。

动物分组及剂量设计

取80只清洁级昆明小鼠，雌雄各半，随机分为4组（正常对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组）。

每组雌雄各10只，分笼喂养。

低、中、高三个剂量组分别按5g/Kg·Bw、10g/xg·Bw和20g/Kg·Bw给予受试物。

实验处理每周称量一次动物体重，根据体重及给予受试物剂量，精确计算应给予的饲料量，每天定量给予，保证所给予的饲料各组动物均能吃完。

实验开始后，每天观察并记录动物的一般表现、行为、中毒表现和死亡情况。

于实验开始后的第六个月最后一天傍晚禁食，不禁水，次日早上眼眶取血，分离血清，测定谷丙转氨酶（ALI，）、

谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌配（Cr）、血清白蛋白（Alb）和血糖（Glu）。

处死动物后，分离器官，测定肝、肾、脾和胸腺的重量。