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专题3 胚胎工程

3.1体外受精和早期胚胎培养

一、胚胎工程的建立

1、胚胎工程的概念P59

理解胚胎工程:

操作对象:

早期胚胎和配子

技术手段:

胚胎移植、体外受精、胚胎分割、胚胎干细胞培养等

理论基础:

哺乳动物的受精卵和早期胚胎的发育规律

二、精子的发生

1、形成场所:

睾丸的曲细精管

2、形成时期:

从初情期开始,直到生殖机能衰退

3、形成过程:

第一阶段——位于曲细精管管壁的精原细胞,通过有丝分裂,产生多个初级精母细胞。

每个次级精母细胞产生2个含单倍体染色体的精子细胞

2个次级精母细胞

MⅠ

1个初级精母细胞

MⅡ

第二阶段——精细胞的形成

第三阶段——圆形的精子细胞变形

细胞核→精子头的主要部分

高尔基体→头部的顶体

中心体→精子的尾

线粒体→精子尾基部的线粒体鞘膜

其他物质→原生质滴(最后脱落)

4、精子的形态:

外形似蝌蚪,包括头、颈、尾三部分组成。

不同动物精子的形态相似,大小略有不同。

动物精子的大小与动物的体型大小无关。

三、卵子的发生

(1)形成场所:

卵子的发生是在卵巢内完成的。

(2)形成时期:

性别分化以后

(3)形成过程:

Ⅰ、胎儿期

主要的变化:

形成卵泡,在卵巢中储备。

初级卵母细胞的存在形式:

被卵泡细胞包围,形成卵泡。

Ⅱ、初情期后

主要的变化:

初级卵母细胞减数分裂成为成熟的卵子。

首先:

初级卵母细胞生长

场所——卵巢中

结果——形成透明带、卵黄膜

其次:

减数第一次分裂

场所——卵巢

结果——产生1个次级卵母细胞和第一极体,进入输卵管,准备与精子受精。

完成时间——排卵前后。

举例:

排卵前如:

马、犬;排卵后如:

绵羊、牛、猪。

思考:

什么是排卵?

指卵子从卵泡中排出

场所——输卵管

时间——精子与卵子结合的过程中完成

结果——产生一个成熟的卵子和第二极体

思考与探讨:

问题1:

什么是判断卵子是否受精的标志?

 

   卵黄膜和透明带的间隙可以观察到两个极体,说明卵子已经完成受精。

问题2:

一个卵泡中能形成几个成熟的卵子?

正常情况下,一个卵泡只能形成一个成熟的卵子。

问题3:

刚排出的卵是成熟的卵子吗?

它在母体的什么部位与精子受精?

刚排出的卵子尚未完全成熟,仅完成第一次减数分裂,需要在输卵管内进一步成熟,直到第二次减数分裂的中期才能与精子结合完成受精过程。

排出的卵子是在输卵管内与精子受精的。

四、精子与卵子的发生比较

场所

开始时间

细胞增殖方式

子细胞数目

是否变形

重要区别

精子

睾丸

初情期以后

先有丝分裂,后减数分裂

4个

精子细胞

变形

哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的储备是在出生前完成的;

而精子是从初情期开始的。

卵子

卵巢

输卵管

性别分化以后

先有丝分裂,后减数分裂

1个卵细胞

3个极体

不变形

五、受精

1、概念:

指精子和卵子结合形成合子(即受精卵)的过程。

2、标志:

在卵黄膜和透明带的间隙可以观察到两个极体时。

3、场所:

受精是在输卵管内完成的。

4、过程

(1)受精前的准备阶段

准备阶段1:

精子获能

①获能:

成熟的精子在雌性动物生殖道内发生相应生理变化后,获得受精能力的过程。

②卵泡夜、输卵管分泌物、血清等液体可以使精子获能。

准备阶段2:

卵子的准备

卵子在输卵管内达到减数第二分裂中期(MⅡ中期)时,才具备受精能力。

思考与探讨:

进行体外受精时,将卵母细胞取出后,是否应当将它置于与输卵管中相似的环境,让它进一步成熟?

是的。

从卵巢上取出的卵母细胞还没有成熟,尚未完成第一次减数分裂。

应在体外人工模拟输卵管环境进行培养,才能使其成熟,即达到受精前的成熟阶段。

(2)受精阶段

主要包括:

精子穿越放射冠和透明带,进入卵黄膜,原核形成和配子结合四个阶段

ⅰ精子穿越放射冠和透明带

①过程:

精、卵相遇→发生顶体反应(顶体酶释放溶解卵丘细胞即放射冠)→穿越放射冠接触透明带→顶体酶溶解透明带→穿越透明带接触卵黄膜→产生透明带反应

②基本概念

放射冠:

包围在卵子透明带外面的卵丘细胞

顶体反应:

或能的精子在雌性动物的生殖道与卵子相遇时出现精子顶体膨大,精子质膜(外膜)和顶体膜局部融合,并在融合处形成一些泡状物,随后脱落,造成精子顶体外膜出现孔洞,使顶体内储尝的酶释放。

透明带反应:

当精子穿越透明带接触卵黄膜时,卵子发出指令,阻止后继精子进入透明带的一种生理反应。

ⅱ进入卵黄膜

①过程:

精子被微绒毛抱合→精子外膜与卵黄膜融合→精子进入卵→卵黄膜封闭作用

②基本概念

卵黄膜封闭作用:

当第一个精子进入卵黄膜后,引起卵黄膜的紧缩增厚,阻止其他精子进入卵内与卵子结合受精

ⅲ原核形成:

形成雄原核与雌原核

ⅳ配子结合:

雄原核与雌原核发育、移动、接触,合并形成受精卵

小结:

精、卵相遇→发生顶体反应(顶体酶释放溶解卵丘细胞即放射冠)→穿越放射冠接触透明带→顶体酶溶解透明带→穿越透明带接触卵黄膜→产生透明带反应(防止多个精子进入透明带,引起多精子入卵受精的第一道屏障)→精子被微绒毛抱合→精子外膜与卵黄膜融合→精子进入卵→卵黄膜封闭作用(防止多精子入卵受精的第二道屏障)→原核形成→配子结合

六、胚胎发育

1、最初发育场所:

输卵管

2、分裂方式:

有丝分裂

3、过程:

受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚→原肠胚→胎儿形成

(1)卵裂期的特点:

细胞分裂方式为有丝分裂,细胞数目增加,胚胎总体积不增加,或略有缩小。

(2)桑椹胚:

细胞属于全能细胞,胚胎细胞数目32个左右。

(3)囊胚:

细胞开始分化。

形成:

内细胞团——聚集在胚胎的一端,个体较大的细胞,将来发育成各种组织。

滋养层——沿透明带内壁扩展和排列的,个体较小的细胞。

将来发育成胎膜、胎盘。

囊胚腔——含有液体的囊腔。

囊胚进一步扩大会导致孵化。

(4)原肠胚:

内细胞团表皮的细胞形成外胚层,下方的细胞形成内胚层,出现原肠腔。

外胚层(内细胞团表皮的细胞形成)

神经系统、感觉器官

内胚层(内细胞团下方的细胞形成)

表皮及其附属结构

肝、胰等腺体

消化道、呼吸道上皮

中胚层

(外胚层细胞在胚盘正中线处形成一条增殖区,该区的细胞增殖分裂,进入内、外胚层之间形成的)

皮肤真皮

脊索、肌肉、骨骼

内脏器官外膜

循环系统

排泄系统

生殖系统

3.3胚胎工程的应用及前景

一、胚胎移植

1、概念:

将雌性动物的早期胚胎,或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎,移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物的体内,使之继续发育为新个体的技术。

供体:

提供胚胎的个体。

受体:

接受胚胎的个体。

问题一:

胚胎移植成功与否要具备的条件是什么?

答:

(1)胚胎移植一般应在同种的雌性供体和受体之间进行

(2)进行胚胎移植的供体和受体的生理状态要相同

2、应用

胚胎移植是转基因、核移植,或体外受精等技术的最后一道“工序”。

3、胚胎移植的现状

①近20年来,在牛的胚胎移植中,技术更为简单、实用。

羊的胚胎移植效率比奶牛还要高。

②自20世纪60年代以来,我国家兔、绵羊、牛、马和山羊的胚胎移植相继获得成功。

③近10年来,羊、牛的在我国部分地区已进入生产应用阶段。

4、胚胎移植的意义

胚胎移植的优势可以充分发挥雌雄优良个体的繁殖能力。

在这项技术中,供体的职能—产生优良遗传特性的胚胎,受体担任妊娠和育仔的任务。

因此缩短了供体本生的繁殖周期。

其次,实施超数排卵处理,可获得多枚胚胎,使得一胎多产。

具体的意义可以小结如下:

(1)加速育种工作和品种改良

通过胚胎移植,可大幅度增加优良个体母畜和公畜后代的数量,使良种畜群迅速扩大,从而加速了育种工作和品种改良。

(2)大量节省了购买种畜的费用

在世界范围内,胚胎移植不受时间和地域的限制,在国际国内进行交换,从而完全代替了活畜引种,节省费用。

(3)一胎多产

(4)保存品种资源和濒危物种

(5)可充分发挥优秀个体的繁殖潜能

a、缩短供体的繁殖周期

b、增加供体一生繁殖的后代数量

5、胚胎移植的生理学基础

(1)供体和受体生殖器官的生理变化相同,为胚胎提供相同的生理环境

(2)早期胚胎没有与母体子宫建立组织联系,处于游离状态,为胚胎的收集提供了可能

(3)受体对外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应,为胚胎存活提供可能

(4)胚胎能与受体子宫建立正常的生理和组织联系,但遗传物质不受影响

6、胚胎移植的基本程序(以牛的胚胎移植为例)

选择

供体母牛

受体母牛

同期发情处理

超数排卵

供体公牛

配种或人工受精

冲卵(配种或输精后第7天,将供体母牛子宫内的胚胎冲出)

质量检查(检查是否发育到桑椹胚或囊胚阶段)

胚胎移植(方法:

手术法;非手术法)

妊娠检查

分娩(受体母牛产下胚胎一致的犊牛)

(1)选择——对供、受体牛进行选择

供体牛:

选择遗传性能和生产性能优秀的个体

受体牛:

选择有健康的体质和正常繁殖能力的个体

(2)过程中的处理方法

A、用激素进行同期发情处理

使供、受体的生理条件达到同步或一致,从而使供体的胚胎移植到受体后相同或相似的生存条件——这是胚胎移植的关键

B、超数排卵处理

注射促性腺激素对供体母牛进行超数排卵处理,这是获得多个胚胎的保证

(3)保存:

-196℃的液氮保存

例1、“试管婴儿”技术属于(  A )

A.胚胎移植          B.组织培养C.克隆技术     D.基因工程

例2、下列有关动物胚胎移植的叙述中,错误的是(A)

A.受孕母畜体内的受精卵或胚胎均能移植

B.受体母畜必须处于与供体母畜同步发情的状态

C.超数排卵技术要使用一定的激素

D.试管婴儿只是受精及早期卵裂过程在试管中进行

例3、“冲卵”是指( D)

A.把受精卵从子宫冲洗出来               B.把卵细胞从子宫冲洗出来

C.把卵细胞冲散,便于收集               D.把胚胎从子宫冲洗出来

小结:

胚胎移植成功率的高低与供、受体生理环境的一致性密切相关,只有供、受体生理环境高度一致,移入受体的胚胎才能被接受,并继续发育。

因此,胚胎移植实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。

作为胚胎工程的最终技术环节,也将推动胚胎工程其他技术的研究和应用。

接下来让我们了解另一胚胎工程技术—胚胎分割

二、胚胎分割

1、概念:

采用机械方法将早期胚胎切割成2等份,4等份或8等份等,经移植获得同卵双胎或多胎的技术。

就胚胎分割技术本身而言,是将同一胚胎分割成几部分,借助胚胎移植技术产生遗传物质完全相同的后代,是一种无性繁殖的方式,属于动物克隆的一种方法。

2、特点:

后代具有相同的遗传物质

3、选择的胚胎:

发育良好的,形态正常的桑椹胚或囊胚

4、使用的主要仪器:

实体显微镜和显微操作仪

5、具体操作:

将胚胎移入盛有操作液的培养皿中,用分割针或分割刀片将其切开,吸取其中半个胚胎,注入预先准备好的空透明带中,或直接将裸半胚移植给受体。

注意:

对囊胚阶段的胚胎进行分割时,要将内细胞团均等分割

内细胞团将来发育为胎儿的各种组织,其他细胞为滋养细胞,只为胚胎和胎儿发育提供营养。

若分割时不能将内细胞团均等分割,会出现含内细胞团多的部分正常发育的能力强,少的部分发育受阻或发育不良,甚至不能发育等问题。

问题二:

为什么胚胎分割的份数越多,操作的难度会越大,移植的成功率也越低?

答:

早期胚胎的体积很小,只有在显微镜下才能看到;细胞数目有限的;分割的份数越多,难以做到均等分割,从而影响

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