免疫室SOP文件Word格式.docx

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包装：

96T×

1

试剂配置：

浓缩洗涤液50ml×

1瓶

样品稀释液12ml×

HCV酶标板8×

12孔或12×

8孔

HCV酶标试剂12ml×

HCV阳性对照0.2ml×

1支

HCV阴性对照0.2ml×

底物液A、B液各6ml×

终止液6ml×

自封袋1个

封版膜2X

说明书1份

3．2测定仪器：

酶标仪：

XX安泰modelMT-858

洗板机：

ANALYTECH828

4、操作步骤：

4．1配液：

浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

4．2编号：

将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔〔空白对照孔只加稀释液不加样品及酶标试剂〕其余各孔参加100UL样本稀释液。

4．3加样：

分别在相应孔中参加待测样品，阴，阳对照10微升，轻轻振荡混匀。

4．4温育：

用封版膜封版后，置37oc温育60分钟。

4．5洗涤：

揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

4．6加酶标抗体：

空白对照孔不加酶标试剂，每孔参加酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。

4．7温育：

置37oc温育30分钟。

4．8洗涤：

揭掉封版膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干

4．9显色：

每孔参加显色剂A，B液各1滴〔50微升〕，轻轻振荡匀，37oc避光显色30分钟。

4．10终止：

每孔加终止液1滴〔50微升〕，轻轻振荡混匀。

4．11测定：

10分钟内测定结果，设定酶标仪单波长450nm或双波长450nm/600-650nm测定。

用空白孔调零点后测定各孔A值。

5：

结果判断

5．1目测：

在白色背景下观察各孔显XX况，有明显黄色者为丙型肝炎病毒抗体〔抗HCV〕阳性；

无色者为丙型肝炎病毒抗体〔抗HCV〕阴性。

5．2酶标仪检测：

5．2．1临界值〔CUT/OFF〕计算：

CUT/

5．2．2阳性判定：

样品A值≥临界值〔CUTOFF〕者判为抗HCV阳性。

（注意初试阳性应重新取样双孔复试）

5．2．3阴性判定：

样品A值<

临界值〔CUTOFF〕者判为抗HCV阴性。

6：

考前须知：

6．1本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进展。

封版膜不能重复使用，不同批号酶标板、酶标试剂和阴阳对照不可混用，不能与其他厂家试剂混用。

6．2防止在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂〔如84消毒液〕的环境下操作。

6．3使用前请将试剂平衡至室温〔平衡30分钟以上〕实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2-8oc.未用完的微孔板条与枯燥剂一起用自封袋密封2-8oc保存。

过期试剂请勿使用。

6．4加样时必须使用加样器，并经常校对加样器的准确性。

参加不同样品或不同试剂组分时，用更换加样器吸头和加样槽，以防出现穿插污染。

6．5洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。

使用洗板机应设定30-60秒浸泡时间。

再洗板完毕后，必须立即进展下一步，不可使酶标板枯燥。

防止长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。

6．6结果判定必须以酶标仪读数为准。

读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。

不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。

6．7所有样品、废液和废弃物都应按传染物处理。

终止液为硫酸，使用时必须注意平安。

6．8显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。

6．9由于ELISA反响原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HCV感染的可能。

检测的阳性结果必须结合临床信息进展分析。

7：

临床意义：

检测人血清或血浆中的HCV抗体。

适用于血液的筛查及临床丙型肝炎病毒感染的辅助诊断。

梅毒螺旋体抗体〔酶联免疫法〕

本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。

在微孔条上预包被梅毒螺旋体抗体基因重组抗原，配以酶标记抗原及TMB显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。

2.5标本接收：

TP酶标板8×

TP酶标试剂12ml×

TP阳性对照0.2ml×

TP阴性对照0.2ml×

显色剂A、B液各6ml×

将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔〔用双波长检测，可不设空白对照孔〕

分别在相应孔中参加待测样品，阴，阳对照100微升，轻轻振荡混匀。

空白对照孔不加酶标试剂，每孔参加酶标记抗体100微升，轻轻振荡混匀。

用封版膜封板后，置37oc温育30分钟。

10分钟内测定结果，设定酶标仪波长于450nm〔建议双波长450nm/600-650nm测定〕用空白孔调零点后测定各孔A值。

在白色背景下观察各孔显XX况，有明显黄色者为梅毒螺旋体抗体〔TP-AB〕阳性；

无色者为梅毒螺旋体抗体〔TP-AB〕阴性。

临界值=阴性对照孔A均值+0.18。

样品A值≥临界值〔CUTOFF〕者判为TP阳性。

（注意:

初试阳性应重新取样双孔复试）

临界值〔CUTOFF〕者判为TP阴性。

检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。

适用于血液的筛查及临床梅毒螺旋体抗体感染的辅助诊断。

乙肝五项操作规程

1、目的：

通过对乙型肝炎病毒抗原、抗体系统的检测，用于乙肝的临床诊断，还可应用于对供血员的乙肝筛选、乙肝流行病学的调查，了解各地人群乙型肝炎感染状况。

此外，还可用于乙肝疫苗免疫效果的观察。

2、方法：

酶联免疫吸附试验〔EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA〕

试验过程大致分三个步骤：

包被：

将抗原或抗体通过物理吸附结合到固相载体外表，使抗原或抗体固相化。

抗原抗体反响：

先后参加被检标本和酶标记物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反响而被结合固定，经洗涤除去游离的酶标记物。

酶促反响：

在反响体系中参加酶的相应底物，使之发生酶促反响而显色。

3.临床意义：

HBV抗原抗体血清学标志与临床关系较为复杂，必须结合临床特点，对各项检测结果进展综合分析，必要时进展HBV-DNA的检测。

常见的HBV抗原、抗体血清学标志物检测结果的分析见下表：

HBsAg

HBsAb

HBcAb

HBeAg

HBeAb

结果分析

IgM

IgG

＋

—

潜伏期、感染早期或无病症携带者

急性乙型肝炎

＋/—

急性乙型肝炎后期或慢性感染

曾感染过HBV

感染过HBV或接种乙型肝炎疫苗后

乙型肝炎外表抗原〔HBsAg〕

采用抗-HBs包被反响板，参加待测样本，经孵育后，参加抗-HBs-HRP,当样本中存在HBsAg时，该HBsAg与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，参加TMB底物产生显色反响，反之那么无显色反响。

血清：

采血后，室温下自然放置1-2小时，待血液凝固、血块收缩后，在于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。

血浆：

采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀6-8次后，充别离心，将血浆与血细胞别离后，吸出血浆待用。

一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8oc保存。

如需长期保存，可在-20℃保存，并防止反复冻融。

英科新创〔XX〕科技

国药准字S10910148

48T×

1、96T×

25倍浓缩稀释液40ml×

HBsAg微孔反响板96孔

HBsAg酶结合物6.2ml×

HBsAg阳性对照1.0ml×

HBsAg阴性对照1.0ml×

显色液A、B液各8.0ml×

终止液7ml×

封板纸5片

XX安泰MODELMT-858

洗扳机：

ANALYTECH828

配制工作浓度洗涤液〔以纯化水做25倍稀释〕

将样品对应微孔按序编号〔共预留阴性对照孔3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔〕

4．3加样：

参加75微升待测样本和阴、阳性对照与反响孔中。

用封片纸覆盖反响板后，置37oc温育60分钟。

4．5加酶标抗体：

取出反响板，撕去封片，在已参加待测样本和阴性、阳性对照孔中参加50微升酶结合物。

微孔振荡器或手工轻轻振荡10秒钟。

4．6温育：

用封片纸覆盖反响板后，置37oc温育30分钟。

4．6洗涤：

4．6．1手工：

扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。

4．6．2洗板机：

将孔内液体甩干。

选择5次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。

4．7显色：

每孔参加显色剂A，B液各1滴〔50微升〕，轻轻振荡匀，用封板纸覆盖反响板后，将反响板放置37oc孵育30分钟。

4．8终止：

每孔加终止液1滴〔50微升〕，混匀。

4．9测定：

用酶标仪读数，波长450nm。

〔建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm或630相近的波长〕假设需扣除显色剂空白，那么先用显色剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。

在白色背景下观察各孔显XX况，有明显黄色者为乙型肝炎外表抗原〔HBsAg〕阳性；

无色者为乙型肝炎外表抗原〔HBsAg〕阴性。

COV:

Cut-offValue参考值

PC：

阳性对照OD值

NCx:

阴性对照平均OD值。

NCx=（NC1+NC2+NC3）÷

3

检测有效性：

NCx≤0.1、PC≥1.0,那么检测结果有效。

COV=NCx+0.100

S:

待测样品的OD值，S/COV：

待测样本和COV的比值。

样品OD值S/COV≥1.0者判为HBsAg阳性。

样品OD值S/COV<

1.0者判为HBsAg阴性。

6．1从冷藏环境中取出时应室温平衡至室温前方可使用，未用完的微孔条用加有枯燥剂的自封袋密封保存。

在平衡试剂的同时，待测样本需平衡至室温后再行测试。

6．2使用前试剂应摇匀。

6．3显色过程必须封片。

所有封片纸不能重复使用。

6．4结果判断须在反响终止后10分钟内完成。

6．5严格按操作步骤进展，不同批次试剂不可混用。

6．6洗板机洗板是应时常检查加液头，确保其畅通无阻塞，洗板是所用的吸水纸请勿反复使用。

洗板机的管路用纯化水冲洗，以防阻塞和腐蚀。

6．7待测样品不可用NaN3防腐。

6．8本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

检测人血清或血浆样本中的乙型肝炎病毒外表抗原，用于血源筛查及临床乙型肝炎病毒感染的辅助判断。

乙型肝炎外表抗体〔抗-HBs〕

采用纯化HBsAg包被反响板，参加待测样品，同时参加HBsAg-HRP，如待测样品中含有抗-HBs时，该抗-HBs就与包被HBsAg、HBsAg-HRP结合形成HBsAg-抗-HBs-HBsAg-HRP复合物。

参加TMB底物产生显色反响，反之就显色反响。

国药准字2021第3400702

HBsAb包被板96孔

HBsAb酶标记抗体6.21ml×

HBsAb阳性对照1.0ml×

HBsAb阴性对照1.0ml×

底物液A、B液8.0ml×

终止液7.0ml×

1瓶

封片2片

说明书1份

浓缩洗涤液配置前充分混匀〔如有结晶析出应充分溶解〕，将浓缩洗涤液〔20*〕用蒸馏水或去离子水按1：

19稀释后使用。

将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔〔空白对照孔不加样品及酶标试剂〕

分别在相应孔中参加待测样品50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。

4．4加酶标抗体：

空白对照孔不加酶标试剂，每孔参加酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。

4．5温育：

扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置5秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。

选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。

每孔参加显色剂A，B液各1滴〔50微升〕，轻轻振荡匀，37oc避光显色15分钟。

用酶标仪读数，取波长450nm〔建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm〕测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。

在白色背景下观察各孔显XX况，有明显黄色者为乙型肝炎外表抗体〔抗－HBs〕阳性；

无色者为乙型肝炎外表抗体〔抗－HBs〕阴性。

COV=阴性对照平均OD值×

样品的OD值大于或等于COV值时，说明HBsAg阳性。

样品OD值小于COV值时，说明为HBsAg阴性。

6．1从冷藏环境中取出时试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反响条应置37℃应室温平衡30分钟方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。

在平衡试剂的同时，待测样品需置室温平衡30分钟后在进展测试。

6．2使用前试剂应摇匀，并弃去1-2滴后垂直滴加。

6．3封片不能重复使用。

6．5严格按操作步骤进展，不同批次试剂不得混用。

6．6待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。

6．7本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。

乙型肝炎核心抗体〔抗-HBc〕

采用基因工程重组HbcAg包被反响板，参加待测样品，同时参加抗-HBc-HRP，与抗原形成竞争结合，如待测样品中抗-HbcAg含量高，那么抗-HBc-HRP与HbcAg结合少，参加TMB底物时显色淡，反之那么显色深。

国药准字2021第3400700

HBcAb包被板96孔

HBcAb酶标记抗体6.21ml×

HBcAb阳性对照1.0ml×

HBcAb阴性对照1.0ml×

浓缩洗涤液配置前充分混匀〔如有结晶析出应充分溶解〕，将浓缩洗涤液〔25*〕用蒸馏水或去离子水按1：

将待测样本用生理盐水1:

30稀释。

〔稀释样本检测结果为临床意义；

样本原液加样，检测结果为流行病学意义。

用户可根据实际情况选择。

〕分别在相应孔中参加稀释样本50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。

4．6．1手工