分子生物学方法推测年龄研究进展Word文件下载.docx
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多物质随着年龄的变化而发生改变,目前有几种物质随着
年龄的改变而发生变化,一种是质的变化,一种是量的变
化。
胶质原存在于人体的各种组织、器官中,胶质原含有d
型、l型天冬氨酸。
尤其在牙釉质、牙本质中,d型、l型天
冬氨酸的含量随着年龄的增加会发生改变,d型天冬氨酸
随着年龄的增加而增加,而l型天冬氨酸随着年龄的增加
而发生消旋作用,转变为d型天冬氨酸而含量下降。
d型/
l型天冬氨酸的比值随着年龄的增加而增加。
在牙本质中
这种变化较稳定,适合于用d型/l型天冬氨酸估计个体的
年龄_1j。
国外许多学者建立了利用天冬氨酸的消旋作用
推测年龄的方法。
20XX年,pilin等利用此方法计算15~95
岁之间的样本,年龄与d/l型天冬氨酸的比值的关系,其
相关系数达到0.93。
此方法的优点在于当牙齿的形态遭到
严重破坏时,可以利用牙本质中天冬氨酸的稳定性来估计
个体年龄。
此方法在实际应用中,水解蛋白质和手性分离、
检测氨基酸的衍生物尤为重要,影响结果的准确性,可应用
gc、hplc、毛细管电泳进行手性分离和检测ll。
随着年龄的增长,人体的体细胞线粒体产生的自由基
增多,自由基的增多会对dna产生损伤。
尤其活性氧弓l起
的dna氧化性损伤,导致碱基结构的损伤,进而引起dna
在体内复制时发生突变。
自由基对核dna和线粒体dna
都会产生损伤,由于线粒体dna没有组蛋白和hmg蛋白
的保护,更容易产生损伤【6-8。
活性氧对dna的损伤,表
现在dna的碱基形成加合物,在复制过程中,这些碱基产
生错配,导致突变。
活性氧是结构最简单、稳定性最差、氧
化性最强、与四种碱基的反应活性最强的自由基,因此在细
胞中最多见的是活性氧导致的碱基损伤,活性氧攻击碱基
的不饱和键形成碱基加合物。
人体也存在抗自由基损伤的
修复能力,但随着年龄的增加,修复能力下降。
活性氧可和
碱基形成8一oh—g、5一oh—dg、5一oh—du、8一oxo
—da,dug、2一oh—da碱基加合物_6j。
通过对动物细
胞和体外培养细胞的研究,发现随着年龄的增长细胞的碱
基加合物含量会增加,其中8一oh—da、8一oh—g含量
最多。
检测碱基加合物和正常碱基的含量,可用于推测个
体的年龄,但这种方法只能粗略估计年龄,适合于组织碎块
的年龄估计。
在人类染色体的末端存在端粒,端粒由蛋白质和dna
组成,真核生物的线型染色体都存在端粒。
端粒dna不存
在蛋白质编码基因,端粒基本由六核苷酸核心重复单位
(111aggg)组成,其中有的重复单位存在变异,重复序列问
亦存在一些插人序列。
端粒虽然不存在功能基因,但端粒
起着稳固基因组、保护染色体末端、决定核内染色体定位作
用及调控体细胞复制作用l9。
由于端粒调控着体细胞
的分裂、复制,体细胞分裂、复制有一定复制生命周期,端粒
决定体细胞分裂次数,可以说是细胞分裂的“生物钟”,因为
端粒不能进行半保留复制,其复制依赖于端粒酶的存在。
大部分体细胞不存在端粒酶,体细胞每分裂一次,端粒就丢
失一段,随着细胞分裂而不断缩短,因而端粒的长度反映细
胞复制历史。
也可以说端粒长度随着个体的年龄变化而缩
短,反映生物个体的年龄变化。
而端粒长度的变化不受体
法律与医学杂志20XX年第1o卷(第1期)
外因素的影响。
细胞每分裂一次,不同的细胞缩短的长度
不同,因此端粒长度可以作为推断年龄的一个理想标
记[1卜15]。
端粒长度的检测方法目前有trf(末端限制性片段
法)、fish(荧光原位杂交法)、a(杂交保护法)等。
这些
方
法检测都是46条染色体端粒的平均长度,而不同染色体
的端粒长度存在差别,以及同一染色体的两个端粒亦存在
差别[16]。
通过检测平均长度而推测年龄,误差较大。
如果
能准确检测一个端粒的长度,推测年龄准确性将大大提高。
随着分子生物学和分子遗传学及相关技术的发展,用
分子生物学方法可以准确推测个体的年龄。
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(收稿:
2o02一l1—06)