实验2 线粒体和液泡系的超活染色与观察文档格式.docx

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生物科学

科目：

分子细胞生物学实验学号：

12050011006

线粒体与液泡系的超活染色与观察

一、实验目的

1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；

2、学习一些细胞器的超活染色技术。

3、观察豆芽根部细胞的液泡分布

2、实验原理

　　１、詹纳斯绿B染液被线粒体中的细胞色素氧化酶氧化而呈现蓝绿色，在细胞的其他部位因保持还原状态而呈现无色。

２、中性红染液为一种碱性染液，易随外周染液进入液泡，因液泡内环境偏酸性，所以使液泡被染上红色。

三、实验材料

黄豆幼根根尖、人口腔上皮细胞，Ringer试剂，詹纳斯绿B染色液，中性红染液

4、实验方法

黄豆幼根根尖的超活染色

（1）、使用中性红染液

将黄豆幼根根尖小心地纵切一薄片

将纵切片浸入到载玻片上的中性红染液中染色１０分钟

用吸水纸轻轻地把染液吸掉，再向标本中滴加Ringer试液

盖上盖玻片，用镊子轻压玻片后，在显微镜下观察

（２）、使用詹纳斯绿B染液

将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液中染色10分钟

（３）、使用詹纳斯绿B和中性红染液混合染色

①先加詹纳斯绿B，后加中性红染液

向载玻片上的标本滴加中性红染液再染色１０分钟

②、使用詹纳斯绿B和中性红染液同时染色

将纵切片浸入到载玻片上的詹纳斯绿B染液和中性红染液的混合物中染色10分钟

人口腔上皮细胞的超活染色

（1）、使用詹纳斯绿B染色

用消毒牙签的钝端在口腔上皮轻轻地挂取部分上皮细胞

在载玻片上滴加詹纳斯绿Ｂ染液，将牙签上的内容物在染液中混匀

染色10分钟后，在显微镜下观察

（２）、使用中性红染色

在载玻片上滴加中性红染液，将牙签上的内容物在染液中混匀，染色10分钟

盖上盖玻片，在显微镜下观察

五、实验结果

1、观察根尖的染色情况

图1、根部伸长区的切片及其在中性红染色下显示的液泡。

图2、根部成熟区的切片及其在中性红染色下显示的液泡。

图3、根部成熟区用詹纳斯绿B染色，蓝色部位为线粒体，图中液泡因染色较浅而呈现。

图4、根部用詹纳斯绿和中性红染液染色，两种试剂同时加入。

图5、根部先用詹纳斯绿B染色，后用中性红染色，所示液泡。

2、观察口腔上皮细胞的染色情况

图6、口腔上皮细胞用詹纳斯绿B染色，蓝色部位为线粒体。

图7、口腔上皮细胞用中性红染色，图中褶皱（箭头所指）为高尔基体。

六、思考题

1.用一种活体染色剂对细胞进行超活染色，为什么不能同时观察到线粒体、液泡系等多种细胞器？

2.因为詹纳斯绿B染液是通过被细胞色素氧化酶氧化而显蓝色的；

中性红染液时通过植物的活细胞大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应，因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现红色，而进行染色的；

染色机制不同，所以无法同时染色。

但是实验发现，在詹纳斯绿B染液染色时，在适当的染液浓度范围内，适当的染色时间里，在合适的细胞（代谢较为旺盛，线粒体较多）里，詹纳斯绿B染液可以把线粒体染色，而液泡由于染色程度较浅而显现。

2、黄豆根尖经中性红超活染色，为什么看到生长点的细胞中液泡多，而且染色深，延长区细胞中液泡数量变少，染色浅？

在生长点的细胞，由于分裂很快，所以细胞小、细胞质浓、细胞核大、代谢旺、液泡多、液泡小，细胞的代谢较快，所以液泡内酸性较强，所以染色液较深；

而在延长区的细胞，由于分裂较慢，以延长为主，所以细胞的液泡个数较少、而液泡较大，细胞的代谢较为缓慢，所以液泡内的酸性较弱，所以染色较浅。

七、总结与讨论

1、通过对图1至图2的对比，通过对根不同部位在光镜下的观察，发现：

液泡在分生区较小，数目较少，染色较浅，再向成熟区的过渡中，液泡数目变多，并逐渐有融合之势，染色液逐渐加深。

　　2、在通过詹纳斯绿B对根部的染色发现，仅十分钟，詹纳斯绿B只能将表皮附近的细胞染上颜色，这可能是由于植物细胞的细胞壁的阻拦。

对被染上色的细胞进行观察后发现，细胞质中线粒体被染成了蓝色，液泡亦被染上颜色，但颜色相对较浅（图3），所以可以看见液泡。

　　3、中性红和詹纳斯绿B染液都对黄豆根部细胞染色时，詹纳斯绿B会覆盖中性红染液的颜色，而导致观察结果模糊。

　　4、用中性红染液对口腔上皮细胞进行染色时发现，可以较为清晰的看到细胞内的高尔基体结构。