培养基验收作业指导书删减版Word文件下载.docx

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4.3.2称量

　　称量时要用专用的角匙，避免交叉污染而影响检验结果；

干粉培养基易吸潮，如房间环境湿度较大时，应提高称量速度，完毕后及时盖紧瓶盖。

4.3.3复水

　　复水时应注意以下事项：

a）不得用铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长；

b）容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出；

c）加热培养基时一定要进行搅拌，特别是琼脂类培养基；

d）为避免烧焦和沸腾溢出，对于少量的培养基最好使用沸水浴进行加热；

e）含有琼脂粉的培养基，在加热溶解之前可以浸泡数分钟；

f）对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热，最多只能加热两次，第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去；

g）烧糊的培养基营养物质被破坏，并可产生有毒物质，如发现焦化，或未溶解均匀前培养基有溢出，该培养基即不能使用，应重新制备。

4.3.4灭菌

　　培养基采用高压蒸汽灭菌（湿热灭菌），通常是121℃15min，含糖或特殊培养基，按照国家标准或生产商提供的说明灭菌。

已配制好的培养基必须在15分钟内灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。

为避免高温破坏培养基的营养成分，降低琼脂的凝胶强度，必须严格控制灭菌温度和时间，不可重复灭菌。

4.3.5pH测定

　　在初次使用每批培养基时，均需随同检测配制一个测试培养基，在灭菌或消毒后应在25℃温度下采用精密PH试纸测试PH值，并判断是否符合要求；

使用过程中，如果需要调整培养基的pH，应用1mol/LNaOH或lmol/LHCL调整，注意不可反复调pH，否则会影响培养基的渗透压。

4.3.6配制好的培养基标识和保存

灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。

同时填写配制记录。

内容：

名称、配制量、配方（比）、操作中的重要参数（时间、压力、温度）、配制日期、配制者、截止使用日期。

在每个已灭菌的培养基容器外做好标记，注明名称、配制日期、使用期限和配制人。

培养基保存注意事项：

1）环境条件：

各种培养基均应在洁净的普通冰箱内保存，以2-8℃左右为宜，不得冻结。

2）保存时限:

基础培养基应在30天内用完。

鉴别培养基应在21天内用完。

选择性分离鉴别培养基制成平板后当日用完,置保鲜膜（袋）密闭保存期限可延长至一周。

从外单位购买的培养基保存时限按照产品标注的时限执行.

4．4培养基批号的的管理

培养基的批号由6位阿拉伯数字组成，批号为年、月、日，各取2位，年份取后2位，月和日不足2位时，分别在数字前加0，表明是本日配制的批号。

如2004年6月4日配制的培养基，批号为040604。

4.5质量检查

购置的同一批次培养基其质量检查应能通过无菌检查（制备好的培养基经30～35℃培养48小时，真菌培养基经20～25℃培养72小时候后，应无菌生长）、新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，经检查合格的该批次培养基方准许使用，否则不准使用，做好检查记录。

。

成品培养培养基的质量控制应包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室培养基质量控制性能测试记录及评估报告

4.5培养基的性能测试

新购的不同批次的商品化培养基在使用前应进行培养基性能测试，包括物理指标和微生物指标的测试，根据测试结果及时填写“实验室培养基质量控制性能测试记录及评估报告，菌株的选择参考SN/T1538.2-2007《培养基制备指南第2部分：

培养基性能测试实用指南》。

4．5．1物理指标控制

1）测试20℃～25℃的pH值

2）琼脂层厚度；

色泽；

透明度和（或）是否存在肉眼可见杂质；

4．5．2微生物污染的控制

从每批制备好的培养基中选取至少一个（或1%）平板或试管，置于35-37℃或按特定标准中规定的温度培养48h应无菌生长，真菌培养基经20～25℃培养72小时候后，应无菌生长。

4．5．3微生物学指标控制

可根据要求选用定量方法、半定量方法或定性方法（详见表1-表）对培养基性能进行测试，具体操作方法如下：

（1）生长率

将适量测试菌株的工作培养物接种至固体、半固体和液体培养基中，每种培养基上菌株的生长率应达规定的最低限值。

1）定量方法

生长率PR的计算：

PR=NS/NO

NS：

从一个或多个待测培养基平板上得到的菌落总数。

N0：

从一个或多个规定的参考培养基平板上获得的菌落总数（该菌落总数应≥100cfu）。

要求：

非选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.7，该类培养基应易于目标菌生长；

选择性培养基上目标菌的生长率最低应为0.1；

每平板（或每试管）的接种水平为10CFU～100CFU。

2）半定量方法

半定量方法采用生态测量技术在平板上划线，平板板连续划线区域得分的总和即为生长指数G，G值不应超过标准规定的允许范围。

3）定性方法

定性方法采用划线法观察。

①选择性

将浓度为104CFU/mL～106CFU/mL的非目标菌工作菌株悬浮液接种至选择培养基和参考培养基中，培养基的选择性应达到规定值。

②定量方法

选择因子SF：

SF=DO-DS

DO：

能在参考培养基上生长至少10个菌落的最高稀释度

DS：

能在测试培养基上显示生长的最高稀释度

非目标菌在选择性培养基上的SF至少为2；

半定量和定量法中，非目标菌应部分或全部被抑制。

③生理生化特性（选择性和特异性）

规定培养基的基本特性，使用一套适当的测试菌株对培养基上的目标菌的生理生化特性（菌落形态、大小等）和非目标菌的被抑制程度进行测试。

（2）性能评价和结果解释

按照规定得到的所有测试菌株的性能均符合规定，则该批培养基品质优良；

若只有物理指标和微生物指标符合规定，则该批培养基可被接收。

表1计数用选择性培养基

培养基

用途

培养条件

测试菌株

参考培

养基

控制方法

判定标准

特征反应

Baird-

Parker

[S]

生长率

37℃24-48h

金黄色葡萄球菌ATCC6538/25923

TSA

定量

PR≥0.5

黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外有透明带

选择性

37℃48h

大肠杆菌ATCC25922/8739

——

定性

全部抑制

特异性

表皮葡萄球菌ATCC12228

黑色/灰色菌落，周围为一混浊带，其外无透明带

MYP

30℃24-48h

腊样芽胞杆菌ATCC11778

PR≥0.7

具沉淀带的粉色菌落

大肠杆菌ATCC25922

枯草芽胞杆菌ATCC6633

不具沉淀带的粉色菌落

VRBG（结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂）

37℃24h

带有或不带沉淀带的粉红色或红色菌落

鼠伤寒沙门菌ATCC14028

37℃20h

粪链球菌ATCC29212/19433

VRBL（紫红胆汁乳糖）

30℃20h

带有或不带沉淀带的淡紫色菌落

铜绿假单胞菌ATCC27853

--

无色至浅棕色菌落

CT-SMAC（改良山梨醇麦康凯琼脂）

大肠杆菌O157：

H7

ATCC43894/43895

透明菌落，表面淡黄棕色，菌落直径约1mm

大肠杆菌ATCC11775/25922

粉色菌落

BGBLB（煌绿乳糖胆盐肉汤）

[L]

半定量

浊度2+，导管1/3产气

产气并浑浊

弗氏柠檬酸杆菌

ATCC25922/8739

不生长

EC

44℃24～48h

浊度2+，导气管1/3产气

铜绿假单胞菌ATCC27853b

EC-MUG/

LS-MUG

产气并浑浊，产生荧光

乳糖胆盐发酵培养

导气管1/3产气

产气并变黄色

不产气、仍为紫色

LST（月桂酸肉汤）

福氏志贺氏菌CMCC51572

表2计数用非选择性培养基

PCA（平板计数琼脂）

30℃72h

金黄色葡萄球菌ATCC6538

枯草芽孢杆菌ATCC6633

表3选择性增菌培养基

EE

VRBG上＞10CFU

粉红至红色菌落，有或没有沉淀带

粪肠球菌ATCC29212

RVS

41.5℃24h

XLD或其他选择性培养基上＞10CFU

肠炎沙门氏菌ATCC13076

TSA上全抑制

粪链球菌

ATCC29212

TSA上＜10CFU

SC（亚硒酸盐胱氨酸）

不同培养基上菌落特征不同（见标准）

+大肠杆菌ATCC25922

+铜绿假单胞菌ATCC27853b

TTB（四硫磺酸钠煌绿增菌液）

伤寒沙门菌CMCC50071

碱性蛋白胨水

霍乱弧菌CMCC16109

TCBS或其他选择性培养基上＞10CFU

副溶血性弧菌CMCC20001

7.5%氯化钠肉汤[L]

B-P平板或其他培养基上＞10CFU

表4非选择性增菌培养基

BHI

浊度1～2

蛋白胨盐

稀释

20～25℃45min

+/-50%菌落数/至（+/-50%原始菌落数

金黄色葡萄球菌ATCC25923

表4非选择性增菌培养基（续）

乳糖蛋白胨肉汤

SCDLP液体培养基

液体沙氏培养基[L]

26℃5天

白色念珠菌CMCC98001

真菌培养基[L]

表5选择性分离培养基

亚硫酸酸铋琼脂（BS）

良好生长

（2）

菌落呈黑色，有金属光泽

菌落呈棕色

全部或部分抑制（0～1）

无典型菌落

全部抑制（0）

XLD

菌落呈黑色

福氏志贺氏菌CMCC51573

菌落呈无色

血琼脂平板

37℃24～48h

良好生长

β溶血，透明溶血环

粪链球菌ATCC29212

α溶血,草绿色溶血环

TCBS

菌落较大，呈黄色

菌落较大，呈绿色

4号琼脂

菌落较大、扁平透明、湿润、中心带有黑色

非O1群霍乱弧菌CMCC17045

表5选择性分离培养基（续）

伊红美兰琼脂

菌落紫黑色带金属光泽

菌落灰白色半透明

TSI（三糖铁琼脂）

斜面及底层均变黄，产气，硫化氢阳性

普通变形杆菌

CMCC49001

底层变黄，斜面变红，不产气，硫化氢阴性

底层变黄，斜面变红，产气，硫化氢阳性

表6非选择性分离培养基

营养琼脂

鼠伤寒沙门菌ATCC14028c

小肠耶尔森氏菌ATCC23715

8.管理

8.1.贮存培养基的冰箱（或冰柜）内不得存放食品、饮料等无关物品。

8.2.使用前，须仔细检查培养基外观和效期，管理员应按规定的时间检查制备好的培养基的外观：

如失水、沉淀、过期、棉花塞松弛或脱落等异常情况，

如发现失水、沉淀等异常情况，则同一批号剩余的所有培养基及时全部弃去，不得再用

8.3.对于过了效期、瓶塞松驰或脱落的培养基一旦发现立即弃去。

9、记录

商品化培养基/成品培养基目录清单

培养基试剂入库登记表

培养基配制记录

培养基质量控制性能测试记录及评估报告

培养基标签

培养基制备用水检测记录

10引用标准

10.1GB/T27405-2008.实验室质量控制规范食品微生物检测[S].

10.2SN/T1538.1-2005.培养基制备指南第1部分：

实验室培养基制备质量保证通则[S].

10.3SN/T1538.2-2007.培养基制备指南第2部分：

培养基性能测实用指南[S].