鲁抗生产实习报告 4Word下载.docx
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2003年12月，公司顺利通过农业部GMP认证。
山东鲁抗医药集团赛特有限责任公司：
山东鲁抗医药集团赛特有限责任公司，1999正式挂牌成立。
赛特公司厂址位于山东省泰安地区新泰市市中东南角，占地4万平方米，总资产2262万元，员工143人。
主要生产片剂、胶囊、颗粒剂等28个品种。
山东鲁抗生物农药有限责任公司：
山东鲁抗生物农药有限责任公司是山东鲁抗医药集团公司的子公司，是鲁抗医药集团公司生物农药创新、研发、生产基地。
拥有国内一流的农药研究开发中心，并与中科院、浙江大学、上海医药工业研究院、山东农业大学、华中农业大学、中科院武汉病毒研究所等国内知名大专院校、科研机构进行常年业务合作，是国家生物农药定点生产公司，省科技厅认定高新技术企业。
公司以生物农药为依托，走“绿色农业、生态农业”之路，逐步开发出了一批具有国内领先水平的生物农药品种。
主要有杀虫剂、杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂、植物病毒防治剂5个剂型共100多个品种。
其中苏云金杆菌（BT系列）广谱高效生物杀虫剂是经国家计委批复，与中科院武汉病毒研究所联合承担的国家“九五”科技攻关项目，其生产水平国内领先；
多抗霉素生物杀菌剂研发生产项目通过了国家科学技术委员会的科技成果鉴定；
邦尔病毒康植物病毒防治剂是获国家专利的广谱、高效、无公害的抗病毒制剂，被科技部列为国家重点新产品，现己达到年产400吨粉剂和600吨水乳剂的生产规模。
明治鲁抗医药有限公司:
明治鲁抗医药有限公司是一家中日合资公司，成立于2003年10月9日，位于济宁市高新区鲁抗国际工业园内。
合资公司首期投资3000万美元，其中鲁抗公司占30%股份、日本明治公司占50%股份、日本爱利思达公司占20%股份。
公司生产硫酸粘菌素、麦迪霉素两个产品，年产麦迪霉素原料药100吨，硫酸粘菌素300吨。
山东鲁抗立科药物化学有限公司:
山东鲁抗立科药物化学有限公司是由山东鲁抗医药股份有限公司与上海立科药物化学有限公司共同出资创建的一家集树脂、原料药、精细化工产品研发生产销售于一体的合资企业。
公司拥有现代化的生产基地，完善的质量保证系统，专业的研发、生产、管理队伍。
山东鲁抗立科药物化学有限公司具有40余个树脂品种，年产量可达3000吨，10余个原料药品种，年产量可达30余吨的生产规模。
主要树脂产品有强酸、弱酸、强碱、弱碱、大孔离子交换与吸附树脂，现为离子交换协会理事单位，产品研发、生产、质量居国内领先地位。
主要原料药产品包括头孢地嗪系列、头孢噻呋系列、头孢匹罗系列、氨曲南系列、替卡西林系列、头孢地尼、辅酶Q10等，公司在以上项目上的整体技术水平稳居国内领先地位、国际先进水平。
二．实习内容
2.1企业老师授课
实习开始的第一至第五天，企业的老师为我们讲授了关于公司产品的生产、包装、质量控制的知识，也介绍了菌种保藏、选育、培养的内容，此外还有关于无菌控制、设备维护、GMP认证的知识。
下面综合这几次课程的内容，谈一谈自己的收获与体会。
公司主要以生产抗生素为主，现代抗生素工业生产过程如下：
菌种→孢子制各→种子制备→发酵→发酵液预处理→提取及精制→成品包装。
A、菌种：
从来源于自然界土壤等，获得能产生抗生素的微生物，经过分离、选育和纯化后即称为菌种。
菌种可用冷冻干燥法制备后，以超低温，即在液氮冰箱（-190℃~-196℃）内保存。
所谓冷冻干燥是用脱脂牛奶或葡萄糖液等和孢子混在一起，经真空冷冻、升华干燥后，在真空下保存。
如条件不足时，则沿用砂土管在0℃冰箱内保存的老方法，但如需长期保存时不宜用此法。
一般生产用菌株经多次移植往往会发生变异而退化，故必须经常进行菌种选育和纯化以提高其生产能力。
B、孢子制备：
生产用的菌株须经纯化和生产能力的检验，若符合规定，才能用来制备种子。
制备孢子时，将保藏的处于休眠状态的孢子，通过严格的无菌手续，将其接种到经灭菌过的固体斜面培养基上，在一定温度下培养5-7日或7日以上，这样培养出来的孢子数量还是有限的。
为获得更多数量的孢子以供生产需要，必要时可进一步用扁瓶在固体培养基（如小米、大米、玉米粒或麸皮）上扩大培养。
C、种子制备：
其目的是使孢子发芽、繁殖以获得足够数量的菌丝，并接种到发酵罐中，种子制备可用摇瓶培养后再接入种子罐进逐级扩大培养。
或直接将孢子接入种子罐后逐级放大培养。
种子扩大培养级数的多少，决定于菌种的性质、生产规模的大小和生产工艺的特点。
扩大培养级数通常为二级。
摇瓶培养是在锥形瓶内装入一定数量的液体培养基，灭菌后以无菌操作接入孢子，放在摇床上恒温培养。
在种子罐中培养时，在接种前有关设备和培养基都必须经过灭菌。
接种材料为孢子悬浮液或来自摇瓶的菌丝，以微孔差压法或打开接种口在火焰保护下按种。
接种量视需要而定。
如用菌丝，接种量一般相当于0.1%—2%（接种量的%，系对种子罐内的培养基而言，下同）。
从一级种子罐接入，二级种子罐接种量一般为5%—20%，培养温度一般在25—30℃。
如菌种系细菌，则在32—37℃培养。
在罐内培养过程中，需要搅拌和通入无菌空气。
控制罐温、罐压，并定时取样作无菌试验，观察菌丝形态，测定种子液中发酵单位和进行生化分析等，并观察无杂菌情况。
种子质量如合格方可移种到发酵罐中。
D、培养基的配制：
在抗生素发酵生产中，由于各菌种的生理生化特性不一样，采用的工艺不同，所需的培养基组成亦各异。
即使同一菌种，在种子培养阶段和不同发酵时期，其营养要求也不完全一样。
因此需根据其不同要求来选用培养基的成分与配比。
其主要成分包括碳源、氮源、无机盐类（包括微量元素）和前体等。
E、发酵：
发酵过程的目的是使微生物大量分泌抗生素。
在发酵开始前，有关设备和培养基也必须先经过灭菌后再接入种子。
接种量一般为10%或10%以上，发酵期视抗生素品种和发酵工艺而定，在整个发酵过程中，需不断通无菌空气和搅拌，以维持一定罐压或溶氧，在罐的夹层或蛇管中需通冷却水以维持一定罐温。
此外，还要加入消沫剂以控制泡沫，必要时还加入酸、碱以调节发酵液的pH。
对有的品种在发酵过程中还需加入葡萄糖、铵盐或前体，以促进抗生素的产生。
对其中一些主要发酵参数可以用电子计算机进行反馈控制。
在发酵期间每隔一定时间应取样进行生化分析、镜检和无菌试验。
分析或控制的参数有菌丝形态和浓度、残糖量、氨基氮、抗生素含量、溶解氧、pH、通气量、搅拌转速和液面控制等。
其中有些项目可以通过在线控制（指不需取样而直接在罐内测定，然后予以控制）。
F、发酵液的过滤和预处理：
发酵液的过滤和预处理其目的不仅在于分离菌丝，还需将一些杂质除去。
尽管对多数抗生素品种在生产过程中，当发酵结束时，抗生素存在于发酵液中，但也有个别品种当发酵结束时抗生素大量残存在菌丝之中，在此情况下，发酵液的预处理应当包括使抗生素从菌中析出，使其转入发酵液。
G、抗生素的提取:
提取时目的是在于从发酵液中制取高纯度的符合药典规定的抗生素成品。
在发酵滤液中抗生素浓度很低，而杂质的浓度相对地较高。
杂质中有无机盐、残糖、脂肪、各种蛋白质及其降解物、色素、热原质、或有毒性物质等。
此外，还可能有一些杂质其性质和抗生素很相似，这就增加了提取和精制的困难。
由于多数抗生素不很稳定，且发酵液易被污染，故整个提取过程要求：
1）时间短；
2）温度低；
3）pH宜选择对抗生素较稳定的范围；
4）勤清洗消毒（包括厂房、设备、管路并注意消灭死角）。
常用的抗生素提取方法包括有溶媒萃取法、离子交换法和沉淀法等。
H、抗生素的精制:
这是抗生素生产最后工序。
对产品进行精制、烘干和包装的阶段要符合“药品生产管理规范（即GMP）的规定。
例如其中规定产品质量检验应合格、技术文件应齐全、生产和检验人员应具有一定素质；
设备材质不应能与药品起反应、并易清洗，空调应按规定的级别要求，各项原始记录、批报和留样应妥为保存，对注射品应严格按无菌操作的要求等。
在医药行业，GMP是非常重要的，下面谈谈我学到的相关知识。
GMP，中文含义是“药品生产质量管理规范”或“良好作业规范”、“优良制造标准”。
GMP是一套适用于制药、食品等行业的强制性标准，要求企业从原料、人员、设施设备、生产过程、包装运输、质量控制等方面按国家有关法规达到卫生质量要求，形成一套可操作的作业规范帮助企业改善企业卫生环境，及时发现生产过程中存在的问题，加以改善。
简要的说，GMP要求制药、食品等生产企业应具备良好的生产设备，合理的生产过程，完善的质量管理和严格的检测系统，确保最终产品质量（包括食品安全卫生）符合法规要求。
实施GMP的主要目的有：
防止不同药物或其成份之间发生混杂；
防止由其它药物或其它物质带来的交叉污染；
防止差错与计量传递和信息传递失真；
防止遗漏任何生和检验步骤的事故发生；
防止任意操作及不执行标准与低限投料等违章违法事故发生；
保护消费者的利益，保证人们用药安全有效；
同时也是为了保护药品生产企业，使企业有法可依、有章可循；
另外，实施GMP是政府和法律赋予制药行业的责任，并且也是中国加入WTO之后，实行药品质量保证制度的需要——因为药品生产企业若未通过GMP认证，就可能被拒之于国际贸易的技术壁垒之外。
此外，关于设备维护与安全操作及人身安全的知识，老师也讲的很生动，虽然在课上对一些设备的概念很模糊，但却深深体会到设备的日常维护、安全操作的重要性。
这也为我们进厂实习奠定了思想基础。
2.2进厂实习
2.2.1车间概况
我们10人安排在605车间实习。
该车间是舍里乐公司兽用抗生素原料药泰乐菌素发酵和T605产品的生产车间。
车间位于南区西南部，原为股份公司102车间，2006年5月更名为605车间。
厂房面积3800平方米，分为发酵厂房和提炼干燥厂房两个部分。
发酵厂房42立方米发酵罐，自2004年4月开始生产泰乐菌素发酵液；
2007年10月开始利用18立方米发酵罐生产T605产品，该产品有20L大包装和30mL小包装两种规格，以订单形式组织生产，主要出口古巴、安哥拉及尼日利亚等非洲国家。
2.2.2生产概况
硫酸粘菌素。
2006年，车间对硫酸粘菌素发酵搅拌系统、空气系统、泡敌及pH自控系统进行改造，同时对42立方米发酵罐罐温、pH自控及种子控制等发酵工艺进行优化，发酵单位持续提高。
T605产品，是舍得里乐公司引进的新产品，2007年10月，车间开始利用801、805两台18吨发酵罐进行T605产品发酵液的生产，利用原108车间闲置厂房进行30mL小包装的无菌灌装。
2008年2月，车间将发酵厂房原会议室、职工之家改造为无菌灌装间，安装两条灌装线，7月又第三条小包装。
通过对T605产品设备、管道、洁净厂房、空调系统的改造，增加百级层流罩，同时改进生产组织形式，产量大幅提高。
2008年，T605产品小包装无菌合格率由上年45.6％提高到83.12％，大包装产品合格率达到100％。
2010年5月车间新增第四条小包装灌装线，将干燥洁净室进行改造，用于T605产品大包装的生产。
通过加强管理，产品无菌合格率逐步提高小包装分别达到91.17％和98.64％，大包装达到100％
泰乐菌素喷干。
2009年9月公司为解决泰乐菌素扩产喷干能力不足的问题，决定在605车间组织泰乐菌素喷干生产，车间全力以赴完成产量计划，收率达到92％以上，质量全部达标。
2010年3月，根据公司生产安排泰乐菌素的喷干工作停止。
认证工作。
2010年4月车间开始启动硫酸粘菌素硫酸安普霉素的GMP复审准备工作。
年底，两个产品顺利通过国家GMP复审。
泰乐菌素生产和T605生产也获得了优异成绩，车间《提高泰乐菌素发酵水平、减低发酵液成本》和《严抓管理，提高T605产品合格率，降低生产成本》获得公司科技进步效益奖二等奖。
车间荣获集团公司“先进单位”荣誉称号。
2.2.3实习明细
2.2.3.1参观发酵车间
进厂的两周时间里，由于车间主要分为三部分—发酵、菌种与包装，车间主任安排我们前两天先在自己的非固定岗位参观学习，之后的十几天里则在各自的固定岗位深入学习。
我的固定岗位在菌种，所以第一天我在发酵岗位学习了一天。
T605产品经过两级种子培养后进入发酵罐，发酵罐，指工业上用来进行微生物发酵的装置。
其主体一般为用不锈钢板制成的主式圆筒，其容积在几立方米至数百立方米。
在设计和加工中应注意结构严密，合理。
能耐受蒸汽灭菌、有一定操作弹性、内部附件尽量减少（避免死角）、物料与能量传递性能强，并可进行一定调节以便于清洗、减少污染，适合于多种产品的生产以及减少能量消耗。
发酵罐广泛应用于饮料、化工、食品、乳品、佐料、酿酒、制药等行业，起发酵作用。
发酵罐的组成部件包括：
罐体主要用来培养发酵各种菌体，密封性要好（防止菌体被污染），罐体当中有搅拌浆，用于发酵过程当中不停的搅拌；
底部有通气的Sparger，用来通入菌体生长所需要的空气或氧气，罐体的顶盘上有控制传感器，最常用的有pH电极和DO电极，用来监测发酵过程中发酵液pH和DO的变化；
控制器用来显示和控制发酵条件。
根据发酵罐的设备分为机械搅拌通风发酵罐和非机械搅拌通风发酵罐；
根据微生物的生长代谢需要分为好气型发酵罐和厌气型发酵灌。
该车间发酵生产工艺较为简单，主要工艺路线为菌种→孢子制备→种子制备→发酵→灌装，由此可见，我们需要的是发酵液本身而无需对发酵液进一步处理。
在发酵前要对发酵罐进行灭菌，发酵期间需要对参数进行监控并随时检查设备情况。
发酵后的发酵液进入灌装间进行灌装。
发酵车间俯视图如下：
发酵过程中染菌的防止是极其关键的，下面将染菌的途径及防治方法介绍如下：
种子带菌及其防治：
种子带菌的原因主要有种子保存管染菌、培养基和器具灭菌不彻底、种子转移和接种过程染菌以及种子培养所涉及的设备和装置染菌等。
主要防治措施有
（1）严格控制无菌室的污染程度，间替使用各种灭菌手段对无菌室进行处理；
（2）对每一级种子的培养物均应进行严格的无菌检查，确保任何一级种子均未染菌后才能使用。
空气带菌及其防治：
防治措施有
（1）加强生产场地的卫生管理，减少生产环境中空气的含菌量；
（2）设计合理的空气预处理过程，尽可能减少空气的带油。
水含量，降低空气的相对湿度，保持过滤介质的干燥状态；
（3）设计和安装合理的空气过滤器，防治过滤失效。
设备的渗漏或“死角”造成的染菌及其防治：
对盘管的渗漏染菌，生产上课采取仔细清洗，检查渗漏或降低冷却水中氯离子的含量等措施加以防治；
对空气分布管的死角染菌，可采取频繁更换空气分布器或认真洗涤等措施；
对发酵罐的渗漏或死角染菌，可采取罐内壁涂刷防腐涂料、加强清洗并定期铲除污垢、安装边阀等措施加以防治。
2.2.3.2参观包装车间
第二天我来到灌装间，马上被流水线所吸引—30mL的包装瓶在皮带的带动下向前不断做直线运动直至被工作人员收起放入包装盒内，在这同时工作人员要检查包装，对不符合要求的及时筛选出作为废品处理，如标签没贴上、没有盖子或盖子松弛、瓶身有凹陷等都不符合要求。
包装盒再由其他工作人员集装成箱后运出。
发酵液在无菌室内灌装入瓶，无菌室内工作人员都穿着无菌工作服、戴着口罩，这也是GMP严格要求的一个方面。
这一天，我在流水线上“工作”了一天，体会到了这份工作的辛酸。
2.2.3.3菌种固定岗位实习
第三天，我开始了在固定岗位上的实习。
菌种部门主要分为无菌室、摇瓶间、储物间和镜检区。
虽然规模不大但“五脏俱全”，这让我在接下来的两周里学到了很多东西。
T605产品里的有效成分是苏云金芽胞晶体。
苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）为革兰氏阳性土壤杆菌，它在芽孢形成过程中产生称为δ-内毒素的杀虫伴胞晶体蛋白，这些蛋白具有很高的杀虫活性。
该菌属于芽孢杆菌属，其菌体为短杆状，生鞭毛，单生或形成短链。
苏云金芽孢杆菌的伴孢晶体蛋白生产出的杀虫剂，由于其窄谱杀虫活性,被广泛认为是环境友好的杀虫剂,对人体、野生生物、传粉昆虫和其它多数益虫几乎没有作用。
苏云金芽孢杆菌杀虫制剂常被用作液体喷射在作物上,药物必须被害虫食用才能发挥效用。
溶液化的毒素在幼虫易受影响的中肠细胞膜上形成孔洞，导致害虫患败血病死亡。
为能高效得到以上所需要的伴孢晶体，车间主任提供5种不同的酵母粉来探究它们对伴孢晶体生成的影响。
该实验设计的原则为控制单一变量，因此较为简单。
现将步骤简述如下：
首先用酵母粉作为原料之一配制培养基；
将培养基用高压蒸汽灭菌锅进行高压蒸汽灭菌[
（1）放置物品：
将待消毒灭菌物品放入灭菌柜室内，关闭灭菌柜室门；
（2）夹套加热：
将蒸汽控制阀移至“关闭”位置，打开进汽阀、出气阀，使蒸汽进入外层夹套，加热柜室四壁约5min；
（3）灭菌：
将控制阀移至“灭菌”位置，出气阀关小留1/4；
（4）等待温度上升至121℃后继续灭菌30min；
（5）排气：
关闭进汽口；
（6）压力表恢复到“0”，温度下降；
（7）开启柜门，取出培养基]；
接种，种子来源于冰箱保藏的冻干管，先将其在大的母瓶中培养，后接种到实验用的子瓶中；
接种要在无菌室内进行[
（1）进入无菌室前做好个人卫生，在缓冲间内更换工作服、戴口罩（只在无菌室内使用，定期更换消毒）;
（2）将母瓶中的种子接到子瓶中（与学校中超净工作台无菌操作类似：
酒精灯火焰，灼烧）；
（3）用纱布将封口封好]
30℃恒温摇瓶间摇瓶培养；
每隔一段时间取样镜检观察伴孢晶体生长情况。
镜检前需涂片染色，方法如下：
（1）涂片固定；
（2）草酸铵结晶紫染1分钟；
（3）自来水冲洗；
（4）加碘液覆盖涂面染约1分钟；
（5）水洗，用吸水纸吸去水分；
（6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分；
（7）蕃红染色液（稀）染1分钟后，自来水冲洗，干燥。
镜检需要用到普通光学显微镜，操作方法在学校微生物实验中已学习过，现将步骤简述如下：
（一）实验时要把显微镜放在桌面上，镜座应距桌沿6～7cm左右，打开底光源开关。
（二）转动转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。
然后用双眼注视目镜内，调整光源强度，把聚光镜上升，把虹彩光圈调至最大，使光线反射到镜简内，这时视野内呈明亮的状态。
（三）将所要观察的装片放在载物台上，使被观察的部分位于通光孔的正中央。
（四）先用低倍镜观察（物镜10×
、目镜10×
）。
观察之前，先转动粗准焦螺旋，使载物台上升，使物镜逐渐接近切片。
需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。
并转动粗准焦螺旋，使载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。
（五）如果在视野内看到的物像不符合实验要求（物像偏离视野），可慢慢移动左右移动尺。
移动时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。
如果物像不甚清晰，可以调节细准焦螺旋，直至物像清晰为止。
（六）如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多）。
一般具有正常功能的显微镜，低倍物镜和高倍物镜基本齐焦，在用低倍物镜观察清晰时，换高信物镜应该可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动细准焦螺旋进行调节。
（七）在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节光圈或聚光器，使光线符合要求般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱）。
（八）观察完毕，应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将显微镜复原。
并检查零件有无损伤（特别要注意检查物镜是否沾水，如沾了水要用镜头纸擦净），检查处理完毕后即可放回原处。
实验中所用为油镜，观察前先在观察位置处滴加一滴香柏油,再将镜头缓慢下降与之接触。
镜头下观察到杆状的苏云金芽胞杆菌，而有效成分伴孢晶体则呈现为透明的圆球状。
经过不同时间培养后得到的有效成分的含量随培养时间的增长而增大，但各组的含量又因酵母粉的不同而不同。
经过72小时的培养，涂片镜检后得到标记为2#的酵母粉对伴孢晶体的产生最有利，即该晶体含量最多。
这是镜头下的检测结果，另一种方法是做药效检测，即用发酵液施用于蚊子幼虫并检测其死亡率，结果显示2#酵母粉对应的发酵液对蚊子幼虫有最高的致死率，这与镜头下的观察结果相一致。
三、实习心得与思考这次实习是我们大学以来时间最长、收获最大的一次实习。
八月底我们坐火车出发前往孔孟之乡—济宁，考虑到我们对这里的好奇，前两天我们自由安排时间，因此我们便开始了对这孔孟之乡的“探索”—太白楼、太白湖、曲阜、泰山，这些名山大川与人文景观着实令我们心旷神怡，也使我们对接下来的实习充满期待，而事实证明我们的期待没有错。
在605车间，有两位来自古巴的工作人员，她俩工作热情、认真负责，还热心的当起了车间的西班牙语老师，为车间的工作提供了轻松的氛围。
菌种车间的工作比较琐碎，如刷洗试管等玻璃仪器、配制培养基以及一些需要耐心细致操作的微生物操作，这样的工作需要极大的耐心和充分的热情，这对从未工作过的我也是一次极大的锻炼，我也格外珍惜这样的机会。
实习是我们每个大学生必须面对和经过的过程，正确认识实习对大学生的意义，对以后的就业和工作都会起到非常有利的推进作用。
我们在校园里学到了很多的理论知识，要将它们转化为实际经验和能力，实习就是必不可少的。
不同于学校，实习中可以发现自身的一些不足和工作中的不熟悉和技术的欠缺，能够不断提升自己的综合素质和工作经验。
学校和职场，学习和工作，学生和员工是发生了质的改变，它们之间有很大的差异。
而实习正式提供了一个从学生变成员工，从学习变成工作。
从学校走进职场的机会，让大家真实的接触职场。
有了实习的经验，以后就业的道路就会少走很多弯路。
实习可以增加自己找工作的竞争优势，实习也是一种工作的经历和经验。
具体而言，我们在学校学过微生物实验操作，但没有穿过无菌服，也没有进过无菌室，而这次实习为我提供了这
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