培养基的制备实验总结.docx

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培养基的制备实验总结

培养基的制备实验总结

篇一：

《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告

《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告

实验目的

1.学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例）的一般方法和原理。

2.了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步骤。

实验原理

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中．微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。

但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。

不同微生物对PH要求不一样．雷菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的（嗜碱细菌和嗜酸细菌例外）。

所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。

此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌．如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀．继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。

导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。

基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分解利用。

固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏3.0g

蛋白胨10.0g

NaCl5.0g

水1000ml

pH7.4—7.6

实验仪器与药品

1.溶液或试剂：

牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol／LNaOH、1mol／LHCl。

2.仪器或其他用具：

试管、三角瓶、1000ml烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）、量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH5.5-9.0）、普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。

实验步骤

（一）牛肉膏蛋白胨培养基的制备

1.称量（假定配制1000ml培养基）

按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。

也可放在称量纸上，称量后直接放人水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。

2.溶化

在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。

3.调pH

在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸．用滴管向培养基中逐滴加入1mol／LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其PH，直至pH达7.4-7.6。

反之，用1mol／LHCl进行调节。

4.过滤

趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察。

可以省去（本实验勿需过滤）。

5.分装

液体分装

分装高度以试管高度的1／4左右为宜。

分装三角瓶的虽则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少；有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，则装量一定要准确。

固体分装

分装试管，其装量不超过管高的1／5，灭菌后制成斜面。

分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

半固体分装

一般以试管高度的1／3为宜，灭菌后垂直待凝。

6.加塞

培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞（或硅胶塞、金属或高温塑料试管帽等），以阻止外界微生物进入培养基内面造成污染，并保证有良好的通气性能（棉塞制作方法附本实验后面）。

7.包扎

加塞后，将全部试管放入铁丝筐或用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。

用记号笔注明培养基名称、配制日期。

三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、配制日期。

8.灭菌

将上述培养基以0.103MPa，l21℃，20min高压蒸气灭菌。

9.摆斜面

将灭菌的试管培养基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜

l0.无菌检查

将灭菌培养基放入37℃的恒温箱中培养24-48h．以捡查灭菌是否彻底。

注意事项

1.蛋白胨很容易吸湿，在称取时动作要迅速，另外，称量时严防药品混杂．一把牛角匙用于一种药品．或称取一种药品后，洗净——擦干——再称职另一药品——瓶盖也不要盖错。

2.在琼脂溶化过程中．应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。

同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦，制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。

3.对于有些要求PH较精确的微生物，其PH的调节可用酸度计进行（使用方法、可参考有关说明书）。

pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。

配制pH低的琼脂培养基时．若预先记好PH并在高压蒸汽下灭菌，则琼脂因水解不能凝固。

因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整pH。

4.分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污面塞而引起污染。

（二）高压蒸汽灭菌法步骤

1.加水

使用前在锅内加入适量的水，加水不可过少，以防将灭菌锅烧干，引起炸裂事故。

加水过多有可能引起灭菌物积水。

水面与三角架相平为宜

2.装料

将灭菌物品放在灭菌桶中，不要装得过满。

3.加盖

盖好锅盖，按对称方法旋紧四周固定螺旋，打开排气阀。

4.加热排气

加热后水蒸气与空气一起从排气孔排出，待锅内沸腾并有大量蒸汽自排气阀冒出时，排出的气流很强并有嘘声时，维持2—3min以排除冷空气。

如灭菌物品较大或不易透气，应适当延长排气时间，务必使空气充分排除，然后将排气阀关闭。

5.加压

将排气阀关闭

6.保压

当压力升至0.1MPa时，温度达121℃，此时应注意观察，控制热源。

保持压力稳定，维持20-30min后，切断热源。

7.自然降压

当压力表降至“0”处，稍停，使温度继续降至100℃以下后，打开排气阀，旋开固定螺旋，开盖，取出灭菌物。

注意：

切勿在锅内压力尚在“0”点以上，温度也在100℃以上时开启排气阀，否则会因压力骤然降低，而造成培养基剧烈沸腾冲出管口或瓶口，污染棉塞，以后培养时引起杂菌污染。

压力降到“0”时，方可打开排气阀。

8.保养

灭菌完毕取出物品后，将锅内余水倒出，以保持内壁及内胆干燥，盖好锅盖。

9.培养基无菌检查五、关键步骤及注意事项

1.要严格按配方配制。

2.调pH不要过头。

3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。

4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。

5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快，滤膜要注意清洗保存。

陕西师范大学远程教育学院

生物学实验报告

报告题目《培养基的制备与消毒灭菌》

姓名学号

专业

批次/层次

指导教师学习中心实验报告

篇二：

培养基的制备与灭菌实验报告（详细）

一、实验题目：

培养基的制备与灭菌

二、实验目的：

1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：

1、药品：

牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：

三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：

1、培养基的制备

包括一下几种成分：

（1）水分：

主要成分。

（2）N源：

包括无机氮和有机氮。

（3）C源：

主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：

如NaCl、KH2PO4等。

微量元素：

Cu、K、Mg、S、P、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则

根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：

按成分：

天然培养基、合成培养基、半合成培养基

按状态：

固体培养基、半固体培养基、液体培养基

按用途：

基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基

培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

3、灭菌：

用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：

将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：

微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：

诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。

（4）过滤除菌：

实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

五、实验步骤：

1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备

依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。

加上棉塞，迅速拔出能发出清脆声响即可，用报纸包住并系好麻绳。

2、包移液管和培养皿

（1）包一包培养皿（一包五个）：

用手压紧、塞好，折出棱角，包好后摇晃没有培养皿相互碰撞的声音即可。

（2）包2支移液管：

用棉花塞好移液管尾部，露出1~2cm即可。

取长条报纸，一端折

90°角，紧密严实沿30°角卷好移液管，尾部叠好防止散开。

3、高压蒸汽灭菌

（1）灭菌前要先看水位是否合适。

（2）将包好的待灭菌物品放入内层锅，不要装得太挤，棉塞不应染上培养基。

（3）加盖，两两对称旋紧螺栓。

（4）设定条件：

0.1MPa、121℃、20min，进行加热。

（5）先打开排气阀，待空气排尽后，关上排气阀。

（6）结束后，自然降温，压力降为0后，打开排气阀取出物品。

4、干热灭菌

（1）将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好门箱。

（2）设定条件：

160~170℃，恒温2h。

（3）结束后，切断电源，自然降温，降到70℃以下后开箱取物。

六、思考题：

1、你配制的是什么培养基？

选择培养基。

2、选择培养基与鉴别培养基的区别？

这两种培养基的应用情况。

选择培养基是指根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。

其功能是使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选效率。

如以纤维素作唯一碳源的培养基可分散到分解纤维素的微生物分散酵母菌或霉菌时，可添加适量的青霉素、四环素或链霉素，以抑制细菌和放线菌的生长。

鉴别培养基是在成分中加入有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找到目的菌菌落的培养基，此类培养基一般用于鉴定不同微生物。

如EMB即伊红美乳糖造就基。

大肠杆菌分解乳糖产生大量混合酸，可染上酸性伊红，伊红和美兰结合，菌落被染成深紫色，从菌落外貌的发射光中还可以看到绿色金属发光。

篇三：

培养基的配制实验心得体会2021年4月11日星期一

培养基的配制实验心得体会2021年4月11日星期一

培养基的配制是植物组织培养的第一步，本节实验我们每组（五人）配制200ml琼脂培养基。

我们严格按照实验步骤进行操作，每一步都需要我们认真对待，才会保证实验的成功。

下面从以下方面阐述以下我的心得：

首先，填写配制单需要我们先算出所需各试剂的体积，这就需要用到我们理论课上的知识，准确计算，所以平时一定要认真学习理论课。

在准确计算后，当然就是准确称量，基于之前实验的经验，我能够熟练的用电子天平精确称量，做到不浪费试剂，不弄脏天平。

其次，在将蔗糖和琼脂置于电炉子上加热前，将锅刷干净，以免混入杂质。

按实验步骤加入各试剂，调PH时，滴定后混匀迅速取适量低到试纸上观察，一条试纸可多次使用，切勿造成浪费。

高压灭菌时要按实验注意事项及使用规格进行检查和使用。

最后，本实验更让我体会到与组员团结协作的重要性，每一步操作都应认真严谨的进行，如果负责一些不感兴趣的部分也同样要重视，不推辞，比如看灭菌锅，也是实验重要的一步。

在实验过程中不能只学会自己的操作的部分，也要多与同学老师交流，将理论更好的与实践结合。

无菌操作及愈伤组织诱导技术实验心得2021年4月12星期二

本次实验让我感受颇深，因为我在实验中犯了一个大错误，上周的实验是将制成的两百毫升培养基平均分配到十个培养基中，而上学期微生物实验是平均分配到六个培养基中，我竟然奇迹般的给记混了，很对不起同组的同学，幸好还有机会补过，让同寝三班的同学帮忙配了五瓶，还不致影响下次实验。

这个错误犯的真的很荒唐，都是因为平时不过认真，思路不够清晰，并且想当然的认为自己想的就是对的，其实还是应该多看书，多于其他同学交流，不至于由于一个人的想法或做法错误影响全组。

我们负责给胡萝卜块茎消毒的同学开始竟阴错阳差没泡升汞，后来经提醒我们有不就回来，我们当然不该出现这样的大漏洞，我们也深知自身在实验过程中的诸多不足，但我们想通过实验课来更好的提高我们的动手及理论的运用能力却很强烈。

在我们出错情况下并没有慌乱，而是认真的想办法补救，我们会吃一堑长一智，在今后的实验中认真严谨，珍惜每一次实验学习的机会！