凝聚胺介质交叉配血试验操作规程Word文件下载.docx

凝聚胺介质交叉配血试验操作规程Word文件下载.docx

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6注意事项

6.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。

6.2若病人血清（血浆）含肝素，如洗肾患者，须多加4~6滴Polybrene溶液以中和肝素。

6.3本试剂盒的操作方法也适用于抗体鉴定。

6.4若试剂使用前为低温贮存，请回复室温再行操作。

6.5加做辅助性抗人球蛋白试验，目的是增加检测抗-K的敏感性。

6.6在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现。

若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置入37℃水浴中，轻轻摇动试管混合，并在60秒内观察结果。

6.7红细胞抗原检测步骤同抗体筛检试验，其检测标准血清用已知标准血清。

6.8用户可使用IgG抗D抗体（效价≥64）与RhD阳性红细胞反应做阳性对照实验，测试本试剂的有效性。

ABO血型定型操作规程（SOP文件）

用于鉴定人ABO血型

本品系用产生抗A或抗B血型抗体的杂交瘤细胞培养上清液（或在上清液中加入少量同型腹水）配制而成，采用凝集试验原理，专供鉴定人ABO血型用。

3样本要求

本试剂适用于全血或10％、5％红细胞悬液。

4检验方法

平板法（玻片法）：

本品与受检者全血或10％红细胞生理氯化钠悬液按1:

1搅匀，不必再稀释，按照有无凝集判定结果

5结果判断

血型

抗A试剂

抗B试剂

A

+

-

B

O

AB

注：

“+”有凝集反应，“-”无凝集反应

6检验结果的解释

将已知的抗A、抗B血型定型试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A血型定型试剂发生凝集者即为A型血型，与抗B血型定型试剂发生凝集者即为B型血型，与抗A、抗B血型定型试剂均发生凝集者即为AB型血型，与抗A、抗B血型定型试剂均不发生凝集者即为O型血型。

7注意事项

7.1对含有较多自身冷凝集的受检者，在鉴定血型时往往被误认为AB血型，遇到此种情况，需用37°

生理氯化钠溶液洗涤受检者细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的凝集素，然后再鉴定血型。

7.2在做配型试验时，如发现有不配合现象，则取受检者血清，用已知A血型或B血型细胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。

7.3用立即试管法不能测出亚型（如Ax），需延长作用时间。

7.4本品如出现浑浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知ABO血型红细胞检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染，变质失效，而造成鉴定错误。

7.5在有效期内使用。

ABO血型反定型操作规程（SOP文件）

用于ABO血型的反定型检测，该产品不用于血源筛查。

本品系采用三人份同型混合的A1型、B型和O型合格人红细胞经洗涤后悬浮于红细胞保存液中配制而成。

采用凝集试验原理，用已知的A1，B，O型红细胞测定被检者血清/血浆中有无相应的抗A或抗B抗体（反定型试验），结合正定型结果判定ABO血型。

3检验方法

试管法

3.1取被检者血清/血浆各50ul分别加入3支标记好的试管中；

3.2分别各加50ulA1、B、O试剂红细胞；

3.3摇动试管，混匀。

于900g离心15s，或室温静止1h;

3.4首先检查是否溶血，（溶血可能是阳性结果，或是细菌污染。

）轻轻摇动悬浮红细胞。

3.5观察凝集情况，并立即记录结果。

必要时可借助显微镜观测。

4检验结果的解释

ABO血型正反定型反应格局表

正定型

反定型

抗A试剂

抗B试剂

A1细胞

B细胞

O细胞

“+”有凝集反应，“-”无凝集反应

5注意事项

5.1如果在反定型试验中，受检者的血清/血浆与O血型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。

如果自身对照为阳性，表明是冷凝集素导致。

如果自身对照为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统以外的其他血型系统的抗体干扰定型。

请按照相关的试验方法解决上述定型问题。

5.2本品如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞自发凝集，出现菌落或溶血，则不能使用。

若开瓶使用时间较长后，最好用注册上市的抗A、抗B血型定型试剂检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效、而造成检定错误。

5.3为了便于鉴别，A1血型红细胞试剂标签为蓝色，B血型红细胞试剂标签为黄色，O血型红细胞试剂标签为红色。

乙型肝炎病毒表面抗原操作规程（SOP文件）

1.目的

用于血液的筛查和临床乙型肝炎病毒感染的辅助诊断。

2.检验原理

本品系用乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）包被的微孔板和酶标记抗-HBs及其他试剂制成，应用双抗体夹心酶联免疫法原理检测人血清和血浆中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）

3.适用仪器

微量移液器；

37℃恒温水浴箱；

振荡器；

洗板机或洗瓶；

计时器；

酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。

4.样本要求

4.1样本采集不需要特殊准备，按照正常的采血技术收集血液，全血样本最好先放置37℃处理2小时，再将血样本充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清（血浆）不含有或极少含有血细胞。

如果为抗凝血样本，应将血样本充分离心后，最好再放置室温2小时以上。

4.2样本中含有叠氮钠会影响试验的结果，高度溶血的样本、没完全收缩的血清样本或有微生物污染的样本可能会引起错误的结果。

4.3新鲜的样本在2~8℃无菌条件下可保存一周，新鲜样本可长期贮存在-20℃或以下，避免反复冻融。

5.检验方法

5.1实验准备：

从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将洗涤液进行1:

40倍稀释。

5.2设阳性对照2孔，阴性对照3孔，空白对照1孔。

5.3加样：

在阳性对照、阴性对照孔内分别加入阳性对照、阴性对照50ul，其余每孔加待测血清或血浆50ul。

盖上封孔胶片，置37℃水浴孵育60分钟。

5.4洗涤：

弃去孔内液体，用稀释后的洗涤液连续洗涤5次后，拍干孔内液体。

5.5加酶结合物：

空白孔除外，每孔各加酶结合物50ul。

盖上封孔胶片，置37℃水浴孵育30分钟。

5.6洗涤：

5.7加底物液：

每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混匀，盖上封孔胶片，置37℃条件下避光显色30分钟后，加终止液50ul，混匀，终止反应。

6.参考值（参考范围）

终止后尽快测定，波长450nm，先用空白孔校零，测OD值。

如果选用双波长测定，不必设置空白对照空。

按下列公式计算：

COV=阴性对照平均OD值×

2.1倍

阴性对照平均OD值低于或等于0.05，按0.05计算；

高于0.05时，按照实际OD值计算。

7.检验结果的解释

样品OD值S/COV≥1时，待测样本HBsAg为阳性；

样品OD值S/COV＜1时，待测样本HBsAg为阴性。

8.注意事项

8.1本品仅用于体外诊断，仅限检测人体血清或血浆；

检测结果作为诊断指标之一。

8.2使用时，从冷藏环境取出试剂盒，置室温平衡30分钟后，方可进行测试。

剩余试剂应及时封存于冰箱内保存，备用。

8.3结果判定需在反应终止后10分钟内完成。

8.4封孔胶片不得重复使用。

8.5在有效期内，微孔板密封袋如有漏气现象，不影响试验结果。

试剂盒在有效期内使用，不同批号不得混用。

8.6阳性对照应呈阳性，否则全部试验无效。

8.7确保样本加样量的准确，如果加样不准确可能会导致错误的试验结果。

8.8使用微量移液器加样时，每次应更换吸头吸取样本。

8.9在操作过程中应尽量避免反应微孔中产生气泡。

8.10准确控制反应温度和反应时间。

8.11洗板：

1用洗板机洗板时，洗板机的加液量应注意控制，既避免洗液过量而溢出，又能充满反应微孔，并经常检查加液头是否堵塞；

2洗板机最好每次使用前、后冲洗干净，防止管路堵塞或腐蚀；

3洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。

8.12本试剂盒及临床样本均应视为传染性物质或潜在传染性物质，请按相关实验室工作规范执行和处理。

9.参考文献

《中国药典》2010年版三部；

《体外诊断试剂说明书编写指导原则》（国食药监械【2007】240号）

梅毒螺旋抗体操作规程（SOP文件）

本试剂盒定性检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。

适用于血液的筛查及临床梅毒螺旋体感染的辅助诊断。

本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。

在微孔条上预包被梅毒螺旋抗体的基因重组抗原，配以酶标记抗原及TMB显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。

加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪。

4.1本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。

4.2不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样品。

4.3样品中应无微生物，可在2~8℃储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。

4.4使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。

5.1配液：

将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

5.2编号：

将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔。

（用双波长检测，可不设空白对照孔）。

分别在相应孔中加入待测样品或阴性、阳性对照100ul。

5.4温育：

用封板膜封板后，置37±

1℃温育60±

2分钟。

5.5洗板：

小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。

5.6加酶：

酶孔加入酶标试剂100ul，空白孔除外。

5.7温育：

1℃温育30±

1分钟。

5.8洗板：

操作同步骤5.5

5.9显色：

没孔加入显色剂A.B液各50ul，轻轻震荡混匀，37±

1℃避光显色30±

6.参考值

临界值（CUTOFF）计算临界值=阴性对照孔A均值NC+0.18.

7.1阴性对照孔A值≤0.10，阳性对照孔A值≥0.80.否则实验无效。

7.2若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复实验。

7.3阴性判定：

样品A值＜临界值（CUTOFF）者为TP阴性。

7.4阳性判定：

样品A值≥临界值（CUTOFF）者为TP阳性（注意：

初试阳性应重新取样双孔复试）。

8.1本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。

封板膜不能重复使用，不同批号酶标板。

酶标试剂和阴性、阳性对照不可混用，不能与其他厂家试剂混用。

8.2避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂（如84消毒剂）的环境下操作。

8.3使用前请将试剂平衡至室温（平衡30分钟以上），实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2~8℃。

未用完的微孔板条与干燥剂仪器用自封袋密封2~8℃保存。

过期试剂请勿使用。

8.4加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。

加入不同样品或不同试剂组分时，应更换加样器吸头和加样槽，以防出现交叉污染。

8.5洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。

使用洗板机应设定30~60秒侵泡时间。

在洗板结束后，必须立即进行下一步，不可使酶标板干燥。

避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。

8.6结果判定必须以酶标仪读数为准。

读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。

不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。

8.7所用样品、废液和废弃物都应按传染物处理。

终止液为硫酸，使用时必须注意安全。

8.8显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。

8.9由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除TP感染的可能。

检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。

甲型肝炎病毒IgM抗体操作规程

（SOP文件）

用本试剂盒检测人血清或血浆中的抗-HAVIgM,用于甲型肝炎的早期诊断。

本品系用抗人IgM（u链）包被的微孔板、甲型肝炎病毒（HAV）抗原和酶标记抗甲型肝炎病毒（抗-HAV）及其他试剂制成，应用捕获法原理检测人血清或血浆中的抗-HAVIgM，用于甲型肝炎的早期诊断。

二步法

在阳性对照、阴性对照孔内分别加入阳性对照、阴性对照50ul，其余每孔加待测血清或血浆50ul（或将待测血清或血浆用生理盐水1:

1000稀释后，加入到反应孔内），盖上封孔胶片，置37℃水浴孵育30分钟。

取出酶结合物，充分混匀，每孔加50ul（空白孔除外），盖上封孔胶片，置37℃水浴孵育30分钟。

5.6洗板：

同5.4

每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混匀，盖上封孔胶片，置37℃条件下避光显色15分钟后，加终止液50ul，混匀，终止反应。

终止后尽快测定，波长450nm，空白孔调零，测OD值。

样品OD值S/COV≥1时为阳性

样品OD值S/COV＜1时为阴性

高于0.05时，按照实际OD值计算。

7.1阴性结果表明样本中不含有抗-HAVIgM或抗-HAVIgM含量低于试剂盒的检测范围。

7.2阳性结果表明样本中含有抗-HAVIgM或产生非特异反应。

7.3样本的检验结果与临床表现不符或存在疑问时应采用适当的方法进行确认。

7.4对于待检血清或血浆直接进行50ul加样，结果判为阳性的标本，应对其用生理盐水1:

1000稀释后重复实验并判定结果。

8.6试剂盒在有效期内使用，不同批号不得混用。

8.8使用微量移液器加样时，每次应更换吸头吸取样本；

如果采用滴瓶滴加时，请将滴瓶中液体摇匀，并弃去2滴后垂直均速滴加，要避免组分中的液体触到或溅到微孔边缘上，特别是酶结合物。

《中国生物制品规程》2000年版

丙型肝炎病毒抗体操作规程（SOP文件）

用于血液的筛查和临床丙型肝炎病毒感染的辅助诊断

本品系用丙型肝炎病毒（HCV）抗原包被的微孔板和酶标记抗人IgG及其他试剂制成，应用简接酶联免疫法原理检测人血清或血浆样品中的HCV抗体。

5.2设阳性对照2孔，阴性对照3孔，不加样品稀释液，直接加入阳性对照。

阴性对照100ul，另设空白对照1孔（只加底物液及终止液）。

在其余每孔加先加样品稀释液100ul,再加待检血清或血浆10ul（空白孔除外），充分混匀，盖上封孔胶片，置37℃水浴孵育60分钟。

空白孔除外，每孔各加酶结合物100ul。

阴性对照平均OD值低于或等于0.1，按0.1计算；

高于0.1，按照实际OD值计算。

7结果判断

样品OD值S/COV≥1时，待测样本为阳性；

样品OD值S/COV＜1时，待测样本为阴性。

《中国药典》2010年版三部

HIV抗体初筛实验室操作规程（SOP文件）

1.检验目的

检验人体血清中是否感染HIV病毒

本产品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒“1”型和“2”（HIV-1和HIV-2）抗原包被的微孔板和酶联记的HIV-1和HIV-2抗原及其它试剂组成试剂盒，应用双原夹心法原理检测人血清或血浆中的人类免疫缺陷病毒抗体，用于献血员及高危人群中人类免疫缺陷病毒的筛查。

3.检验条件

3.1操作人员对本实验应心中有数，严格执行操作规程。

3.2洗板机，酶标仪，加样器必须定期校正。

试剂按规定保存。

4.标本采集

4.1门诊病人由检验科人员无菌抽取静脉血2ml分离血清备用。

4.2住院病人由护士采血送检验科。

4.3要避免溶血。