侧柏树叶治疗冻疮的实验研究薛梅梅Word文档格式.docx
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据统计，我国每年大约有两亿人受到冻疮的困扰，患病群体主要为儿童、妇女及老年人。
冻疮一旦发生，在寒冷的季节里常较难快速治愈，轻者患处瘙痒难耐，重者患处疼痛溃烂，严重影响人的正常生活、工作。
现在药品市场上主要的冻疮膏如冻疮神膏、黑玉康肤膏、冻疮宝等，都未发现有添加柏树叶的成分，只要能够提取其有效成分，就能用来研究新药，从而更好地解除广大冻疮患者的痛苦，为医药事业贡献力量。
3、研究技术经济价值：
柏树为常绿乔木，在中国分布极广，北起内蒙古、吉林，南至广东及广西北部，人工栽培范围几遍全国，用其叶子做为药材取材方便，有很高的经济价值。
因此，加强对柏科药用植物综合开发和研究利用，对类似柏科这类既是中药材又是经济林木的植物的开发研究提供了一种范例和借鉴，也对实现人与自然的和谐发展、构建资源节约型和环境友好型社会、创造社会效益和经济效益双赢的局面具有重要的战略意义，从而有利于促进我国环境资源的可持续发展。
二、国内外现状、水平及发展趋势：
国内外现状、水平：
侧柏叶又名柏叶、丛柏叶、扁柏、云片柏等，是柏科植物侧柏（Platycladusorientalis）的干燥嫩枝叶。
中医认为侧柏叶气清香，味苦涩、微辛，具有凉血止血、祛风降湿、化痰止咳、消肿散毒的功效，在临床上常用于治疗出血症、风湿痹痛、高血压、咳喘烫伤等症。
明代李时珍《本草纲目》中“乃多寿之木，所以可以入服食。
道家以之点汤常饮”的记载，并总结了历代医学家对侧柏叶的功效记述，能主治“吐血衄血，痢血，崩中，赤白，轻身益气，令人耐寒暑，去湿痹，生肌。
治冷风历节疼痛，止尿血。
炙，詈冻疮。
烧取汁涂头，黑润鬓发。
敷烫火伤，止痛灭瘢。
服之，疗蛊痢。
作汤常服，杀五脏虫，益人。
”为侧柏叶的食疗养生价值做出了权威性的概括。
现代研究发现该科植物主要化学成分为挥发油、黄酮类化合物、萜烯类和酚类化合物、有机酸、多糖、木脂素、鞣质、树脂、无机元素等,具有止血、镇咳祛痰、扩张支气管、抑菌、抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用。
（一）药理研究
1、止血作用
夏斯俊等[1]进行侧柏叶水煎剂与止血敏对小鼠凝血时间的对比实验,结果显示侧柏叶水煎剂与止血敏均可显著缩短小鼠凝血时间（P<
0.01）,且二药之间无显著性差异（P>
0.05）。
侧柏叶水煎剂常用剂量为10～15g,可治疗各种出血病证,且无明显毒副作用。
赵钦祥等[2]做动物止血实验结果表明:
小白鼠给药前后凝血时间自身相比,生侧柏叶无显著性差异（P>
0.05）,两种炭制品均有极显著性差异（P<
0.01）。
由此初步证明,侧柏叶炒炭口服给药可加强其止血作用。
2、抗炎作用
梁统等[3]探讨侧柏叶醇提取物的抗炎机理,其方法是以大鼠胸腔白细胞及兔血小板为材料,用高效液相色谱法测定细胞白三烯、12羟十七碳三烯酸及12羟廿碳四烯酸的生成。
结果发现:
侧柏叶醇提取物对白细胞内白三烯B4及5羟廿碳四烯酸的生物合成有较强的抑制作用,其IC50值分别为含生药0.4mg/mL及生药0.41mg/mL。
侧柏叶醇提取物还可显著抑制血小板12羟十七碳三烯酸的生物合成。
结论是:
侧柏叶醇提取物中含有较强的抗炎成分,其作用机制与抑制花生四烯酸的代谢有关。
3、抗肿瘤活性
蒋继宏等[4]用Alamarblue法对提取的侧柏叶、种皮及种子挥发油进行了抗人肺癌细胞实验,结果表明侧柏叶、种皮和种子挥发油对肺癌细胞NCIH460有较高的抑制率,分别为86.24%、47.80%与97.73%,其中以叶挥发油和种子挥发油最高。
其中,对侧柏叶挥发油4℃低温下重结晶得到的雪松醇进行了鉴定,纯度达97.06%,对雪松醇抗人肺癌细胞实验结果发现雪松醇对人肺癌细胞NCIH460半致死浓度为44.98μg/mL。
4、抗红细胞氧化作用
丁航等发现从侧柏叶中提取的黄酮加入到红细胞悬液中可明显抑制H2O2诱发的人RBC溶血，溶血度及丙二醛的含量均下降，并随着黄酮剂量的增加，抑制作用加强，为临床应用侧柏叶防RBC氧化损伤溶血性疾病提供了实验依据。
5、抑菌作用
公衍玲等［5］采用细菌培养实验，把侧柏叶挥发油加入到分别含大肠杆菌、枯草杆菌、四联球菌、产气杆菌和金黄色葡萄球菌的平板中，观察并测量抑菌圈的大小，检测侧柏叶挥发油对上述菌种的抑制作用。
结果显示侧柏叶挥发油对金黄色葡萄球菌、四联球菌、大肠杆菌和产气杆菌都有明显的抑制作用，并且表现出不同程度的剂量依赖关系，而对枯草杆菌的抑制作用不明显。
6、对心血管系统的作用
黄酮类化合物，具有改善心脑血管循环、降低血清胆固醇、抗脂质过氧化、解痉抗过敏等方面作用。
王昌明等［2］研究发现槲皮素具有降血压、保护心肌缺血再灌注损伤等作用。
槲皮素能显著抑制血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖，对于肺动脉高压的防治具有重要作用。
黄慧等［3］实验得出槲皮素阻断肺动脉平滑肌细胞（PASMC）G0/G1期进入DNA合成的S期，且能抑制PDGF诱导的酪氨酸磷酸化程度。
通过阻断肺小动脉平滑肌细胞增生而降低肺循环阻力。
对于胸主动脉平滑肌细胞的增殖，槲皮素也有抑制作用。
可见槲皮素能抑制动脉平滑肌增殖，预防血管再狭窄。
（二）化学成分研究
1、挥发油
挥发油中含雪松烯、雪松醇、侧柏烯、侧柏酮、小茴香酮、蒎烯、石竹烯等［6］。
刘廷礼等[7]采用水蒸气蒸馏法从侧柏叶中提取挥发油,采用气相色谱-质谱法对化学成分进行鉴定,共鉴定了33个成分,占挥发油总成分的80%以上。
蒋继宏等[4]采用气-质联用法对侧柏叶、种皮和种子挥发油的化学成分进行了研究。
结果发现其含有的挥发物质种类侧柏叶、种皮和种子分别为8、31及21个成分,其挥发油成分也不尽相同;
侧柏叶含量最高的是α,α,4,8-四甲基-3,7-环癸二烯-1-甲醇和雪松醇,分别占总挥发油的27.213%与26.193%;
种皮和种子挥发油中含量最高的均是雪松醇,分别占总挥发油的28.277%和26.919%。
2、黄酮类化合物
侧柏叶黄酮类化合物中有香橙素、槲皮素、杨梅树皮素、扁柏双黄酮、穗花杉双黄酮等［8］。
张国琴等[14]对侧柏叶经石油醚（30℃～60℃）脱脂后,曾用不同浓度乙醇、甲醇作提取比较,结果发现以甲醇∶水（1∶1）为溶媒,提取液色素干扰小,黄酮成分提取完全。
通过对10批样品测定,黄酮成分平均含量达1.04%。
梁统等[9]从侧柏叶中分离纯化活性成分总黄酮,石油醚加热回流除去大部分叶绿素等脂溶性杂质,再用体积分数为50%的乙醇加热回流提取;
提取液浓缩去除乙醇后用乙酸乙酯提取,减压浓缩得粗黄酮;
粗黄酮过聚酰胺色谱柱,用体积分数为70%的甲醇洗脱,浓缩得总黄酮。
赵永光等[10]用超声波提取侧柏叶中的黄酮类成分,结果发现侧柏叶提取物在265nm、308nm、352nm处各有一吸收峰;
黄酮、黄酮醇的紫外吸收光谱在240～280nm与300～380nm间有两个主要的吸收峰。
因此初步推测侧柏叶中黄酮类化合物主要为黄酮、黄酮醇类,又根据以氢氧化钠为显色试剂作定性分析溶液呈棕黄色,故可确定侧柏叶中黄酮类化合物主要为黄酮醇类。
孙立立等[11]从侧柏炭中提取分离出槲皮素,即3,5,7,3′,4′-五羟基黄酮。
3、鞣质
丁安伟等[12]在实验中发现,侧柏叶炭样品中鞣质含量较高者,其止血作用并非最强;
而符合最佳工艺组合的样品,其鞣质含量较生品大幅度下降,但却具有非常显著的缩短动物凝血时间作用。
可见,鞣质并非侧柏炭中主要止血成分。
4、无机元素
丁航等[13]测定三个产地的侧柏叶,发现都含丰富的对人体有益的宏量元素和微量元素,其中Ca和Mg含量最高,其次是Fe、Cu、Mn、Zn、Co,而对人体有害的元素Pb、Cd含量偏低。
但不同产地侧柏叶中的各种元素的含量不同,这可能与产地的土壤、水质、气候等环境条件有关。
孙立靖等[18]测定生侧柏叶和各种炮制规格的饮片中发现均含有7种人体必需的微量元素Cu、Fe、Zn、Cr、Mn、Co、Ni以及4种人体必需的常量元素K、Na、Ca、Mg,在这些元素中K、Na、Ca、Mg、Cu、Fe、Zn的含量较高,尤其Mg和Ca含量非常丰富。
发展趋势：
侧柏叶在皮肤科的运用广泛,剂型多种多样,从药理学研究的角度来看,其运用于临床相对较为安全。
在治疗中怎样发挥侧柏叶单味药治疗皮肤病的长处,结合西医药起效快、作用明确的特点,充分发挥中西医结合的优势,这是值得今后深入探讨的。
目前文献报道侧柏叶的主要成分是黄酮类化合物,而且主要针对黄酮类化合物的含量测定,从其中提出的单体化合物只有对槲皮素和槲皮苷的报道。
而黄酮类化合物成分甚多,不能只局限于槲皮素和槲皮苷,故对侧柏叶中黄酮类成分的研究有待进一步深入。
参考文献：
[1]杨智蕴，田作霖，刘群，等.朝鲜崖柏叶挥发油化学成分研究.东北师大学报（自然科学版），1994，16
（1）：
136-140.
[2]NakanishiT.北美西部圆柏叶中2个新的酚苷类成分.国外医学·
中医中药分册，2004，26
（1）：
56.
[3]王武宝，巴杭，阿吉艾克拜尔·
艾萨，等.新疆圆柏化学成分研究.天然产物研究与开发，2005，17（5）：
588-591.
[4]李鹏，王鲁石，唐辉.新疆地产侧柏叶挥发油成分的气相色谱-质谱联用.时珍国医国药，2006，17（6）：
951.
[5]崔艳秋，南蓬，林满红，等.圆柏和龙柏主要挥发物及其抑菌和杀菌作用.环境与健康杂志，2006，23
（1）：
63-65.
[6]帝马尔·
丹增彭措.晶珠本草.上海：
上海科学技术出版社，1986，60，71.
[7]刘廷礼，邱琴，赵怡，等.侧柏叶挥发油成份的GC-MS分析.中药材，2000，23（8）：
460-461.
[8]TsumuraY,YoshinuraK,TomaruN,etal.MolecularphylogenyofconifersusingRFLPanalysisofPCR-amplifiedspecificchloroplastgenes.TheorApplGenet,1995,91:
1222-1236.
[9]郝德君，张永惠，戴华国，等.气相色谱/质谱法分析柏树叶挥发油的化学成分.色谱，2006，4
（2）：
185-187.
[10]黄宝华，海景，黄惠民，等.超临CO2萃取刺柏中的挥发性成份分析.中药材，1997，20
（1）：
30-31.
[11]李春香.杉科、柏科的系统发生分析————来自28SrDNA序列分析的证据.遗传，2003，25
（2）：
177-180
[12]GadekPA,AlpersDL,HeslewoodMM,etal,relationshipwithinCupressaceassensulatoacombinedmorphologicalandmolecularapproachAmerJBot,2000,87（7）:
1044-1057.
[13]
蔣继宏，李晓储，高甜惠.几种柏科植物挥发物质及抗肿瘤活性初步研究.福建林业科技，2006，33
（2）：
52-60
三、研究的阶段性目标、最终目标及采用的实验方法：
阶段性目标：
一、复制鼠尾冻疮模型
二、用已得到临床应用的一款冻疮膏与柏树叶对小鼠进行治疗，比较两者治疗效果，初步验证柏树叶治疗冻疮的效果
三、比较大、中、小剂量侧柏树叶对鼠尾冻疮的治疗效果
最终目标：
进一步挖掘侧柏树叶的药用价值，扩大其应用范围，为开发安全、有效的新冻疮药打下理论基础。
实验方案：
1、实验材料：
昆明种小鼠50只，雌雄半各兼有，体重18-22g相近。
无水乙醇，新鲜侧柏树叶，研钵，冻疮膏，纱布，医用胶布，恒温水浴锅，低温冰箱，游标卡尺。
2、实验方法：
2.1鼠尾冻疮模型制备：
无水乙醇置-60℃低温冰箱制备成-42℃冰乙醇，将小鼠尾浸入冰乙醇，待浸入部分颜色全部变白冻结并持续10秒后，擦干移入饲养笼，常规喂养。
2.2实验分组：
造模后根据鼠尾冻疮程度将小鼠按程度高低均匀的分配到各组，实验组30只，对照组10只，空白组10只。
2.3治疗：
实验组小鼠等分为I、II、III三个小组：
I组：
取干净新鲜侧柏叶于研钵中捣碎，取10g捣碎物外敷于鼠尾冻疮处，用纱布和医用胶布包扎；
II组：
取20g侧柏树叶的捣碎物外敷于鼠尾冻疮处，用纱布和医用胶布包扎；
III组：
取30g侧柏树叶的捣碎物外敷于鼠尾冻疮处，用纱布和医用胶布包扎；
对照组：
取适量冻疮膏涂抹于鼠尾冻疮处，用纱布和医用胶布包扎；
空白组：
将适量蒸馏水抹于鼠尾冻疮处，用纱布和医用胶布包扎；
治疗从冻疮模型制备的第二天开始，每天换药一次，持续10天，环境温度为10～20℃。
治疗前后分别测试并记录鼠尾长度。
2.4统计学方法分析实验结果
四、研究进度
2010年9月:
组队,查询文献资料，确定所要研究的科研项目。
2010年10月初：
对相关资料进行讨论、筛选、整理。
2010年10月中、末：
寻找与该科研研究方向相近的指导老师，在老师的指导下填写标书。
2010年11月至12月：
准备好实验相关器械、材料，实验前人员分配，在老师指导下进行实验。
2010年12月下旬：
对现阶段完成的实验进行交流、讨论，对于实验中存在的问题进行总结，讨论解决方法，完善下阶段实验计划。
2011年1月至2011年5月：
进行下阶段的实验，每月写一份实验报告。
2011年6月：
对实验结果进行统计、分析，得出结论。
五、申请经费金额（写明经费总数及需要的理由）：
昆明种小鼠购买以及饲养：
￥800
无水乙醇（1升）：
￥50
医用纱布和胶布：
￥150
冻疮膏：
￥100
资料费及其他杂费：
￥200
其余实验材料借用于学校实验室
合计：
￥1300
六、课题主要成员
负责人
姓名
性别
年龄
参加
月数
课题中的分工
所在班级
签名
薛梅梅
女
21
6
组织队员、分配工作
08临床乙班
主要参加人员
纪艳玲
女
20
4
统计分析结果、查找相关资料
白枸橼
21
填写标书、整理后期材料
08临床乙班
魏初灏
男
3
负责模型制备、配合查找资料
郑蓬
3
参与治疗过程、参与讨论、提出问题
郑津荣
22
4
参与治疗过程、整理相关资料
张德伟
参与讨论、提出问题、参与治疗
指导老师
姓名
职称
专业
工作单位
程再兴
33
讲师
中药药理学
福建中医药大学药学院
七、课题结束后的计划：
2011年9月，10月
在老师的指导下整理出该科研的论文形式并发表，然后继续研究相关的科研内容。
八、所在院系审核意见：
年月日（盖章）
九、校团委审核意见：
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