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抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。

6.实验材料：

6.1每个试剂均购自德国DadeBehringMarburg公司。

1）PT-FIB测定试剂盒（代号P/N:

84688210）

兔脑促凝血激酶10mLX8瓶

2）定标血浆CalibrationPlasma（代号P/N:

20003700）

3）参比液ReferenceEmulsion（代号P/N:

9756900）

4）因子稀释液Factordiluent（代号P/N:

9757600）

5）正常质控血浆Normalcontrolplasma（代号P/N:

20003110）

6）低水平质控血浆AbnormalcontrolplasmalevelI/Low（代号P/N:

20003210）

7）高水平质控血浆AbnormalcontrolplasmalevelII/High（代号P/N:

20003310）

注：

促凝血酶原激酶

当用不同的促凝血酶原激酶，或用不同的检测方法（手工、半自动、全自动）做PT测试时，其秒数结果将会有较显著的差异。

而对于口服抗凝药的病人来说，需要一个能进行比较的PT结果。

国际血液血标准委员会（ICSH）及国际血栓与止血委员会（ICTH）建议，根据试剂的ISI值（国际敏感度指数）计算INR值（国际标准化比值），并以INR值作为PT的通用结果报告。

根据经验及文献报道，试剂的灵敏度一手测试方法及机器自动化程度的影响。

但美国贝克曼库尔特公司提供的PT-FIB试剂，每一批号都经过了严格的测试，与ICSH及ICTH的参考品有很好的相关性，其ISI值均注明在试剂盒说明书中。

在ACL7000上，当输入试剂的ISI值后，机器会自动给出INR值。

INR=（PTRatio）ISI

6.2试剂准备

用8mLNCCLSII型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶促凝血激酶，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

6.3试剂保存

未开封的试剂可保存在2～8oC至试剂盒上标明的有效期。

试剂溶解后，于原瓶中2～8oC，3天内有效；

在ACL7000上（15oC），8小时有效。

建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2～8oC。

7.仪器设备：

7.1仪器名称：

syxmexCA7000全自动血凝仪

7.2仪器厂家：

日本希森美康公司

7.3仪器型号：

CA7000

7.4仪器技术参数：

7.4.1试剂位：

18个，具冷藏功能。

7.4.2样本位：

40个，可通过换盘连续添加。

7.5仪器校准程序：

7.5.1校准频率：

当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。

7.5.2校准操作：

设置标准曲线分析（由仪器提供商指定工程师执行）。

8.操作步骤：

8.1开机：

CA7000的开关在仪器的右侧。

开机后仪器自检，当屏幕上边显示Ready时可进行试检

8.2洗针：

在主屏幕上选RinseProbe键，然后按Execute进行洗针

8.3检查消耗品：

1.准备反应杯：

打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。

2.准备试剂：

按照仪器对试剂的要求，把每一项的试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。

如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选ReagentSetting，按屏幕显示位置放置试剂。

注意：

共三个位置放清洗液。

3.查看仪器的洗液瓶和废液瓶

8.4准备标本：

将样本离心好，放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。

8.5输入检测项目：

主菜单上的按下Worklist键，进入工作菜单。

输入项目，直接点击相应的实验项目键

重复：

按屏幕下菜单的REPEAT键，在屏幕弹出的键盘上输入相应测试数，仪器会自动重复与光标所在位置相同的测试信息。

输入样本号：

按屏幕下菜单的IDNO.Entry按顺序输入样本的序号或病人的病历号。

开始检测：

录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START键，开始检测

查看结果：

返回到主屏幕，检测的项目如果由○变成●表明此试验已经完成。

按下StoredDate键，出现已存储结果界面，屏幕显示已完成的测试的信息。

如果查看反应曲线，按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误信息等。

8.6洗针：

当做完一批标本后，需要洗针，按下RinseProbe然后按下Execute进行洗针

8.7关机：

回到主屏幕下，在洗完针后方可关机，切断电源，同时关闭压力泵和总电源。

9.检验结果的判断与分析：

9.1仪器测定PT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT秒数、PT活动度、INR值等参数。

若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息：

﹡﹡﹡.﹡出现错误，不能得到分析数据

ˉˉˉ.ˉ不能计算参数

＋＋＋.＋数值超出线性范围.

9.2仪器设定PT参考范围在10-14秒，如果得不到一个正常数值，在数据的左侧将出现下列标记：

﹡出现错误信息

<

数据低于可报告的低限

>

数据高于可报告的高限

10.质量控制：

每批样本同时测定两个浓度水平（正常值和高值）的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

每个实验室均应建立自己的质控均值和SD值以检测实验质量。

至少每8小时做一次质控分析。

用Westgard等方法进行质控数据的分析和处理，评定质量情况。

请参考CA7000全自动血凝仪操作手册。

11.临床意义：

PT是用于筛查外源性凝血系统（Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ）及口服抗凝药物剂量（如华发令、双香豆素等）的检测项目。

11.1参考范围：

秒数S：

12-16S（患者结果超过正常对照35以上有临床意义）

活动度：

80-120％

国际标准化比值INR：

0.8-1.5

11.2PT延长：

见于先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏；

低（无）纤维蛋白原血症；

获得性见于急性DIC消耗性低凝期、原发性纤溶症、维生素K缺乏、广泛而严重的肝脏实质性损伤（如急性重症肝炎及肝硬化）、血循环中有抗凝物质（如口服抗凝剂、肝素）。

11.3PT缩短：

见于先天性凝血因子V增多、口服避孕药、高凝状态（DIC早期、急性心肌硬塞等）、血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓性静脉炎）、多发性骨髓瘤、洋地黄中毒、乙醚麻醉后。

11.4监测口服抗凝药（如华发令、双香豆素等）的重要指标。

一般要求：

PT（S）：

18-24SINR：

2.5-3.5，不同疾病不同值。

口服抗凝剂“华发令”，预期值约为参考植的2倍，PT活动度参考值为75%-120%，降低到＜40%可能有出血倾向。

12.变异的潜在来源

12.1抗凝剂：

草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查

12.2标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。

12.3纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。

12.4超剂量使用肝素使凝固时间延长。

12.5FDP增加使凝固时间延长。

12.6某些药物，如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。

12.7血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。

游离血红蛋白胆红素甘油三脂肝素

PT100mg/dl15mg/dl700mg/dl0.5U/ml

FIB100mg/dl15mg/dl700mg/dl1.0U/ml

FDP对PT-FIB的影响比对FIB-Clauss法小。

13.操作注意事项：

干粉试剂及质控血浆溶解

13.1确认溶剂类型，一般溶解液包括：

蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书要求使用。

13.2溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。

14.仪器维护与保养

14.1每日保养：

14.1.1开机前观察样品参比液液面，看是否够做测定。

14.1.2注意检查液面水平并倒空废液瓶，确保废液能顺利流入废液瓶。

14.1.3让开关机尽量减少到最少。

14.1.4检查废反应盘杯，必要时倒空废反应盘杯。

14.1.5在每天工作前和工作后，执行冲洗程序：

按“PROG”，显示应用菜单，选择“PRIMING”，按“ENTER”确认。

14.2每周保养

14.2.1清洁仪器表面，标本区域内壁和分析腔。

14.2.2进入清洁程序清洁吸样针

14.2.3清洁冲洗/废液池。

14.3每月保养

清洁空气过滤网

14.4根据需要

14.4.1清洁废液管路

14.4.2清洁溢出的样本

14.4.3更换吸样针组件

14.4.4调整吸样针位置

14.4.5对吸样针/试剂针排污处理

15.参考文献

15.1叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版，东南大学出版社.

15.2CA7000全自动血凝仪操作手册

活化部分凝血活酶时间（APTT）测定

将试剂加入抗凝血浆中，试剂中的微粒硅胶是血小板因子3的表面活性剂，与牛脑磷脂一同作用于内源凝血系统，当加入CaCl2后，开始凝集，产生纤维蛋白血凝块，通过660nm光照射血浆，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出活化部分凝血活酶时间。

抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作该项目检测。

1）APTT测定试剂盒（代号P/N:

8468710）

冻干脑磷脂5瓶

CaCl25瓶（25mmol/L）

20003700）

3）正常质控血浆Normalcontrolplasma（代号P/N:

20003110）

4）低水平质控血浆AbnormalcontrolplasmalevelI/Low（代号P/N:

5）高水平质控血浆AbnormalcontrolplasmalevelII/High（代号P/N:

6）因子稀释液（代号P/N:

9757600）

用9mLNCCLSII型或相同质量的蒸馏水溶解1瓶冻干脑磷脂，盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

脑磷脂：

试剂溶解后，于原瓶中2-8oC，7天内有效；

在ACL9000（15oC），8小时有效。

CaCl2：

于原瓶中2～8oC，30天内有效。

建议试剂不使用时，最好将其倒回原瓶中，保存于2～8oC，不要将试剂冷冻。

syxmexCA7000全自动血凝仪

日本西森美康公司

9.1仪器测定APTT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT秒数，若不能对参数进行正确计算，将出现下列信息：

9.2仪器设定APTT参考范围在24-36秒，如果得不到一个正常数值，在数据的左侧将出现下列标记：

每批样本同时测定三个浓度水平（正常值低值和高值）的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。

APTT常用于内源性凝血系统（Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子）的筛选及肝素抗凝治疗的监测。

11.1参考范围：

24-36秒（患者结果超过正常对照10秒以上为异常）

11.2APTT延长：

见过先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接触因子Ⅷ、Ⅺ、Ⅻ缺乏、VWF等）；

多种凝血因子缺乏（如严重肝病、维生素K缺乏、DIC、纤溶亢进等）；

血液中有抗凝物质存在。

11.3APTT缩短：

见于凝血因子Ⅷ、Ⅹ活性增高、血小板增多症

高凝状态：

DIC高凝期、不稳定性心绞痛、脑血管病变、糖尿病血管病变、脑梗塞、深静脉血栓、妊趁高血压综合症和肾炎综合症，静脉穿刺不顺利混入组织液。

11.4是监测肝素治疗的首选指标：

肝素抗凝治疗中APTT的预算期为正常值的1.5-2.5倍。

草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查。

12.2标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力使标本溶血，造成结果变异。

12.3纤溶药物的影响（如双香豆素、链激酶、尿酶等），超剂量使用肝素。

12.4FDP增加使凝固时间延长。

12.5某些药物的影响（如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等）。

12.6血浆中下列物质低于指定浓度时对结果无影响。

游离血红蛋白胆红素甘油三脂

APTT100mg/dl15mg/dl700mg/dl

15.2CA7000全自动血凝仪操作手册

凝血酶时间（TT）测定

将试剂加入抗凝血浆中，试剂中的牛凝血酶可直接作用血浆中的纤维蛋白原生成纤维蛋白凝块，通过660nm光照射血浆，凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定，然后通过标准曲线求出凝血酶时间。

2.1早晨空腹采血（空腹12小时左右）,静脉采血。

2.23.8％（w/v）枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。

抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。

1）TT测定试剂盒（代号P/N:

9758515）

冻干牛凝血酶（含缓冲液和稳定剂）4瓶

浓缩稀释液（含CaCl2500mmol/L、缓冲液、防腐剂）1瓶

稀释液中含有叠氮钠，在金属铅制品中可形成爆炸性叠氮化物，应适当处理。

浓缩稀释液：

用蒸馏水1：

5（1+4）稀释浓缩的稀释液。

冻干牛凝血酶：

根据样品来源和分析需要来制备。

稀释好的稀释液/1瓶

凝血酶浓度

筛选实验

5.0ml

3.0uNIH/ml

8.0ml

1.9uNIH/ml

肝素治疗

2.0ml

7.5uNIH/ml

盖上盖子，轻摇至完全溶解，置15～25oC30分钟，用前摇匀，勿用力振摇。

稀释好的稀释液在15～25oC可保存1个月；

牛凝血酶溶解后，于原瓶中2～8oC，15天内有效

syxmexCA7000全自动血凝仪

如果查看反应曲线，按下边菜单第一项Gragph查看凝集趋势、吸光度、错误