版高考生物总复习第34讲无菌操作技术实践教案苏教版Word文档下载推荐.docx

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（2）营养组成：

一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

（3）种类

①按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。

②按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。

③按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。

2.无菌技术

（1）含义：

在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

（2）常用方法

3.大肠杆菌的纯化培养

（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

→

（2）纯化大肠杆菌的方法

①纯化培养原理：

想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。

②纯化大肠杆菌的关键步骤：

接种。

③常用的微生物接种方法有两种

a.平板划线法：

是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

如图所示：

b.稀释涂布平板法：

是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

（3）菌种的保存方法

①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

点悟：

（1）用稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目“低”。

这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。

而显微计数法由于不能区分死菌与活菌，故所得数值可能比实际值“偏高”。

（2）平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。

下图中图1为“倒平板”相关操作，图2为微生物接种方法。

请思考：

（1）请用文字和箭头写出图1中正确的倒平板操作流程。

提示　C→B→A→D

（2）图示B为何需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？

为何需进行D操作？

提示　B操作是通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

D操作是平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

（3）图2中E、F依次利用何种方法进行接种？

其接种工具依次是什么？

其接种后效果图解应如图中a还是b？

提示　平板划线法　稀释涂布平板法　接种环　涂布器　E—a、F—b

　微生物实验室培养及无菌操作技术

1.（2018·

全国卷Ⅱ，37）[生物——选修1：

生物技术实践]

在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。

回答下列问题：

（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具　　　　（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。

（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是____________________________________。

（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能　　　　。

在照射前，适量喷洒　　　　，可强化消毒效果。

（4）水厂供应的自来水通常是经过　　　　（填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。

（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是　　　　。

解析　

（1）在实验室中，能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属材质的实验器具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。

（2）巴氏消毒法或高温瞬时消毒法与煮沸消毒法相比，其优点表现为在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。

（3）紫外线照射能消毒的原因是其能够破坏微生物细胞中的DNA分子。

在利用紫外线照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可强化消毒效果。

（4）自来水通常采用氯气消毒。

（5）采用高压蒸汽灭菌时，若压力达到设定要求，而温度未达到相应要求，最可能的原因是没有排尽高压蒸汽灭菌锅内的冷空气。

答案　

（1）可以　

（2）在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少　（3）破坏DNA结构　消毒液　（4）氯气　（5）未将锅内冷空气排尽

2.（2019·

东北师大附中调研）大肠杆菌是遗传学和微生物学中经典的模式生物。

科研人员要对大肠杆菌进行研究，首先要纯化大肠杆菌，请结合所学知识，回答下列问题：

（1）纯化大肠杆菌首先需要制备　　　　培养基。

在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑　　　　、温度等条件。

（2）可以估算出样品中大肠杆菌密度的接种培养方法是　　，估算值一般比实际值偏　　　　（填“大”或“小”）。

（3）滤膜法可计数水样中的大肠杆菌。

将过滤过待测水样的滤膜紧贴在培养基上，这属于微生物培养中　　　　操作。

根据培养基的物理状态来分，该培养基属于　　　　培养基。

（4）如图是大肠杆菌的纯化培养的一种方法，1→2→3→4→5表示操作顺序，培养后可观察到所需菌落的区域是　　　　，接种结束后将培养皿　　　　放入恒温箱中培养。

解析　

（1）纯化大肠杆菌首先需要制备牛肉膏蛋白胨固体培养基。

大肠杆菌的培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。

（2）接种大肠杆菌最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，其中可以估算出样品中大肠杆菌密度的是稀释涂布平板法。

由于两个或两个以上细胞聚集在一起，观察到的往往是一个菌落，故估计数值一般偏小。

（3）过滤过待测水样的滤膜紧贴在培养基上，是将样品中的大肠杆菌接种到培养基上，固体培养基适于计数。

（4）图中5区域就可得到所需要的菌落。

接种结束后要将平板倒置放入恒温箱中培养。

答案　

（1）牛肉膏蛋白胨固体　渗透压（或酸碱度）

（2）稀释涂布平板法　小

（3）接种　固体　（4）5　倒置

1.无菌技术

条件

结果

常用方法

应用范围

消毒

较为温和的物理或化学方法

仅杀死物体表面或内部的部分微生物

煮沸消毒法

日常用品

巴氏消毒法

不耐高温的液体

化学药剂消毒法

用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源

灭菌

强烈理化因素

杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

灼烧灭菌法

接种工具

干热灭菌法

玻璃器皿、金属用具

高压蒸汽灭菌法

培养基及容器

2.两种纯化细菌的方法的比较

比较项目

平板划线法

稀释涂布平板法

关键操作

接种环在固体平板培养基表面连续划线

①一系列的梯度稀释

②涂布平板法操作

注意事项

每次划线前后均需灼烧接种环

稀释度要足够高，为确保实验成功可以增加稀释度的范围

菌体获取

在具有显著菌落特征的区域的菌落中挑取菌体

从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体

优点

可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落

既可以获得单细胞菌落，又能对微生物进行计数

缺点

不能对微生物计数

操作复杂，需要涂布多个平板

考点二　微生物的筛选和计数

1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

（1）原理与流程

（2）统计菌落数目时，培养基表面生长的1个菌落，来源于样品稀释液中1个活菌。

为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。

（3）从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数的计算方法是（平均菌落数C÷

涂布的稀释液体积V）×

稀释倍数M

利用稀释涂布平板法成功统计菌落数目的关键是恰当的稀释度

（4）实验结果分析与评价

2.分解纤维素的微生物的分离

（1）纤维素酶及纤维素分解菌筛选原理、方法

（2）实验流程

（3）分离纤维素分解菌所用的两种培养基比较

分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。

①选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长。

②鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，细菌可在培养基上形成肉眼可见的菌落。

③刚果红染色法应用于鉴别（选择、鉴别）培养基。

3.菌株筛选原理的比较

土壤中分解尿素的细菌

分解纤维素的微生物

①选择培养基的成分：

尿素作为唯一的氮源

②鉴定方法：

在培养基中加入酚红指示剂，若pH升高，指示剂变红，说明细菌能分解尿素

纤维素作为唯一的碳源

刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈

全国卷Ⅰ，37）[生物——选修1：

将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。

在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。

（1）M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制　　　　的生长，加入了链霉素的培养基属于　　　　培养基。

（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有　　　　（答出两点即可）。

氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有　　　　（答出两点即可）。

（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。

加入的显色剂是　　　　，该方法能筛选出产生淀粉酶微生物的原理是_____________________________。

（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：

甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；

乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。

有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是____________________________________。

解析　

（1）在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。

若M培养基是用于真菌的筛选，则应加入链霉素以抑制细菌的生长，其属于选择培养基。

（2）马铃薯浸出液中含有淀粉、蛋白质、脂质、无机盐、水等多种物质，因此，除氮源外其中还有微生物生长所需要的碳源、无机盐等营养要素。

进入细胞的氮源可参与合成蛋白质、核酸（DNA、RNA）等含氮的生物大分子。

（3）加入显色剂碘液后，淀粉遇碘变蓝，而淀粉的水解产物则不发生这种反应。

若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，土壤中能产生淀粉酶的微生物可将淀粉分解，菌落周围就会出现透明圈，这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选能产生淀粉酶的微生物了。

（4）乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，结果的重复性太差，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。

答案　

（1）细菌　选择　

（2）碳源、无机盐　蛋白质、核酸

（3）碘液　淀粉遇碘液显蓝色，产生淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈　（4）乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差

山东湖北部分重点中学联考）从土壤中分离尿素分解菌和纤维素分解菌，具有下列类似的操作过程：

（1）在过程④的选择培养基是　　　　培养基，过程⑧的选择培养基是　　　　培养基。

（填“固体”或“液体”）。

④的具体措施是_________________；

⑧的选择