基因工程Word文档格式.docx
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质粒载体的基本要素和类型;
l噬菌体的分子生物学;
l噬菌体载体的克隆原理及步骤;
M13噬菌体的生物学;
M13噬菌体载体组成;
噬菌粒的组成和特征。
质粒载体的基本要素;
a-互补作用;
M13噬菌体在感染细胞中的复制;
噬菌粒组成特点。
第四章人工染色体载体
黏粒载体的结构特征和工作原理;
YAC载体的复制元件和标记基因及工作原理;
细菌人工染色体载体的结构和工作原理;
P1噬菌体载体和P1人工染色体载体的组成。
黏粒载体、YAC载体、细菌人工染色体载体的工作原理;
P1噬菌体的分子遗传特征。
第五章表达载体
大肠杆菌表达载体的结构;
利用T7噬菌体启动子的表达载体;
表达融合蛋白的表达载体;
表达产物的纯化;
大肠杆菌/革兰氏阳性细菌穿梭载体;
大肠杆菌/酵母菌穿梭载体;
基因插入、基因敲除概念;
随机插入突变载体。
大肠杆菌中T7启动子表达调控;
穿梭载体概念;
基因插入、基因敲除概念。
第六章基因操作中大分子的分离和分析
碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA;
电泳原理;
DNA片段的纯化方法;
RNA提取和纯化;
分子杂交类型和原理;
RNA作图和端点分析原理;
重组DNA分子导入大肠杆菌的方法。
碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理;
第七章基因芯片技术
生物芯片的定义;
生物芯片分析流程;
生物芯片分类;
基因芯片的制作。
第八章PCR技术及其应用
PCR技术原理;
PCR产物的克隆;
PCR扩增未知DNA片段;
与反转录相关的PCR;
PCR产生DNA指纹;
实时定量PCR。
A/T克隆法;
反向PCR;
热不对称交错PCR;
5’-RACE和3’-RACE;
实时定量PCR原理。
第九章DNA序列分析
Maxam-Gilbert化学降解法;
Sanger双脱氧链终止法;
DNA片段序列测定的策略。
Sanger双脱氧链终止法原理和步骤
第十章DNA诱变
随机诱变;
DNA体外重组;
寡核苷酸介导的定点诱变;
嵌套缺失。
错误掺入诱变、盒式诱变;
DNA洗牌法和交错延伸重组;
寡核苷酸介导的定点诱变。
第十一章DNA文库的构建和目的基因的筛选
基因组DNA文库的构建;
cDNA文库的构建;
基因克隆的筛选策略。
文库的代表性和随机性;
基因组DNA文库的构建流程;
cDNA文库的构建。
第十二章基因组研究技术
基因组遗传图谱的构建;
基因组物理图谱的构建;
基因组测序;
基因组功能分析;
基因组工程。
基因组图谱的类型和构建
第十三章植物基因工程
植物基因工程方法;
转化子细胞的筛选;
转化体的鉴定与证实。
原生质体介导法和根癌农杆菌介导法;
根癌农杆菌Ti质粒介导的基因转化的分子机理;
选择基因和报告基因。
第十四章动物基因工程
动物转基因技术;
转基因动物制备。
动物基因工程载体;
基因敲除和基因敲入;
基因转移技术;
转基因动物的制备和鉴定。
第十五章酵母基因工程
常用的酵母表达系统。
不同类型的酵母表达系统。
第十六章细菌基因工程
细菌基因工程的表达系统。
表达系统构建原则;
外源基因表达方式;
枯草芽孢杆菌的表达载体。
第十七章病毒基因工程※
病毒载体;
病毒与基因工程。
动物病毒载体类型;
基因工程病毒疫苗。
第十八章医药基因工程※
基因工程蛋白和多肽药物;
基因工程抗体;
核酸类药物。
抗体的结构特点;
反义RNA;
RNA干扰;
基因治疗
综合测试题一
一、写出下列英文或英文缩写符号的中文名称(每个2分,共20分):
1.RNase
2.restrictionendonuclease3.Plasmid
4.SDsequence5.MCS6.IPTG7.YAC
8.ori
9.promotor10.Klenowfragment
二、比较下列各组概念(每题5分,共20分):
1.宿主细胞的限制和修饰作用
2.
pBR322和pUC载体
3.
核酸水解酶和限制性内切酶
4.DNA文库和cDNA文库
三、判断题(每题2分,共20分):
1.Ⅱ型限制性核酸内切酶识别与切割的序列有严格特异性。
2.大肠杆菌DNA连接酶既可以连接黏性末端DNA,也可以连接平齐末端DNA。
3.Klenow片段来自于大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的N末端,具有聚合酶活性和3→5外切酶活性。
4.逆转录酶是依赖于DNA的DNA聚合酶。
5.-互补筛选法中,含重组质粒的转化子在生色诱导培养基上只能形成蓝色菌落。
6.当外源蛋白以包涵体形式表达后就无法恢复其生物学活性。
7.Southernblotting是DNA与DNA杂交的技术。
8.将外源基因导入培养的哺动物细胞的常用方法中不包括氯化钙法。
9.Sanger的双脱氧末端终止法DNA序列测定中不需要ddNTP。
10.禽流感(avianinfluenza)是由A型流感病毒引起的一种烈性传染病。
该病毒的核酸类型为负链单股RNA病毒。
四、问答题:
(每题8分,共40分):
1.分离纯化核酸总的原则是什么?
2.基因工程载体应具备哪些特点?
3.简述分子克隆的基本流程?
4.什么是重组子筛选?
主要有哪些方法?
5.利用原核细胞表达真核基因是比较困难的,主要表现在哪些方面?
综合测试题二
1.Reversetranscriptase
2.transferredDNA(T-DNA)
3.TiPlasmid
4.restrictionendonuclease
5.MultiplecloningSite
6.IPTG
7.Plasmid
8.HAT
9.SDsequence
10.YAC
二、解释概念(每题4分,共20分):
1.双元载体系统
pUC载体
噬菌体的溶菌途径
4.cDNA文库
5.SouthernBlotting
三、判断题(每题1分,共10分):
1.I型限制性核酸内切酶识别与切割的序列都有严格特异性。
3.在土壤农杆菌中仅存在Ti质粒。
6.在T链复合物中,T链含有核定位信号。
7.细菌质粒DNA提取后,电泳检测只可能出现一条DNA条带。
8.在正常的非转基因植物中报告基因如gus等编码的酶及其所催化的反应是存在的。
10.当外源蛋白以包涵体形式表达后就无法恢复其生物学活性。
四、简答题(每题6分,共30分):
3.简述根癌农杆菌侵染植物的分子机理。
4.画出生产转基因动物的步骤示意图。
五、论述题(每题10分,共20分):
1.论述分子克隆技术流程?
在课程实验中,采用什么克隆载体?
其特点是什么?
2.什么是PCR?
该技术的基本原理是什么?
举出2种PCR技术?
综合测试题三
一、写出下列英文中文名称并解释(每个2分,共20分):
1.bluntend
2.Deoxyribonuclease
3.Plasmid
4.SDsequence
5.MCS
6.Vactor
7.RFLP
8.AFLP
9.DDRT-PCR
10.Klenowfragment
二、比较下列各组概念(每题4分,共20分):
1.宿主细胞的限制和修饰作用
核酸水解酶和限制性内切酶
4.DNA文库和cDNA文库
5.SOUTHERNBIOTTING和WESTERNBIOTTING
三、判断并改错(每题1分,共10分):
1.所有限制性核酸内切酶识别与切割的序列都有严格特异性。
(每题5分,共30分):
1.分离纯化核糖核酸(RNA)应注意什么?
2.简述根癌农杆菌侵染植物的分子机理。
3.简述表达载体构建的一般原则。
4.简述建立植物转化受体系统的主要考虑因素。
6.简述基因导入动物细胞的方法。
五、论述题(每题10分,共20分)
1.画出生产转基因动物的步骤示意图。
2.什么是PCR?
一、比较下列各组概念(每小题5分,共20分。
)
1.PCR和RT-PCR
2.噬菌粒载体和黏粒载体
3.琼脂糖电泳和聚丙烯凝胶电泳
4.基因打靶和同源重组
二、判断题(每小题1分,共10分。
1.甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变,是导致一些酶的星活性的主要原因之一,防止的办法是在酶切反应体系中,将甘油的浓度控制在5%以下。
【
】
2.T4DNA连接酶和E.coli连接酶作用时都需要ATP和NAD+作为辅助因子。
【
3.用同一种酶切割载体和外源DNA得到黏性末端后,为防止它们自身环化,要用CIP将它们都脱磷酸。
4.有a、b、c三个质粒,因为a和b能够共存于一个细胞,a和c也可共存于同一个细胞,所以